检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 431-437页

作者：焦丽燕鲍作义李韩平郭东星王铮庄道民李林耿庆茂刘永健刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体... 详细信息

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量〉1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.

关键词：原代HIV-1耐药毒株耐药突变复制动力学

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黄曲酶尿酸氧化酶突变体的构建、表达、纯化及生物学活性分析

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生物工程学报 2010年第8期26卷 1102-1107页

作者：张金龙任军李冰刘树玲侯利华付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的... 详细信息

采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的可溶性表达，目的蛋白占总蛋白含量的45％。疏水柱及阴离子柱纯化后，UOX-Ala^103蛋白纯度〉98％。Western blotting分析证实UOX—Ala加。能与抗UOX单抗特异结合。与天然型相比较，其体外生物学活性增加约60％，在高尿酸血症小鼠模型体内也有良好的降解尿酸的活性。

关键词：黄曲霉尿酸氧化酶突变体半胱氨酸表达纯化生物活性

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人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 145-148页

作者：李冰张军徐俊杰刘树玲付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框... 详细信息

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。

关键词：单链抗体免疫原性人源化炭疽

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A/California/07／2009亚型猪流感冷适应减毒疫苗株的拯救及免疫效果评价

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生物化学与生物物理进展 2010年第12期37卷 1289-1295页

作者：段跃强罗德炎邢丽杨鹏辉赵忠鹏贾卫红李培锋王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 内蒙古农业大学兽医系呼和浩特010018

应用反向遗传学技术,选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60 ca(H2N2)型流感病毒的6个内部基因为骨架,与A/California/07/2009株流感病毒2个抗原基因HA、NA分别克隆到polⅠ-polⅡ转录表达载体pAD3000中,构建8个转录表达载体重... 详细信息

应用反向遗传学技术,选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60 ca(H2N2)型流感病毒的6个内部基因为骨架,与A/California/07/2009株流感病毒2个抗原基因HA、NA分别克隆到polⅠ-polⅡ转录表达载体pAD3000中,构建8个转录表达载体重组质粒,共转染Vero细胞,获得重配A/California/07/2009ca株流感病毒.重配病毒的TCID50为7.5,病毒传4代后其血凝素(HA)滴度稳定在1∶256,半数感染剂量EID50为8,鸡胚传20代,经RT-PCR鉴定未发现重组病毒基因突变,电镜观察重配病毒符合流感病毒的主要特征;蔗糖纯化的病毒经肌肉注射(灭活)及滴鼻(减毒活病毒)两种途径免疫BALB/c小鼠,结果显示:滴鼻免疫和肌肉注射都可以产生较高效价的血凝抑制(HI)抗体,肌肉注射组产生的HI抗体略高(P=0.044),但肌肉注射组检测不到高效价IgA抗体;滴鼻免疫组鼻冲洗液中可以检测到高效价的IgA抗体,同型病毒感染后,IL-1β、TNFα、IFN-α等前炎因子分泌较早,且高于肌肉注射组(P<0.05),可见,喷鼻减毒疫苗比灭活全病毒疫苗能更好地激发黏膜免疫反应.通过对小鼠各个器官病毒载量的检测发现,4天后鼻腔、气管、脑、肺、脾脏没有病毒存在,证明减毒活疫苗株在小鼠上是安全的.以上数据可以初步断定,重组病毒有作疫苗候选株的可能,而且喷鼻疫苗具有降低免疫剂量、同时激活体内体液免疫和细胞免疫的功能.

关键词：反向遗传学技术 A/California/07/2009亚型猪流感 8质粒拯救系统

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贝氏柯克斯体重组膜蛋白抗原激活树突状细胞诱导特异性免疫应答

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中国人兽共患病学报 2010年第6期26卷 509-514页

作者：王颖王锡乐吴德平熊小路尉雁温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外... 详细信息

目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DCs;分别用Cb的5种重组膜蛋白IcmO、EnhA、SecB、Lo1A、HspB刺激DCs;用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测刺激后DCs表面分子表达。结果 SecB刺激的DCs表达CD83,CD86,CD80,CD54,CD58,和CD40水平显著高于其它4种蛋白;将SecB激活DCs或SecB激活DCs培养上清刺激T淋巴细胞,FACS检测显示刺激后CD4+和CD8+细胞高水平表达的T淋巴细胞活化标志CD69以及细胞因子IFN-γ和TNF-α。结论 SecB膜蛋白抗原能有效激活DCs和它所激活DCs能够诱导特异性细胞免疫应答,为贝氏柯克斯体潜在保护性抗原。

关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞表面分子细胞因子流式细胞分析

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HIV抗体不确定结果的特征与鉴别方法研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 427-430页

作者：鲍作义杨晓莉刘永健耿海山李林李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室武警总医院检验科

目的分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例... 详细信息

目的分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例随访病例的首次标本进行病毒载量、条带免疫印迹和HIV-1 p24抗原检测,以随访的结果为金标准,判断3种方法鉴别不确定的效果.结果 394例不确定标本共有38种带型,env类不确定的构成比例是37.54%;pol不确定占4.04%;gag类不确定占的比例最大,为58.37%.97例接受随访的HIV抗体不确定病例中,5例发生HIV抗体阳转,均为env类不确定.阳转病例的HIV抗体发展很快,约2周就可以看出变化.病毒载量检测鉴别HIV抗体不确定的敏感性最好.结论针对gag蛋白的不确定反应最为常见,但基本上都是非特异反应.env类不确定预示HIV感染的意义较大,特别是gp160p24和***抗体不确定如为早期HIV感染,血清抗体发展的速度很快,大约2周抗体就有发展.病毒载量检测可有效鉴别不确定结果.

关键词： HIV抗体不确定病毒载量

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促进CHO细胞生长及其产物hNGF表达的培养条件的初步研究

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 13-19页

作者：宋小红于婷李冰付玲侯利华陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071

以稳定表达人神经生长因子(hNGF)的重组工程CHO细胞株为对象,采用无血清流加悬浮培养(Fed-batch culture)方式,考察使用基础培养基(无特殊添加物),分别添加丁酸钠、DMSO、KH2PO4的培养基及不同培养温度(32℃和37℃)对细胞生长和重组蛋... 详细信息

以稳定表达人神经生长因子(hNGF)的重组工程CHO细胞株为对象,采用无血清流加悬浮培养(Fed-batch culture)方式,考察使用基础培养基(无特殊添加物),分别添加丁酸钠、DMSO、KH2PO4的培养基及不同培养温度(32℃和37℃)对细胞生长和重组蛋白表达的影响。每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、重组蛋白浓度。结果表明细胞培养温度由37℃下降至32℃,细胞生长周期明显延长,重组蛋白产量增加。5mmol/L丁酸钠和2%DMSO的加入虽然提高了重组蛋白的表达量,但严重抑制细胞生长。最大的蛋白比生成速率(qNGF)出现在37℃培养且添加2%DMSO的培养条件下,而最高蛋白表达量则出现于32℃培养添加3.65mmol/LKH2PO4的培养条件下。研究表明,将培养温度设为32℃,在基础培养基中添加3.65mmol/LKH2PO4或1%DMSO是提高hNGF表达水平的有效方法。

关键词： CHO细胞丁酸钠二甲基亚砜 KH_2PO_4

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金黄色葡萄球菌黏附因子ClfA作为金黄色葡萄球菌疫苗组分的研究

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军事医学科学院院刊 2010年第3期34卷 258-260页

作者：张晓艳易绍琼付玲刘树玲于婷刘颖陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究黏附因子丛生因子A(clumping factor A,ClfA)在金黄色葡萄球菌(SAU)不同菌株中的分布情况,为开发具有广泛保护效果的SAU疫苗奠定基础。方法采用PCR法扩增目的基因,构建重组质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,对目的蛋白进行... 详细信息

目的研究黏附因子丛生因子A(clumping factor A,ClfA)在金黄色葡萄球菌(SAU)不同菌株中的分布情况,为开发具有广泛保护效果的SAU疫苗奠定基础。方法采用PCR法扩增目的基因,构建重组质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,对目的蛋白进行表达、纯化。PCR及点杂交法检测ClfA在不同菌株中的分布情况。结果得到纯度较高的目的蛋白,PCR及点杂交结果显示ClfA存在于菌株USA300,而在菌株546、1884、1885中并无分布。结论 ClfA在SAU各菌株中分布不广泛,可能难以作为具有广泛保护效果的SAU疫苗组分。

关键词：金黄色葡萄球菌丛生因子A 疫苗聚合酶链反应

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中国HIV抗体检测策略的应用评价

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中华流行病学杂志 2010年第7期31卷 776-780页

作者：杨晓莉鲍作义刘永健耿海山郝钦芳王莉凌爱琴王海燕李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 武警总医院检验科

目的评价中国HIV抗体检测策略在不同人群应用的效果和收益.方法（1）收集103 133份一般人群（临床就诊病例、献血员、新兵）标本、1276份HIV感染高危人群（吸毒人群、HIV感染者的配偶）标本、2323份生化和免疫指标异常的标本,用现行HI... 详细信息

目的评价中国HIV抗体检测策略在不同人群应用的效果和收益.方法（1）收集103 133份一般人群（临床就诊病例、献血员、新兵）标本、1276份HIV感染高危人群（吸毒人群、HIV感染者的配偶）标本、2323份生化和免疫指标异常的标本,用现行HIV抗体检测策略进行检测.（2）对2002-2008年武警总医院90 289人次临床病例HIV抗体检测数据进行回顾性分析;对3个省级确认中心实验室过去3～5年确认检测的结果进行回顾性分析.结果（1）筛查试验的收益在高危人群与一般人群显著不同,高危人群筛查阳性者中HIV抗体真阳性的比例约为50%,显著高于一般人群;主要针对一般人群的确认实验室筛查阳性标本中真阳性的比例为19.58%,显著低于主要针对高危人群的确认实验室.（2）2002-2008年临床HIV抗体检测,首次筛查阳性的真阳性率由3.7%上升到16.0%,同时,复检效率由92.6%下降为61.5%.（3）常见的生化和免疫异常未增加HIV抗体检测的非特异反应.结论 HIV抗体筛查阳性预示HIV感染的意义在不同人群有显著差别,高危人群显著高于一般人群.随着近年来HIV抗体检测试剂质量的改进和实验室质量控制水平的提高,HIV抗体首次筛查的准确性大幅度提高,而复检的效率显著下降.应考虑对不同人群采取不同的检测程序.

关键词： HIV抗体检测效率高危人群一般人群

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基于短CT图像序列的肺癌节结特征提取

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计算机应用 2010年第11期30卷 2988-2990,2994页

作者：董晓凯鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

利用单幅CT图像进行肺部节结的识别存在较大的局限性,故把多幅相邻图像组成的短图像序列引入自动识别的过程,并根据节结的球形结构,把节结感兴趣区域(ROI)对应的原始图像看做是二维函数的三维表面,提取不同于传统图像区域特征的刻画三... 详细信息

利用单幅CT图像进行肺部节结的识别存在较大的局限性,故把多幅相邻图像组成的短图像序列引入自动识别的过程,并根据节结的球形结构,把节结感兴趣区域(ROI)对应的原始图像看做是二维函数的三维表面,提取不同于传统图像区域特征的刻画三维表面形状且反映节结在短图像序列中变化情况的新型特征。最后用支持向量机(SVM)进行分类实验,验证了所提取特征的有效性。

关键词：肺部节结特征提取计算机辅助诊断图像序列胸部CT图像支持向量机

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