检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 145-148页

作者：李冰张军徐俊杰刘树玲付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框... 详细信息

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。

关键词：单链抗体免疫原性人源化炭疽

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采用高通量测序技术分析尾病毒目噬菌体基因组末端序列特点

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病毒学报 2013年第1期29卷 39-43页

作者：李莎莎范航安小平范华昊姜焕焕米志强童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序... 详细信息

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序技术分析N4样噬菌体的全基因组序列。加接头的序列与无接头序列中的高频序列完全一致,证明了高通量测序过程中得到的高频序列就是加接头的基因组末端序列,同时证明T4样噬菌体的末端具有序列特异性而非完全随机,此外我们还发现N4样噬菌体基因组左侧末端具有唯一序列,而其基因组右侧末端不均一。高通量测序技术方便快捷,可用于噬菌体基因组末端和全基因组序列的同时测定。

关键词：高通量测序噬菌体基因组末端序列

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LFn-MAGE3融合蛋白表达及生物学功能初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 181-184页

作者：孔毅荣付玲郭强于婷于长明陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:表达融合蛋白LFn-MAGE3,探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性。方法:将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中,构建LFn融合表达载体PET21a-LFn。将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中,构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体。将... 详细信息

目的:表达融合蛋白LFn-MAGE3,探讨无毒炭疽毒素用于治疗肿瘤的可能性。方法:将LFn的编码序列导入PET21a表达载体中,构建LFn融合表达载体PET21a-LFn。将全长MAGE-3基因插LFn融合表达载体中,构建了PET21a-LFn-MAGE3融合蛋白表达载体。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达LFn-MAGE3融合蛋白。表达产物用QsepharoseFF离子交换柱和PheHP疏水柱进行纯化。LF毒性抑制实验和细胞免疫荧光实验检测融合蛋白的生物学活性。结果:融合蛋白LFn-MAGE3在大肠杆菌BL21a获得胞内可溶性表达,经纯化后,获得一定纯度的LFn-MAGE3融合蛋白。细胞免疫荧光实验显示LFn-MAGE3能在PA(炭疽保护性抗原)协同下高效进入巨噬细胞。结论:表达纯化获得的LFn-MAGE3融合蛋白能在PA协助高效进入细胞,可以用于下一步的肿瘤免疫治疗的动物实验中。

关键词： MAGE3 炭疽毒素融合表达肿瘤免疫治疗

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大肠杆菌小RNASgrS单分子原位成像方法的建立

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科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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汉滩病毒M片段噬菌体表位文库的构建及筛选

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第8期26卷 752-755页

作者：罗保君石英常国辉张秀娟周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库,筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接,转化宿主XL-1Blue,在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下,获得M片段的随机噬菌体文库。利用纯化的恢复期病人血清... 详细信息

目的通过构建汉滩病毒M片段的噬菌体展示文库,筛选汉滩病毒包膜蛋白的抗原表位。方法DNaseⅠ随机消化的M片段与载体pComb3连接,转化宿主XL-1Blue,在辅助噬菌体VCSM13存在的条件下,获得M片段的随机噬菌体文库。利用纯化的恢复期病人血清对M片段噬菌体文库进行3轮淘洗,通过ELISA、序列分析对所获得的克隆进行鉴定。并对其中2个阳性克隆的目的片段进行了原核表达和免疫原性分析。结果筛选获得的5个阳性噬菌体克隆均位于G1蛋白编码区,原核表达的2个阳性克隆片段蛋白免疫兔,免疫兔血清能与病毒抗原发生特异反应。结论本技术路线可用于汉滩病毒包膜蛋白抗原表位的研究,为汉滩病毒诊断试剂的研制、亚单位疫苗的设计提供了数据。

关键词：构建及筛选汉滩病毒M片段噬菌体文库

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突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离及鉴定

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微生物学报 2006年第3期46卷 460-462页

作者：王争强何君苏裕心朱虹端青宋立华军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行... 详细信息

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行PCR扩增。结果显示,这两株菌有两个毒力相关质粒pX01和pX02,为有毒株。序列测定表明,这两株菌基因间同源性达99%,这两株菌与GenBank中炭疽芽孢杆菌A2012株、Ames Ancestor株和A16R疫苗株同源性达99%。

关键词：炭疽芽孢杆菌分离生化鉴定基因克隆 PCR扩增

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北京雾霾天大气颗粒物中微生物气溶胶的浓度及粒谱特征

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环境科学 2015年第9期36卷 3144-3149页

作者：胡凌飞张柯王洪宝李娜王洁杨文慧殷喆焦周光温占波李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院实验动物中心北京100071

于2013年1月8日~2013年2月4日雾霾频繁暴发期间,使用定量空气微生物采样器和气溶胶粒谱测试仪测试并比较了雾霾天和之后的清朗天气下细菌、真菌气溶胶浓度变化、粒谱分布及不同粒径大小颗粒物的数量浓度差异和粒谱分布特征.结果表明,采... 详细信息

于2013年1月8日~2013年2月4日雾霾频繁暴发期间,使用定量空气微生物采样器和气溶胶粒谱测试仪测试并比较了雾霾天和之后的清朗天气下细菌、真菌气溶胶浓度变化、粒谱分布及不同粒径大小颗粒物的数量浓度差异和粒谱分布特征.结果表明,采样周期内真菌气溶胶小于5μm的粒子(可吸入肺粒子)所占百分比显著高于细菌气溶胶小于5μm的粒子百分比.雾霾过后的晴朗天气下细菌、真菌气溶胶浓度高于雾霾天气时的浓度,而颗粒物浓度则相反.无论雾霾天或晴朗天微生物气溶胶的粒谱分布无显著差别,空气中的颗粒物以PM1.0占绝大多数.

关键词：雾霾细菌气溶胶真菌气溶胶粒径分布颗粒物

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炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 158-161页

作者：易绍琼于少洋于婷任声权刘树玲杨秀旭董大勇陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克... 详细信息

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克隆至pET-21a（＋），构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP，在大肠杆菌中诱导表达，并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化。利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况。结果获得较高纯度的融合蛋白LFn-EG-FP，纯度可达90％以上，体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性，并且能够进入到HeLa细胞中。结论LFn-EGFP蛋白本身电会以未知的机制进入细胞，在PA辅助时，LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加。

关键词：致死因子炭疽毒素保护性抗原增强型绿色荧光蛋白 HeLa细胞炭疽杆菌

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蜱中玫瑰单胞菌菌株的分离与鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 29-32页

作者：邱尔臣张芳刘玮吴晓明杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为3... 详细信息

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为37℃，在含有5％以上NaCl的培养基中不能生长。该菌能发酵葡萄糖、利用棕檬酸盐，接触酶试验阳性、脲酶试验阳性、紫外（UV）吸收试验阳性。主要脂肪酸成分为C16：0、C17：0、C18：1 ω9c和C19：0cyc。16SrDNA序列分析和同源性检索发现3株细菌与颈玫瑰单胞菌（Roseomonas cervicalis）同源性最高，达99．1％。结论这3株细菌在分类学上属于玫瑰单胞菌（Roseomonas），但是和已经报道的种都不相同，可能是一个变种。蜱可能是其潜在的媒介宿主。

关键词：玫瑰单胞菌草原革蜱分离鉴定

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埃博拉病毒核酸快速检测技术应用及展望

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国际药学研究杂志 2015年第1期42卷 76-79,4页

作者：贾佳康晓平杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

埃博拉病毒（EBOV）是引起人类及哺乳动物高致死性出血热的病原体,2013～2014年已引起了严重的西非埃博拉出血热。快速检测确证病原对于防止疾病的进一步扩散至关重要。目前,实时荧光定量PCR技术及环介导等温扩增技术（LAMP）已经应用于... 详细信息

埃博拉病毒（EBOV）是引起人类及哺乳动物高致死性出血热的病原体,2013～2014年已引起了严重的西非埃博拉出血热。快速检测确证病原对于防止疾病的进一步扩散至关重要。目前,实时荧光定量PCR技术及环介导等温扩增技术（LAMP）已经应用于EBOV的核酸快速检测,依赖核酸序列的扩增技术（NASBA）及重组聚合酶扩增技术（RPA）有望成为EBOV新型核酸快速现场检测技术。本文对几种核酸快速检测方法进行综述。

关键词：核酸检测埃博拉病毒,扎伊尔型埃博拉出血热

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