检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2010年第4期17卷 224-227页

作者：阎婷赵彤言董言德李春晓军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

采用T-A克隆技术,在白纹伊蚊β-肌动蛋白的基因序列上设计引物,PCR扩增后将特异性产物连入T载体中,提取质粒,经测序分析验证后,测定浓度,稀释获得标准品,采用SYBR green法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线,作为白纹伊蚊各种基因实时定量... 详细信息

采用T-A克隆技术,在白纹伊蚊β-肌动蛋白的基因序列上设计引物,PCR扩增后将特异性产物连入T载体中,提取质粒,经测序分析验证后,测定浓度,稀释获得标准品,采用SYBR green法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线,作为白纹伊蚊各种基因实时定量PCR检测中的内参照物.结果表明：利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系（斜率为-3.3287,R2=0.9980）;实时定量PCR熔解曲线分析表明,温度在83℃±0.5℃的PCR产物是白纹伊蚊肌动蛋白序列上的特异性产物,表明此标准品是白纹伊蚊肌动蛋白特异性的.本实验成功建立白纹伊蚊β-actin基因实时定量PCR方法,可作为内参照物运用于白纹伊蚊基因差异表达的研究.

关键词：白纹伊蚊肌动蛋白实时定量PCR 内参照物

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基孔肯亚假病毒模型的建立及其在模拟检测中的应用

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生物技术通讯 2010年第5期21卷 641-645页

作者：刘大斌张昕安小平张宝中王盛周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒载体,以之转染细胞以分泌含基孔肯亚病毒核酸序列的假病毒,利用该病毒建立基孔肯亚病毒的模拟检测方法。方法:人工合成基孔肯亚病毒部分保守性核酸序列,连入慢病毒载体,构建含基孔肯亚病毒... 详细信息

目的:构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒载体,以之转染细胞以分泌含基孔肯亚病毒核酸序列的假病毒,利用该病毒建立基孔肯亚病毒的模拟检测方法。方法:人工合成基孔肯亚病毒部分保守性核酸序列,连入慢病毒载体,构建含基孔肯亚病毒核酸序列的重组慢病毒质粒pLenti-chik,该质粒连同辅助质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293FT细胞;72 h后收集上清,用特异引物进行荧光定量RT-PCR检测。结果:建立了一个仅能进行一次复制、高度安全的基孔肯亚假病毒模型;同时采用荧光定量RT-PCR建立了较灵敏的检测病毒分泌的方法。结论:假病毒可以模拟基孔肯亚病毒分泌,但较真病毒安全性更高;用荧光定量的方法可以很灵敏地检测病毒的分泌,为突发基孔肯亚病毒感染的检测做好准备。

关键词：基孔肯亚病毒假病毒检测实时荧光定量RT-PCR

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重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的融合表达及抗原性分析

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生物技术通讯 2010年第1期21卷 32-34页

作者：何斌端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21... 详细信息

目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果:构建了pET32a-fopA载体,重组蛋白FopA表达量约占菌体总蛋白量60%,Western blot分析显示重组FopA蛋白有较好的抗原性。结论:获得了高效表达FopA的pET32a-fopA表达载体,为下一步土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA应用研究奠定了基础。

关键词：重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA 融合表达抗原性

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窄手蚋的重新描述（双翅目：蚋科）

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寄生虫与医学昆虫学报 2010年第3期17卷 174-178页

作者：安继尧严格军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

窄手蚋（Simulium （Simulium） omorii）是Takahasi（1942）发表的新种,当时放在短蚋属（Omiadag）,该蚋标本是采自我国黑龙江省.Takahasi 仅描述了两性成虫和蛹,缺幼虫,况前者也不甚详细 1983年,虞以新和安继尧在我国黑龙江省饶河县... 详细信息

窄手蚋（Simulium （Simulium） omorii）是Takahasi（1942）发表的新种,当时放在短蚋属（Omiadag）,该蚋标本是采自我国黑龙江省.Takahasi 仅描述了两性成虫和蛹,缺幼虫,况前者也不甚详细 1983年,虞以新和安继尧在我国黑龙江省饶河县珍宝岛地区,采到窄手蚋的两性成虫、幼虫和蛹,描述于后供同道者参考.窄手蚋与Rubzov（1956）描述的S. （S.） tenuimanus Enderlein, 1920很近似,不同的是：1. 足色：雌虫,窄手蚋前、中足股节黑色,后足股节基段1/5棕黄色.tenuimanus蚋,前、中、后足股节巧克力棕黑色,仅基部有点黄色.雄虫,窄手蚋后足转节、股节基端部、胫节基端部和中足基节1/2棕黄色,而tenuimanus 除前足基节和后足胫节基部褐色外,余部黑色.2. 窄手蚋中骨圆形或弹头形,前端圆形,后端凹入呈八字形 tenuimanu 中骨箭形,末端尖.标本保存于军事医学科学院医学昆虫标本馆.

关键词：双翅目蚋科蚋属蚋亚属窄手蚋

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6个布鲁氏菌蛋白的克隆、表达及纯化

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免疫学杂志 2010年第7期26卷 620-623页

作者：赵晓燕胡毅伟赵忠鹏李晓楠段越强李培锋王希良内蒙古农业大学动物医学与科学学院呼和浩特硕士生010018 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国农业大学生物学院北京100193

目的构建含6个布鲁氏菌蛋白的原核表达载体,并对其重组蛋白进行诱导表达及纯化。方法以羊种布鲁氏菌16M基因组DNA为模板扩增6个蛋白基因,与载体pET32a(+)连接,转化***21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Westernblot鉴定,采... 详细信息

目的构建含6个布鲁氏菌蛋白的原核表达载体,并对其重组蛋白进行诱导表达及纯化。方法以羊种布鲁氏菌16M基因组DNA为模板扩增6个蛋白基因,与载体pET32a(+)连接,转化***21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Westernblot鉴定,采用HisTrapTMHP纯化目的蛋白。结果成功克隆了6个布鲁氏菌蛋白,经对表达条件进行优化,目的蛋白获得大量表达,纯化后纯度达90%以上。结论获得了纯度较高的6个布鲁氏菌蛋白,为进一步研究其免疫原性及保护性奠定基础。

关键词：布鲁氏菌重组蛋白原核表达

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GENSCREENULTRA HIV抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒的敏感性评价

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中国艾滋病性病 2010年第4期16卷 341-343页

作者：鲍作义刘永健李韩平刘思扬庄道民李林耿海山李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒（HIV1＋2）抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒（GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab）,对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1＋2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别... 详细信息

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒（HIV1＋2）抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒（GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab）,对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1＋2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别使用评价试剂和参比试剂检测621例样本,分析两种试剂检测HIV抗原/抗体的敏感性。结果评价试剂和参比试剂检测502份HIV感染者/AIDS患者临床血浆标本均为阳性,符合率为100%,敏感性为100%。评价试剂和参比试剂检测92份HIV分离培养上清液,评价试剂检出89份阳性、参比试剂检出31份阳性,表明评价试剂检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。另外,又检测了27份HIV抗原系列稀释样本,计算出评价试剂检测HIV抗原的敏感性是参比试剂的4～8倍。结论评价试剂检测HIV抗体的效果与参比试剂相同,检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。

关键词：人类免疫缺陷病毒抗体抗原 GENSCREENULTRA HIV Ag-Ab诊断试剂盒敏感性

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西尼罗病毒一步实时RT-PCR检测准确度评价

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解放军医学杂志 2010年第6期35卷 683-686页

作者：孙后超徐鸣明邓永强何丰冯裕星胡子成秦鄂德谢鹏秦成峰重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解已建立的一步实时RT-PCR对西尼罗病毒感染细胞和组织的灵敏度及其对国内常见的黄病毒属病毒的特异性,为西尼罗病毒感染的实验室检测和流行病学调查奠定基础。方法使用VectorNTISuite8软件比较探针与西尼罗病毒不同系毒株之间的... 详细信息

目的了解已建立的一步实时RT-PCR对西尼罗病毒感染细胞和组织的灵敏度及其对国内常见的黄病毒属病毒的特异性,为西尼罗病毒感染的实验室检测和流行病学调查奠定基础。方法使用VectorNTISuite8软件比较探针与西尼罗病毒不同系毒株之间的同源性。采用西尼罗病毒感染的Vero细胞培养上清和BALB/c小鼠脑组织样本评价一步实时RT-PCR法的灵敏度,同时用国内常见的黄病毒属病毒评价其特异性。结果此一步实时RT-PCR法可用于西尼罗病毒1系多数毒株的检测,灵敏度高,对西尼罗病毒的最低检出浓度为5.75×10-2pfu/ml;与黄病毒属乙型脑炎、登革热、蜱传脑炎以及甲病毒属东部马脑炎等虫媒病毒均未出现交叉反应。结论西尼罗病毒一步实时RT-PCR法具有灵敏度高、特异性强的特点,适用于西尼罗病毒感染细胞和组织的早期检测及流行病学调查。

关键词：西尼罗病毒逆转录聚合酶链反应分子探针技术敏感性与特异性

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我国及部分国家B型肉毒毒素的中毒情况

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生物技术通讯 2010年第1期21卷 103-106,144页

作者：左庭婷端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

肉毒毒素是自然界中已知毒性最强的毒素,通常被分为A～G共7个血清型,其中A、B、E型是最常见的人类中毒型别。肉毒中毒的流行特点与菌体的地域分布、各地居民的饮食习惯和社会活动都有一定关系。目前,除南极洲外的世界各大洲均有B型肉毒... 详细信息

肉毒毒素是自然界中已知毒性最强的毒素,通常被分为A～G共7个血清型,其中A、B、E型是最常见的人类中毒型别。肉毒中毒的流行特点与菌体的地域分布、各地居民的饮食习惯和社会活动都有一定关系。目前,除南极洲外的世界各大洲均有B型肉毒中毒的报道。我国、日本及欧洲B型肉毒中毒主要为家庭自制食物引发的食源性中毒,而美国则主要为婴儿肉毒中毒。近年来,创口型B型肉毒中毒与"注射型吸毒人员"的关联引起了研究者的注意。为了加深对B型肉毒中毒的了解,我们对我国及部分国家和地区的B型肉毒中毒情况做简要介绍。

关键词： B型肉毒毒素中毒流行病学

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结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的表达及其作为检测抗原的初步应用

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生物技术通讯 2010年第4期21卷 501-504页

作者：赵海朱虹宋立华何君檀华端青病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构... 详细信息

目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构建ESXB-ESXA融合蛋白表达载体;重组表达载体转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,Western印迹分析重组蛋白的抗原性;建立以融合重组蛋白为抗原的ELISA和胶体金检测方法,分析其在结核病抗体检测中的应用。结果:构建了ESXB-ESXA融合蛋白的表达载体,重组ESXB-ESXA在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的70%以上;Western印迹分析表明该重组蛋白具有较好的抗原性;ELISA和胶体金检测结果显示,用重组ESXB-ESXA抗原检测临床结核病患者有较好的特异性。结论:重组ESXB-ESXA融合蛋白表达量高并具有较好的抗原性,可作为结核病抗体检测的备选抗原。

关键词：结核病结核分枝杆菌 ESXB ESXA 融合表达

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苏丹瓦乌地区蚊媒密度监测及其影响因素分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2010年第1期17卷 24-28页

作者：孙毅朱紫雯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为明确任务区蚊媒种类、密度及其与环境因素的关系，笔者采用人诱法和容器指数法对苏丹瓦乌地区蚊媒的成虫和幼虫开展了密度监测。结果表明，在瓦乌维和任务区，主要蚊种为淡色库蚊、冈比亚按蚊和阿拉伯按蚊，由旱季进入雨季，蚊虫组成... 详细信息

为明确任务区蚊媒种类、密度及其与环境因素的关系，笔者采用人诱法和容器指数法对苏丹瓦乌地区蚊媒的成虫和幼虫开展了密度监测。结果表明，在瓦乌维和任务区，主要蚊种为淡色库蚊、冈比亚按蚊和阿拉伯按蚊，由旱季进入雨季，蚊虫组成由单一的淡色库蚊变化为3种蚊虫共存的状态。其中阿拉伯按蚊偏好于干燥环境，而冈比亚按蚊则选择湿润环境。同时研究发现，按蚊幼虫选择弱酸性、低盐度、较清澈的积水孳生，水藻和植物有利于其孳生繁衍。库蚊则选择酸性、较浑浊的积水进行孳生。按蚊幼虫的孳生特点和成虫的活动生态特点，为开展任务区疟疾防治工作提供了基础资料和技术支持。

关键词：瓦乌冈比亚库蚊阿拉伯库蚊环境因素疟疾防治

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