检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2011年第4期36卷 382-384页

作者：周希珍赵慧李晓峰邓永强秦成峰秦鄂德高岚兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：酵母双杂交乙型脑炎病毒 NS5蛋白

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沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

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军事医学 2011年第8期35卷 593-595页

作者：陈超卢永峰刘慧莹宋立华左庭婷何君檀华朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007l 解放军307医院呼吸科北京100071

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定。结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1:32以上。为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础。

关键词：沙门菌属 pad蛋白原核表达抗原性

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对in—houseHIV-1基因型耐药性检测方法的评价

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中华检验医学杂志 2011年第9期34卷 849-854页

作者：耿庆茂李韩平辛天义庄道民鲍作义刘永健李林王铮刘思扬李敬云全军艾滋病检测中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河南省沈丘县卫生局

目的评价in—houseHIV—1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统（ViroSeq^TMv2．0）为参考方法，并与... 详细信息

目的评价in—houseHIV—1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统（ViroSeq^TMv2．0）为参考方法，并与建立起的基因型耐药性检测方法（in—house）平行检测待检样本，比较二者在扩增效率、耐药突变位点检测以及耐药报告等方面的一致性。结果已知的14850个耐药突变位点中，2种方法可同时对99．3％（14752／14850）的耐药突变位点准确检出；在对不同突变位点的检测中，2种方法对蛋白酶抑制剂耐药突变位点、逆转录酶抑制剂耐药突变位点及两类抑制剂耐药突变位点检测一致率分别为99．7％、99．0％和99．3％（Kappa值分别为0．9099、0．9521和0．9488，P值均〈0．01）；2种方法出具的两类药物的耐药结果报告一致率94．6％（Kappa=0．6374，P〈0．01）。本研究共检测到34个ViroSeq“数据库（ViroSeq^TMsoftwarev2．7）未收录位点，其中2个突变位点对耐药的影响较大。结论in—house基因型耐药性检测方法与ViroSeq^TM基因型耐药性检测系统在耐药突变位点检测以及评价上具有高度一致性，是一种快速准确、性价比高的HIV-1基因型耐药检测方法，同时在耐药数据库方面具有一定优势。

关键词： HIV-1 基因型抗药性,病毒微生物敏感性试验

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过表达热休克蛋白70提高CHO细胞表达抗体的能力

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中国生物工程杂志 2011年第9期31卷 8-13页

作者：黄芬安小平李存何彰华张宝中米志强王娟童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 陕西师范大学生命科学学院西安710062

通过在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中过表达热休克蛋白70以提高其表达抗体的能力。首先从中国仓鼠基因组DNA中扩取HSP70基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-HSP70,再将重组质粒稳定转染到CHO/dhfr-细胞中,筛选获得稳定的细胞系,运用RT-qPCR检测和... 详细信息

通过在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中过表达热休克蛋白70以提高其表达抗体的能力。首先从中国仓鼠基因组DNA中扩取HSP70基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-HSP70,再将重组质粒稳定转染到CHO/dhfr-细胞中,筛选获得稳定的细胞系,运用RT-qPCR检测和Western blot分析HSP70基因的过表达。在过表达HSP70的CHO细胞组和对照细胞组(转染空载体pcDNA3.1的CHO细胞组)中分别转染表达抗-HBs的质粒,应用ELISA检测两组细胞表达抗-HBs的能力。RT-qPCR结果显示实验组CHO细胞中HSP70基因的表达量明显高于对照组细胞;ELISA检测结果表明过表达HSP70的CHO细胞组抗-HBs表达量高于对照组细胞(P<0.05)。研究揭示HSP70能有效促进细胞内分泌性蛋白的表达。

关键词： CHO细胞 HSP70 抗体

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五株EV71病毒毒力、免疫原性与基因组比较分析

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免疫学杂志 2011年第6期27卷 494-498页

作者：刘鑫段长松李仲王校伟赵忠鹏王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效... 详细信息

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效价;反转录获得5株EV71的全长cDNA进行全基因组测序;最后,用CLC Main Workbench 5.5软件对序列进行比较分析。结果通过对VP1基因的比较分析发现,这5株EV71分离株均为C4a亚型。1周龄Balb/c小鼠经脑部注射LCH01株,表现出后肢瘫痪和后继死亡;而注射其它4株EV71的小鼠在观察了14 d之后仍然存活。5株EV71血清抗体效价为210～211,中和抗体效价为27～28,无显著差异。LCH01毒株与其它几株序列相比,在5′-NTR、3′-NTR、3D等处均有明显差异。结论这5株EV71分离株为近几年流行的C4a亚型,具有较高的免疫原性;LCH01毒株的毒力高于其它几株,从基因组水平上找到了差异序列,这为EV71疫苗评价和致病机制研究提供了实验数据和实验材料。

关键词：手足口病 EV71病毒毒力免疫原性序列分析

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甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应性MDCK细胞的筛选及鉴定

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免疫学杂志 2011年第3期27卷 189-192页

作者：姚志东张良艳刘坤邢丽王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应的MDCK单克隆细胞株,用于培养生产流感病毒疫苗,为细胞代替鸡胚生产制备流感病毒疫苗提供保证。方法通过有限稀释法将MDCK细胞进行单克隆化,扩大培养建立单克隆化细胞库,通过血凝和TCID50筛选甲型H... 详细信息

目的筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应的MDCK单克隆细胞株,用于培养生产流感病毒疫苗,为细胞代替鸡胚生产制备流感病毒疫苗提供保证。方法通过有限稀释法将MDCK细胞进行单克隆化,扩大培养建立单克隆化细胞库,通过血凝和TCID50筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株的高适应性单克隆化细胞株,并鉴定所获得的细胞株细胞表面NeuAcα2,6 Gal的丰度。结果共制备了97株单克隆化MDCK细胞,经过甲型H1N1流感病毒疫苗株的筛选,共筛选到2株高适应甲型H1N1流感病毒疫苗株的MDCK单克隆化细胞株,其TCID50分别为6.68 log10 TCID50/ml和6.77 log10 TCID50/ml,其表面NeuAcα2,6 Gal的丰度明显提高。结论成功培养了MDCK单克隆细胞株,经筛选获得的单克隆细胞株其血凝滴度,TCID50都比普通MDCK细胞有明显提高,为细胞培养生产流感病毒疫苗奠定了基础。

关键词： MDCK细胞单克隆化甲型H1N1流感病毒

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布鲁杆菌M16株pgm基因突变活菌苗株的构建和鉴定

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中国地方病学杂志 2011年第3期30卷 289-293页

作者：李鹏朱嘉婧罗德炎王希良空军航空医学研究所附属医院检验科北京100089 吉林大学中日联谊医院耳鼻咽喉头颈外科军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列... 详细信息

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列对布鲁杆菌pgm基因进行修饰（插入突变）,完成pucS1.6K自杀性质粒载体的构建;通过电转化获得布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株;应用PCR方法对pgm基因突变菌株进行鉴定.结果鉴定结果显示,布鲁杆菌M16株pgm基因在卡那霉素抗性基因插入后失活,突变后的布鲁杆菌M16株pgm基因DNA片段长度约为3525 bp,与预期的相符,布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株构建成功.结论构建的自杀性质粒载体能成功对布鲁杆菌进行精确毒力基因突变,为获得布鲁杆菌突变株提供了一个有效的技术平台,也为新型减毒活疫苗的研制奠定了基础.

关键词：布鲁杆菌菌苗 pgm基因基因融合诱变插入

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鼠疫菌H-NS蛋白的表达与纯化及其DNA结合活性分析

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微生物学报 2011年第5期51卷 615-621页

作者：张义全高鹤王丽罗张谭亚芳郭兆彪杨瑞馥周冬生军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hn... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hns重组质粒转入大肠杆菌BL21λDE3菌株中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出鼠疫菌His-H-NS蛋白;通过体外的凝胶迁移实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验对His-H-NS蛋白与DNA的结合活性进行分析。【结果】成功表达出有活性的鼠疫菌His-H-NS蛋白,该蛋白对鼠疫菌pH6抗原基因(psaA、psaE)及rovA基因均有结合活性。【结论】鼠疫菌His-H-NS具有DNA结合活性,说明H-NS能调控鼠疫菌基因的转录。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌 H-NS DNA结合活性

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PSCA-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

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生物技术通报 2011年第6期27卷 150-154页

作者：董磊张晓鹏房婷易绍琼于婷侯利华付玲于长明陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 空军总医院临床检验中心北京100142

旨在大肠杆菌中表达PSCA-HSP70融合蛋白,并对其进行纯化。克隆人PSCA基因及HSP70基因,构建表达PSCA-HSP融合蛋白的工程菌,优化表达及纯化条件,对重组蛋白进行纯化。结果表明,成功构建重组表达质粒PSCA-HSP,重组蛋白得到可溶性表达,优化... 详细信息

旨在大肠杆菌中表达PSCA-HSP70融合蛋白,并对其进行纯化。克隆人PSCA基因及HSP70基因,构建表达PSCA-HSP融合蛋白的工程菌,优化表达及纯化条件,对重组蛋白进行纯化。结果表明,成功构建重组表达质粒PSCA-HSP,重组蛋白得到可溶性表达,优化纯化条件后获得90%以上纯度的重组蛋白。本研究成功实现了PSCA与HSP的融合表达,为下一步肿瘤疫苗的研制奠定基础。

关键词：前列腺干细胞抗原热休克蛋白表达纯化

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对1株疑似鼠疫耶尔森氏菌的系统鉴定

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 355-358页

作者：何建李艳君祁芝珍崔玉军任玲玲代瑞霞王效义崔百忠张青雯杨瑞馥宋亚军青海省地方病预防控制所西宁811602 海军总医院检验科北京100048 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体... 详细信息

目的对1株可疑菌株进行系列验证实验,以确定其是否为鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)。方法用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征、特异性基因及基因组特征。结果该菌株具备鼠疫菌的典型形态特征;能被鼠疫噬菌体完全裂解;主要生化特性为阿胶糖(+)、鼠李糖(-)、麦芽糖(+)、蜜二糖(-)、甘油(+)、脱氮(+),与典型鼠疫菌一致。毒力因子检查结果为均为阴性;对实验动物小白鼠完全无致死能力。全基因组芯片杂交实验和PCR扩增表明55023菌株没有鼠疫菌的三个质粒;也不具鼠疫标识基因;pgm位点代表性基因YPO1954扩增阳性,YPO1908扩增阴性,表明其pgm位点不完整;差异片段(DFR)分型结果表明该菌株缺失了14个DFR,不符合鼠疫菌的特征;多位点序列分型(MLST)分析结果表明该菌株与鼠疫存在16个碱基的差异,而与血清Ⅲ型假结核耶尔森氏菌仅相差两个碱基。结论尽管55023菌株具备鼠疫菌的一些表型特征,但基因组特征表明其不是鼠疫菌,而可能是血清III型的假结核耶尔森氏菌;噬菌体裂解结果等表型不能作为鼠疫菌鉴定的最终标准。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌假结核耶尔森氏菌表型鉴定基因型鉴定

来源：评论

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