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中国测试 2023年第11期49卷前插1页

作者：鞠熀先姜涛南京大学生命分析化学国家重点实验室国际电化学会英国皇家化学会中国仪器仪表学会分析仪器分会电分析化学专家组化学传感器专家组中国化学会分析化学学科委员会有机分析专业委员会江苏省化学化工学会分析化学专业委员会军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所中国人民解放军医学科学技术委员会防生物危害医学专业委员会青年委员会中国微生物学会微生物生物安全专业委员会青年学组北京预防医学会专业委员会中国认可委员会生物安全实验室

生物安全属于非传统安全,包括新发突发传染病、新型生物技术误用和谬用、实验室生物安全、国家重要遗传资源和基因数据流失、生物武器与生物恐怖主义威胁等.

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淡色库蚊与骚扰库蚊触角嗅觉基因表达分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 453-457页

作者：周洁李春晓兰策介高剑刘钦梅孙爱娟赵彤言安徽医科大学合肥230000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 浙江省疾病预防控制中心杭州310051 苏州市疾病预防控制中心苏州215004

目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提... 详细信息

目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提取各组样品总RNA,采用NEBNext Ultra^TMRNA■文库构建试剂盒构建文库。对转录组基因进行测序,通过FPKM值差异性分析,筛选淡色库蚊与骚扰库蚊分别在吸血前、后表达差异显著的嗅觉基因,并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果淡色库蚊吸血前、后触角转录组共注释了50个气味结合蛋白(OBP)和31个气味受体(OR)基因,骚扰库蚊吸血前、后触角转录组共注释T36个OBP和12个OR。淡色库蚊吸血后较吸血前显著上调的OBP有4个,无显著下调的OBP。骚扰库蚊吸血后较吸血前显著上调和下调的OBP分别有3个。淡色库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有3个。骚扰库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有1个。qRT-PCR验证结果显示,淡色库蚊吸血后OBP17显著上调;骚扰库蚊吸血后OBP31、OBP44表达量显著上调,其中OBP44与测序结果一致,OBP31与测序结果相反。吸血前,骚扰库蚊0BP17显著高于淡色库蚊;吸血后,骚扰库蚊0BP31、OBP44显著高于淡色库蚊,OBP99a显著低于淡色库蚊。骚扰库蚊吸血后0R31、OR65、CPIJ001069表达量均显著上调,其中OR65和CPU001069表达量显著高于淡色库蚊(P<0.05)。淡色库蚊吸血后无显著变化的OR基因。结论淡色库蚊与骚扰库蚊的嗅觉基因OBP和OR表现出了进化分化,OBP17、0BP44可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。0R31、OR65、CPIJ001069可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。

关键词：淡色库蚊骚扰库蚊高通量分析技术嗅觉基因

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细菌全基因组关联研究的方法与应用

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遗传 2018年第1期40卷 57-65页

作者：杨超杨瑞馥崔玉军包其郁军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 不详

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工... 详细信息

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工具。自2013年第一项细菌GWAS(bacterial GWAS,BGWAS)工作发表以来,目前已有10多项相关研究报道,分别揭示了细菌宿主适应性、耐药性及毒力等表型的遗传机制,极大加深了人们对细菌遗传、进化及传播等方面的认识。本文对目前BGWAS的研究方法、应用成果及存在的问题进行了总结,并对BGWAS的研究前景进行了展望,旨在为微生物学领域开展BGWAS研究提供参考。

关键词：全基因组关联研究细菌全基因组测序表型遗传机制

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1株高毒力型肺炎克雷伯菌临床分离株毒力及耐药性分析

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传染病信息 2020年第3期33卷 220-224页

作者：王灿高明明李璞媛苑鑫牛文凯刘慧莹方云米志强柏长青安徽医科大学附属阜阳医院呼吸内科 236000 中国人民解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测... 详细信息

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测序平台对该菌株进行全基因组测序和序列拼接,应用生物信息学方法全面分析该菌株毒力基因及耐药基因。结果该菌株血清型为K1型,采用PCR方法发现该菌株携带wabG、uge、kfuBC、aerobactin、rmpA、magA和fimH 7个毒力基因及超广谱β-内酰胺酶耐药基因(基因型为SHV型)。高通量测序进一步发现该菌株的基因组还携带clbB、iroC和rffG 3个毒力基因。结论该肺炎克雷伯菌临床分离株血清型为K1,除了携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因外,还含有多种毒力基因,增加了治疗难度。全面分析感染菌株携带的毒力基因和耐药基因,有针对性地选择抗生素,可提高抗感染治疗的效率,减少并发症的发生。

关键词：肺炎克雷伯菌全基因组测序毒力基因耐药基因血清型

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Q热疫苗研究

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中国人兽共患病学报 2018年第2期34卷 171-174,181页

作者：熊小路焦俊温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071

Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的最有效手段。专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100%,但是其免疫副反应强。氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体... 详细信息

Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的最有效手段。专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100%,但是其免疫副反应强。氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体(CMR)和三氯醋酸提取贝氏柯克斯体可溶性抗原(TCA)Q热疫苗保留灭活Q热疫苗的免疫保护效能,且免疫副反应显著减轻。但CMR和TCA Q热疫苗均需要用鸡胚大量培养贝氏柯克斯体,需要在高等级生物防护实验室采用复杂步骤提取、纯化贝氏柯克斯体,这些使Q热疫苗的生产成本高、批量生产难。近十年来,国内外Q热疫苗研究着力于分子疫苗,并已经由研究贝氏柯克斯体保护性抗原转移到筛选能诱导特异性细胞免疫应答的CD4+和CD8+T细胞表位上,以期望T细胞表位在机体内高效表达,诱导机体产生良好的抗Q热保护性免疫应答。

关键词： Q热疫苗贝氏柯克斯体保护性抗原 T细胞表位

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大肠杆菌hfq和rne-710基因的双质粒无痕敲除技术

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生物工程学报 2018年第4期34卷 602-612页

作者：王净吕瑞辰韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院河北张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并... 详细信息

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并连接至辅助质粒,缺失hfq和rne-710的片段经重组分别替换壮观霉素抗性盒,得到无痕敲除株Δhfq和Δrne-710。双质粒无痕敲除和融合PCR方法相结合为大片段基因缺失开辟了新的途径。

关键词：大肠杆菌 hfq rne-710 双质粒无痕敲除融合PCR Ⅰ-Sce Ⅰ内切酶

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大气PM2.5对大鼠心肌细胞的毒性作用

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环境科学研究 2018年第9期31卷 1636-1644页

作者：焦周光胡凌飞李娜张柯温占波李劲松军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 北京慧荣和科技有限公司北京101102

为评估大气PM_(2.5)及其不同组分对心肌细胞H9C2的毒性作用,探讨PM_(2.5)对心血管系统产生毒性作用的关键组分,将前期采集并制备的PM_(2.5)完全颗粒物、PM_(2.5)水溶性组分、PM_(2.5)脂溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物以不同质量浓度对H9C... 详细信息

为评估大气PM_(2.5)及其不同组分对心肌细胞H9C2的毒性作用,探讨PM_(2.5)对心血管系统产生毒性作用的关键组分,将前期采集并制备的PM_(2.5)完全颗粒物、PM_(2.5)水溶性组分、PM_(2.5)脂溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物以不同质量浓度对H9C2细胞染毒.用MTS法在染毒6、10、24、48、72 h后测定细胞活力;根据细胞活力测定结果,选用较低染毒浓度(10μg/m L),用相关试剂盒测定染毒24 h后胞内和上清液中LDH(乳酸脱氢酶)和SOD(超氧化物歧化酶)活力,ELISA及RT-q PCR法测定炎性因子IL-6和TNF-α表达量,AP位点计数法测定细胞DNA损伤情况.结果表明:颗粒物成分(PM_(2.5)完全颗粒物和PM_(2.5)单纯颗粒物)对H9C2细胞表现出强烈的生长抑制作用,50μg/m L及以上染毒浓度组在染毒时间≥24 h时细胞可能已经全部死亡,而可溶性成分(PM_(2.5)水溶性组分和PM_(2.5)脂溶性组分)对H9C2细胞生长表现为极弱或无生长抑制作用,仅400μg/m L的PM_(2.5)脂溶性组分始终对细胞生长表现出抑制作用;各组分样本都在一定程度上造成了H9C2细胞损伤,降低了胞内LDH和SOD活性;PM_(2.5)完全颗粒物和PM_(2.5)脂溶性组分在造成炎性损伤方面的作用较为明显.研究显示,颗粒物组分对H9C2细胞致死作用显著,相对而言,PM_(2.5)完全颗粒物表现出的毒性作用最强且最全面.

关键词： PM2.5 心肌细胞细胞活力炎性因子

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医院感染细菌性肺炎患者多重耐药菌感染及30 d内死亡危险因素分析

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检验医学 2019年第4期34卷 300-304页

作者：李静刘雪超孙惠敏崔冰漪刘秀玮唐山市中医医院免疫发光科河北唐山063000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 唐山市中医医院肺系病科河北唐山063000

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估... 详细信息

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估相关危险因素。结果患者年龄、重症监护病房(ICU)入住>7 d、接受有创机械性通气>7 d是患者发生多重耐药(MDR)菌感染的独立危险因素;患者年龄、肺部肿瘤及合并机体其他部位感染是细菌性肺炎患者30 d内死亡的独立危险因素。结论明确了医院感染细菌性肺炎患者发生MDR及30 d内死亡的危险因素,为临床制定相应预防、治疗措施提供了理论依据。

关键词：医院感染细菌性肺炎危险因素多重耐药菌死亡

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两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

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免疫学杂志 2018年第4期34卷 353-358页

作者：周珊珊杨晓岚孙芳程晋霞谷宏婧段跃强杨鹏辉王希良安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfast... 详细信息

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

关键词：反向遗传学两质粒系统流感病毒

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基于FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法

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安徽医科大学学报 2018年第5期53卷 739-745页

作者：罗森丁朋晓李涛王琴王慧遵义医药高等专科学校病原生物与免疫教研室遵义563006 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)... 详细信息

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)和破伤风毒素轻链(TLc)分别对目的蛋白进行酶切反应。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件进行优化。酶动力学参数分别测定TLc和BLc切割底物荧光标记底物的Km和Kcat值。结果设计并成功构建荧光标记底物的重组表达质粒。表达并纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白,命名为CYVAMP。利用ALc、BLc和TLc分别对CYVAMP进行酶切,CYVAMP能被BLc和TLc识别切割而不能被ALc切割。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件优化得到:CYVAMP较适宜的范围为0.2~32μmol/L,酶标仪滤光片灵敏度设定的较合适的设置范围在65~110;(对于96孔板)动态实时检测间隔时间2 min较为合适,检测持续时间从30 min到120 min较合适。CYVAMP在内肽酶BLc作用下随反应时间变化与荧光值528与485比值作图最大时在1.5左右,最小在0.5左右。酶动力学参数测定得到BLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(17.6±2.6)μmol/L和(4.16±0.28)s-1。TLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(40.8±3.5)μmol/L和(2.65±0.32)s-1。结论成功构建基于FRET技术的分析法能满足对破伤风毒素和B型肉毒毒素的检测及抑制剂的高通量体外筛选所需。

关键词： FRET 肉毒毒素破伤风毒素高通量筛选

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