检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2013年第2期37卷 118-121,125页

作者：闫小娟张义全王丽刘梦颖杨世亚杨瑞馥周冬生邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利... 详细信息

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(ΔopaR)中表达水平的差异。结果成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白;Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符。结论成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究。

关键词：副溶血弧菌生物膜 Western印迹

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鼠疫菌OxyR调控子蛋白对rovA基因的转录调控研究

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动物医学进展 2013年第12期34卷 60-64页

作者：倪斌刘磊黄新祥韩延平江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

应用分子生物学技术,开展鼠疫菌调控子蛋白OxyR对rovAR的转录调控机制研究。提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸试验研究rovAR的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对rovAR的调控关系。构建克隆有rovAR... 详细信息

应用分子生物学技术,开展鼠疫菌调控子蛋白OxyR对rovAR的转录调控机制研究。提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸试验研究rovAR的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对rovAR的调控关系。构建克隆有rovAR上游启动子区的lacZ重组质粒,将重组质粒转入WT和ΔoxyR中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较2株重组菌中的rovAR启动子活性,进一步验证OxyR对rovAR的调控关系。进而利用大肠埃希菌OxyR识别基序,预测OxyR对rovAR启动子区的结合位点。发现rovAR的2个转录起始位点均受OxyR的激活,且rovAR启动子区具有可能的OxyR结合位点。推测OxyR能直接结合到rovAR启动子区而激活其转录表达。

关键词：鼠疫耶尔森菌 OxyR rovAR 转录调控

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人β防御素1～4抑菌及盐敏感性研究

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安徽医科大学学报 2013年第8期48卷 885-889页

作者：郭峰李涛韩燃房华丽罗森王琴高剑峰王慧石河子大学生命科学学院石河子832003 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对人β防御素(hBD)1～4的抑菌及盐敏感性进行测定并分析其二级结构对抑菌及盐敏感性的影响。方法圆二色谱预测hBD 1～4的二级结构,应用抑菌实验来测定抑菌效力,提高溶液中的NaCl浓度来进行盐敏感性分析。结果获得了4种hBD的圆二色... 详细信息

目的对人β防御素(hBD)1～4的抑菌及盐敏感性进行测定并分析其二级结构对抑菌及盐敏感性的影响。方法圆二色谱预测hBD 1～4的二级结构,应用抑菌实验来测定抑菌效力,提高溶液中的NaCl浓度来进行盐敏感性分析。结果获得了4种hBD的圆二色谱谱图并进行分析。实验发现hBD-1抑菌活力低,抑菌谱窄,hBD-2、hBD-4抑菌活力好于hBD-1,抑菌谱也更广,但是对盐耐受力差,而hBD-3在这4种防御素中拥有最强的抑菌活性及耐盐效力。结论 4种hBD具有不同的抑菌活性和盐敏感性。防御素的理化性质与二级结构共同决定了抑菌活力及其盐敏感性。

关键词：人β防御素抑菌活性盐敏感性圆二色谱抗菌谱

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中国蠓科(双翅目)一新种及三新纪录种记述

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动物分类学报 2013年第2期38卷 372-376页

作者：虞以新严格刘国平刘增加军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 沈阳军区疾病控制中心沈阳110034 兰州军区疾病预防控制中心兰州730020

记述了毛蠓属中国3新纪录种及蠛蠓属1新种,它们分别是:共同毛蠓Dasyhelea communisKirffer、黄腹毛蠓Dasyhelea luteoventris Goetghebuer、黄色毛蠓Dasyhelea lutea Remm and Zhogolev和留坝蠛蠓Lasiohelea liubaensis Yu,Liu et Yan,*... 详细信息

关键词：蠓科毛蠓蠛蠓新纪录新种

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重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗构建和免疫保护效果

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 369-375页

作者：卞成蓉刘娜邢丽段跃强王希良周娅杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院临床检验中心北京100039

目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救... 详细信息

目的构建和拯救重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株,并通过动物实验评价其免疫原性及免疫保护性。方法利用流感病毒反向遗传学技术,以流感病毒为载体,将RSV保护性抗原G蛋白表位的基因插入到流感病毒非结构蛋白NS1基因,拯救重组嵌合表达G蛋白中和表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G,进而对rFLU/RSV/G的特性进行全面鉴定。rFLU/RSV/G滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过检测中和抗体效价、血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)和黏膜抗体sIgA效价以及细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α)的分泌量来评价机体产生的体液、细胞和黏膜免疫反应。攻毒实验评价rFLU/RSV/G的免疫保护性,观测小鼠的体质量变化、病毒载量、存活情况以及肺病理变化。结果成功拯救出重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G。重组病毒rFLU/RSV/G与流感病毒颗粒形态和大小分布相符,并且表达针对RSV的特异性蛋白NS1-G。动物实验表明rFLU/RSV/G诱导小鼠机体产生较高的中和抗体、RSV特异性的Th1型细胞免疫反应以及黏膜免疫反应。攻毒实验显示rFLU/RSV/G对RSV A2株和PR8流感病毒野毒株具有一定免疫保护效果,能够有效降低肺鼻的病毒载量,肺组织病变情况明显减轻,且无小鼠死亡。结论重组嵌合表达G蛋白表位的流感病毒载体RSV疫苗株rFLU/RSV/G是一个有前景的RSV候选疫苗株,具有较高的免疫原性和免疫保护性,值得在棉鼠和猴子进行进一步研究。

关键词：流感病毒 RSV G蛋白表位病毒载体

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嗜吞噬细胞无形体研究进展

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第3期20卷 184-193页

作者：江佳富军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本文重点阐述了嗜吞噬细胞无形体Anaplasmaphagocytophilum的病原学、生态学方面的研究进展：简要介绍了人群中嗜吞噬细胞无形体感染流行的特征、主要临床特点和治疗要点；概括了嗜吞噬细胞无形体感染的预防控制手段；分析了嗜吞噬细胞... 详细信息

本文重点阐述了嗜吞噬细胞无形体Anaplasmaphagocytophilum的病原学、生态学方面的研究进展：简要介绍了人群中嗜吞噬细胞无形体感染流行的特征、主要临床特点和治疗要点；概括了嗜吞噬细胞无形体感染的预防控制手段；分析了嗜吞噬细胞无形体相关研究存在的一些不足及其今后的研究方向。

关键词：嗜吞噬细胞无形体病原学生态学流行病学

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鼠疫菌Fur蛋白对waaA的转录调控研究

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军事医学 2013年第7期37卷 498-501页

作者：刘磊张义全倪斌王丽杨瑞馥周冬生军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016

目的从转录水平上研究鼠疫耶尔森菌Fur蛋白对waaA的转录调控机制。方法提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突变株(Δfur)的总RNA,采用引物延伸实验研究waaA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断Fur蛋白对waaA的调控关系。构建克隆有waaA上游启... 详细信息

目的从转录水平上研究鼠疫耶尔森菌Fur蛋白对waaA的转录调控机制。方法提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突变株(Δfur)的总RNA,采用引物延伸实验研究waaA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断Fur蛋白对waaA的调控关系。构建克隆有waaA上游启动子区的LacZ重组质粒,将重组质粒转入WT和Δfur中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中的waaA启动子活性,进一步验证Fur蛋白对waaA的调控关系。PCR扩增waaA启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-Fur蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验,即电泳迁移率变动实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His-Fur蛋白对waaA启动子区是否具有直接的结合作用。结果与结论 DNaseⅠ足迹实验表明,Fur蛋白对waaA启动子区的结合位置为-204至-150之间的碱基(翻译起始位点为+1);引物延伸实验显示waaA有一个转录起始位点T(-26),且该位点的转录活性直接被Fur蛋白激活。

关键词：鼠疫耶尔森菌转录调控 Fur waaA

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微生物全基因组测序组装中的gap填补方法

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生物技术通讯 2013年第6期24卷 819-821页

作者：黄勇范航张志毅童贻刚周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:研究和开发高通量测序全基因组组装过程中的填补gap的方法。方法:研究组装软件的算法,使用Perl语言编写自动填补gap的程序,并建立全基因组组装的流程。结果:提出了填补gap的末端延伸法,并使用Perl语言进行了编程;在对立克次体高通... 详细信息

目的:研究和开发高通量测序全基因组组装过程中的填补gap的方法。方法:研究组装软件的算法,使用Perl语言编写自动填补gap的程序,并建立全基因组组装的流程。结果:提出了填补gap的末端延伸法,并使用Perl语言进行了编程;在对立克次体高通量测序的组装过程中,这些方法能大大减少gap的数量。结论:本研究提出的末端延伸法能够高效填补全序列组装过程中出现的gap,具有很强的实用性。

关键词：测序组装 gap填补

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超广谱β-内酰胺酶SHV-18的表达纯化及活性验证

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现代生物医学进展 2013年第33期13卷 6401-6404页

作者：郭通刘雄刘传杰钱敏王琴李涛王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:产超广谱β-内酰胺酶是肠杆菌科细菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制,该类酶主要水解青霉素类、头孢菌素类以及单环酰胺类抗生素。自从1983年第一次有关β内酰胺酶的报道开始,至今已经发现超广谱β-内酰胺酶(ES... 详细信息

目的:产超广谱β-内酰胺酶是肠杆菌科细菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制,该类酶主要水解青霉素类、头孢菌素类以及单环酰胺类抗生素。自从1983年第一次有关β内酰胺酶的报道开始,至今已经发现超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的种类超过400种,其中SHV型是最常见的ESBLs类型之一。本研究主要探讨了超广谱β-内酰胺酶SHV-18的原核表达载体的构建、酶的纯化和活性验证。方法:利用肺炎克雷伯菌ATCC700603全基因组为模板,应用分子生物学技术钓取SHV-18基因,构建pET22b(+)-SHV-18表达质粒,经测序鉴定后,转化大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达并亲和纯化,进一步通过抗生素水解实验,检测其水解活性,测定其酶动力学参数。结果:成功构建了可以以裂解上清形式高效表达SHV-18的工程菌。通过亲和纯化最终获得纯度达到90%以上的β-内酰胺酶SHV-18。获得的SHV-18蛋白能够水解青霉素G、头孢拉定、头孢唑肟、头孢他啶、头孢吡肟等多个抗生素。结论:获得了对青霉素和头孢菌素类具有水解活性的超广谱β-内酰胺酶SHV-18,并对其酶动力学参数进行了检测。在实验室研究了β-内酰胺酶SHV-18对不同抗生素的水解特性,更加有利与指导临床抗生素的合理使用。

关键词： SHV—18 超广谱β-内酰胺酶(ESBLs) 表达纯化酶动力学

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KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学

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生物技术通讯 2013年第5期24卷 650-654页

作者：刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步... 详细信息

目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。

关键词：细菌耐药 KPC-2型碳青霉烯酶 β内酰胺类抗生素酶催化动力学

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