检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2010年第2期34卷 153-155页

作者：谭刚张雨司炳银余蓉祝庆余四川大学华西药学院成都610041 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对保存的基孔肯雅病毒WJ0601株基因组序列进行测定,并阐明该病毒与已报道毒株序列的关系。方法对基孔肯雅病毒基因组编码区分14段进行RT-PCR扩增,对非编码区采用RACE法进行扩增,将扩增产物直接进行测序,应用DNAStar软件将测序结果... 详细信息

目的对保存的基孔肯雅病毒WJ0601株基因组序列进行测定,并阐明该病毒与已报道毒株序列的关系。方法对基孔肯雅病毒基因组编码区分14段进行RT-PCR扩增,对非编码区采用RACE法进行扩增,将扩增产物直接进行测序,应用DNAStar软件将测序结果拼接得到基因组序列。结果与结论基孔肯雅病毒WJ0601株基因组核苷酸共11826nt,编码3722个氨基酸,其中5′端的2/3基因组编码4种非结构蛋白nsP1、nsP2、nsP3和nsP4;3′端的1/3基因组编码5种结构蛋白C、E3、E2、6K和E1蛋白。结构基因和非结构基因之间有68nt的连接区为非翻译区。病毒基因组5′端和3′端分别有76nt、526nt的非编码区。序列同源性分析结果表明,此株病毒与S27-African株的同源性最高,两者核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为99.8%,同属于(ESCA)基因型。

关键词：基孔肯雅病毒基因组逆转录聚合酶链反应 ESCA

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荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

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军事医学科学院院刊 2010年第1期34卷 25-29,39页

作者：苏裕心高姗康琳赵耀郑学礼王景林南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的Taq... 详细信息

目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC。用SAU6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能。结果以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50cfu/ml。建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2≥0.998),PCR效率E≥96.7%。用SAU6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×102cfu/25ml样本。结论所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量。

关键词：金黄色葡萄球菌实时定量PCR 病原体检测饮用水牛奶

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不同采样液对噬菌体活性的影响研究

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军事医学科学院院刊 2010年第1期34卷 21-24页

作者：于龙李劲松温占波杨文慧胡凌飞李娜王洁鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

目的了解噬菌体在不同采样液中耐冲击能力的强弱,筛选用于液体冲击式采样器采集噬菌体气溶胶的最佳采样液和耐冲击性强的噬菌体。方法使用全玻璃液体冲击采样器(AGI-10)对噬菌体进行耐冲击实验,采样液选用蒸馏水(DW)、磷酸盐缓冲液(PBS)... 详细信息

目的了解噬菌体在不同采样液中耐冲击能力的强弱,筛选用于液体冲击式采样器采集噬菌体气溶胶的最佳采样液和耐冲击性强的噬菌体。方法使用全玻璃液体冲击采样器(AGI-10)对噬菌体进行耐冲击实验,采样液选用蒸馏水(DW)、磷酸盐缓冲液(PBS)和SM液,每种采样液又分为加橄榄油组(50μl)和不加橄榄油组(0μl),在以7L/min的气流冲击30min后测定采样液中噬菌体滴度和终末采样液体积,采用校正存活率评价噬菌体耐冲击性。结果同一种噬菌体在不同采样液中的耐冲击性不同,以SM液作为采样液时,噬菌体存活率较高,SM液中是否加入橄榄油对噬菌体的耐冲击性没有影响。噬菌体SM701、SM702、PhiX174、EcP1和F2在SM液中经7L/min的气流冲击60min后,校正存活率分别约为79%、77%、86%、50%和71%。结论噬菌体在不同采样介质中的耐冲击性不同,其中以SM液保护效果最佳,噬菌体SM701、SM702和PhiX174的耐冲击性较强。

关键词：噬菌体采样器 AGI-10 采样液校正存活率耐冲击性

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H5N1流感疫苗株在Vero细胞中的研究[英文]

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免疫学杂志 2010年第4期26卷 281-284,289页

作者：鹿文葆罗德炎杨鹏辉刘坤刑丽王希良刘秀梵军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室 225009

目的产生在Vero(非洲绿猴肾)细胞中能高适应生长的重配H5N1流感病毒疫苗株,并对其生物学特性进行初步测定。方法修饰A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的NS基因为Vero细胞适应型,并合成NS基因片段,构建质粒pHW2000-NS;通过RT-PCR方法,扩增... 详细信息

目的产生在Vero(非洲绿猴肾)细胞中能高适应生长的重配H5N1流感病毒疫苗株,并对其生物学特性进行初步测定。方法修饰A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的NS基因为Vero细胞适应型,并合成NS基因片段,构建质粒pHW2000-NS;通过RT-PCR方法,扩增疫苗株A/Anhui/01/2005(H5N1)的HA、NA基因片段,构建质粒pHW2000-HA、pHW2000-NA;以PR8的其它5个内部基因作为骨架,按照1+2+5模式8质粒共转染Vero细胞拯救流感病毒,并对拯救病毒的生物学特性进行检测。结果由Vero拯救出具有高适应生长特性的H5N1亚型人禽流感病毒疫苗株,并检测了重配疫苗株的生物学特性。结论成功从Vero细胞拯救了具有Vero细胞高适应性生长特性的H5N1亚型人禽流感病毒疫苗株,为应用Vero细胞大规模生产流感疫苗奠定了基础。

关键词： H5N1流感疫苗反向遗传学 Vero细胞

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EV71型vP1蛋白表达、纯化及免疫原性的初步评价

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免疫学杂志 2010年第3期26卷 187-190,196页

作者：李晓楠赵忠鹏段跃强赵晓燕王希良李培锋内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达新肠道病毒EV71 vP1蛋白(EV71vP1),并对EV71 vP1蛋白的免疫原性进行初步评价。方法利用RT-PCR技术获得EV71 vP1基因,将基因序列克隆到载体pFastBac HTA,通过转座反应,与Bacmid DNA重组,重组后转... 详细信息

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达新肠道病毒EV71 vP1蛋白(EV71vP1),并对EV71 vP1蛋白的免疫原性进行初步评价。方法利用RT-PCR技术获得EV71 vP1基因,将基因序列克隆到载体pFastBac HTA,通过转座反应,与Bacmid DNA重组,重组后转染Sf9昆虫细胞。采用透射电镜观察法、SDS-PAGE、Western-blot方法对vP1蛋白进行验证,利用ELISA、微量中和抗体方法对蛋白的免疫原性进行初步评价。结果 EV71 vP1蛋白相对分子量约为33KD,表达量约10mg/L;ELISA抗体效价为1∶900;中和抗体效价1∶800。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功的表达了EV71 vP1蛋白,并对其免疫原性做了初步评价,为今后EV71 vP1亚单位疫苗的研究提供参考。

关键词： EV71 vP1蛋白 Bac—to—Bac表达系统中和抗体实验免疫原性

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Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

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免疫学杂志 2010年第6期26卷 494-497页

作者：姜德玉刘坤张伟周朋李君丽王希良于三科西北农林科技大学动物医学学院杨凌硕士生712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10071

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体... 详细信息

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。

关键词： Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D Bac-to-Bac杆状病毒表达系统免疫原性中和活性

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淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达

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免疫学杂志 2010年第6期26卷 498-501,506页

作者：张伟刘坤姜德玉赵莉群李君丽于三科王希良西北农林科技大学动物医学学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选... 详细信息

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。

关键词： 2C7表位淋球菌脂寡糖(LOS) 乙型肝炎病毒核心抗原(HBc) 原核表达

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人源靶向补体抑制物CR2-CD59在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 887-890页

作者：郭彦寇志华孙世惠张传福赵光宇于虹宋宏彬乔飞陈万荣周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院疾病控制与预防研究所北京100071 美国南卡医科大学微生物学和免疫学系美国查里斯顿SC29425

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用... 详细信息

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P<0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞 CR2-CD59 补体

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虫媒黄病毒亚基因组RNA

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生命的化学 2010年第2期30卷 227-230页

作者：岳磊刘然江振友秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及... 详细信息

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及两者的杂合RNA分子外,在病毒感染细胞后还能产生一种病毒亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)。近年对这种sgRNA展开了比较多的研究,结果表明,其产生机制与已知的其他病毒sgRNA产生机制并不相同。该sgRNA的产生与虫媒黄病毒基因组3’非编码区所形成的保守二级结构有关,同时宿主核酸酶对其的不完全降解亦有重要作用。虫媒黄病毒基因组3’非编码区中带有多个与病毒复制相关的RNA元件,而sgRNA的发现有助于全面地认识病毒RNA与宿主RNA代谢途径间的相互作用,为最终阐明病毒的致病机制奠定基础。

关键词：虫媒黄病毒非编码区亚基因组RNA

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分枝杆菌噬菌体D29气溶胶的喷雾和采样介质的初步研究

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军事医学科学院院刊 2010年第4期34卷 347-350页

作者：刘克洋杜茜温占波杨文慧李娜董晓凯胡凌飞王洁李劲松鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071 北京军区总医院北京100700

目的评价PBS、SM液、营养肉汤3种不同的采样液对分枝杆菌噬菌体D29的收集能力;D29在3种不同喷雾介质(生理盐水、去离子水和PBS)中的耐雾化性能;PBS作为采样液时,收集到的D29浓度随时间变化趋势。方法用全玻璃液体冲击式采样器AGI-30收集... 详细信息

目的评价PBS、SM液、营养肉汤3种不同的采样液对分枝杆菌噬菌体D29的收集能力;D29在3种不同喷雾介质(生理盐水、去离子水和PBS)中的耐雾化性能;PBS作为采样液时,收集到的D29浓度随时间变化趋势。方法用全玻璃液体冲击式采样器AGI-30收集D29气溶胶并进行判定。结果与结论噬菌体D29在含有微量Tween80的PBS中耐冲击性能最强,将其用于采样能够准确反映气溶胶的浓度,而去离子水作为喷雾介质时,D29气溶胶具有最大的产出量。在D29气溶胶的动物暴露实验中,选择去离子水为喷雾液用于产生气溶胶,采样液为含微量Tween80的PBS。

关键词：分枝杆菌噬菌体 D29气溶胶采样液喷雾液

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