检索结果-内蒙古大学图书馆

中华预防医学杂志 2009年第8期43卷 686-689页

作者：温占波赵建军李劲松王洁鹿建春李娜军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心北京100071

目的建立防护面具高效过滤罐微生物气溶胶测试评价方法，对过滤罐的实际防护效果进行测试评价。方法Serratia marcescens作为模式细菌繁殖体气溶胶、Bacillus subtilis var niger芽孢作为模式芽孢气溶胶、噬菌体f2作为模式病毒气溶胶，... 详细信息

目的建立防护面具高效过滤罐微生物气溶胶测试评价方法，对过滤罐的实际防护效果进行测试评价。方法Serratia marcescens作为模式细菌繁殖体气溶胶、Bacillus subtilis var niger芽孢作为模式芽孢气溶胶、噬菌体f2作为模式病毒气溶胶，使用实验室建立的微生物气溶胶检测技术平台，人工发生模式微生物气溶胶，分别在过滤罐过滤前后使用空气微生物采样器进行定量采样，根据过滤前后模式微生物气溶胶的浓度分别计算细菌、芽孢、病毒气溶胶过滤效率。1—1、1—2、1-3、1-44个只含有高效过滤材料的过滤罐分别测试了Serratia marcescens、Bacillus subtilis var niger、噬菌体f2气溶胶的过滤效率。543、5442个装有活性炭的高效过滤罐测试了对Serratia marcescens气溶胶的过滤效率。结果1—1、1—2、1-33个高效过滤罐对Serratia marcesceus、Bacillus subtilis var niger芽孢、噬菌体f2的气溶胶的过滤效率为100．000％，1-4高效过滤罐对Bacillus subtilis var niger芽孢气溶胶的过滤效率为99．997％、Serratia marcescens和噬菌体f2气溶胶的过滤效率均为100．000％。加入活性炭后543、5442个过滤罐对Serratia marcescens气溶胶的过滤效率均为100．000％。结论建立的检测方法可以用于高效过滤罐微生物气溶胶防护效果的评价，高效过滤罐（包括装有活性炭者）微生物气溶胶防护效果均佳。

关键词：过滤防护装置空气微生物学评价研究

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禽流感病毒感染小鼠模型病理损伤及抗原定位研究

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1033-1036页

作者：孙世惠赵光宇于虹郭彦吴小红范薇曾林周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院实验动物中心

目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 ... 详细信息

目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 d后取小鼠肺、脑、脾、肠、心、肝、肾等组织,制备石蜡切片并进行组织病理损伤和抗原定位研究。结果小鼠肺组织表现为弥漫性肺损伤,脑组织出现轻度炎症反应,脾组织结构完整但脾小体可见凋亡细胞,其它脏器组织结构未查见组织病理损伤;利用M2、NS1单抗,采用免疫组织化学方法检测发现小鼠肺、脑、肠等均有M2、NS1抗原分布。结论高致病性H5N1病毒感染可在小鼠肺、脑、肠等多种组织中复制,引起严重的肺组织病理损伤及轻度的脑组织及脾组织病理损伤。

关键词：禽流感病毒(H5N1) 病理损伤病毒复制

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用DREAM技术进行全长质粒快速定点突变

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生物工程学报 2009年第2期25卷 306-312页

作者：张宝中冉多良张昕安小平单云竹周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

利用"设计限制酶辅助突变"(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)进行全长质粒快速定点突变。根据突变位点附近氨基酸靶序列,以简并密码子进行逆向推导,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大... 详细信息

利用"设计限制酶辅助突变"(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)进行全长质粒快速定点突变。根据突变位点附近氨基酸靶序列,以简并密码子进行逆向推导,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变体(Silent mutants),这些突变体中包含大量的限制性酶切位点,选择合适的酶切位点设计引物,用Phusion超保真DNA聚合酶扩增全长质粒的DNA序列,得到的PCR产物用T4多聚核苷酸激酶添加5′磷酸基团后进行平末端连接,转化大肠杆菌受体菌后用设计的酶切位点进行快速筛选。本研究用该方法成功地纠正了长约8 kb的质粒pcDNA3.1-pIgR中的突变碱基,从而获得了多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的野生型氨基酸序列。以上结果表明:利用DREAM技术将限制性酶切位点引入目的基因而不改变目的蛋白质的氨基酸序列,使突变体的筛选简单化;配合使用高保真和高效率的Phusion DNA聚合酶可以进行长达8 kb的全长质粒的快速突变;该方法无需使用定点突变试剂盒和特殊的受体菌,同时避免了核酸杂交以及同位素的使用。

关键词：定点突变聚合酶链反应设计限制酶辅助突变

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抗H5N1病毒嵌合IgA抗体基因的构建及其在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2009年第5期25卷 714-719页

作者：张宝中张昕陈万荣刘大斌王盛安小平冉多良赵光宇周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表... 详细信息

为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表达质粒pEF-IGHA9和pEF-IGK9,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO(CHO-dhfr-)细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合IgA抗体的表达,对纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blotting印迹分析。结果成功地在CHO细胞中表达了抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,为制备抗H5N1重组分泌型IgA预防性抗体制剂奠定了良好的基础。

关键词： H5N1病毒免疫球蛋白基因嵌合IgA抗体 CHO细胞

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冷适应减毒B型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第3期36卷 358-363页

作者：杨鹏辉安文琪石辛甫段跃强罗德炎张鹏飞唐冲邢丽张玉静刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 吉林大学畜牧兽医学院长春130000 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB1... 详细信息

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB123-PA,pAB124-HA,pAB125-NP,pAB126-NA,pAB127-M和pAB128-NS.在成功拯救冷适应A型流感病毒的基础上,利用反向遗传学技术成功获救了具有感染性的重配B型流感病毒株,命名为rMDV-B.该重配病毒株以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架,其中HA和NA来源于2006～2007年当年流行株B/Malaysia/2506/***-B在鸡胚尿囊液和MDCK细胞中的HA效价可达1∶64～1∶512.实验结果暗示:从单一供体病毒株可以产生有效的减毒活B型流感病毒疫苗候选株,能够为将来人用流感疫苗的设计提供可借鉴的模型.

关键词： B型流感病毒反向遗传学 8质粒拯救系统重组流感病毒

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流感病毒免疫防御机制研究进展

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国际免疫学杂志 2009年第4期32卷 267-272页

作者：吕进王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答，在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用。尽管流感病毒经常发生变异，但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用。这一系列免疫... 详细信息

流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答，在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用。尽管流感病毒经常发生变异，但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用。这一系列免疫应答的激发及形成包括多种分子及细胞的参与，其发生、发展及转归直接决定着疾病的严重程度及免疫预防的有效性。了解天然免疫应答、粘膜免疫应答及获得性免疫应答的激发与维持可为流感病毒的防治及疫苗的研制提供思路。

关键词：免疫防御天然免疫应答粘膜免疫获得性免疫应答

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鼠疫耶尔森菌F1抗原的纯化方法改进及其免疫原性的评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 602-606页

作者：祁芝珍赵海红代瑞霞张青雯任玲玲杨永海李存香吴海莲何建魏荣杰王虎杨瑞馥王祖郧王效义青海省地方病预防控制所西宁811602 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法，评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法，结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25％氢氧... 详细信息

目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法，评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法，结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25％氢氧化铝佐剂中，肌肉注射免疫BALB／c小鼠，于初次免疫后第18周皮下攻毒10^4 CFU活鼠疫菌141强毒株。结果一次免疫的两个剂量组之间产生的抗体滴度差异无统计学意义，而加强免疫的两个剂量组中，F1-40μg剂量组产生的抗体滴度明显高于F1-20μg剂量组。F1抗原免疫的小鼠全部存活，而且健康状况良好，对照组小鼠全部死亡。结论本研究提供了一种简单、有效和便于大规模提取F1抗原的方法。提取的F1抗原具有较高的免疫原性，可作为鼠疫亚单位疫苗的重要抗原组分用于鼠疫亚单位疫苗的研制。

关键词：鼠疫耶尔森菌 F1抗原免疫保护

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负链RNA病毒反向遗传学技术的建立及发展应用

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国际免疫学杂志 2009年第1期32卷 43-47页

作者：鹿文葆王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

负链RNA病毒基因组由单负链RNA构成。其基因组RNA需要被转录为mRNA才能引导病毒蛋白在细胞内合成。使用传统的DNA重组技术对负链RNA病毒进行基因操作已经难以奏效。反向遗传学方法是通过反转录病毒RNA为cDNA，从而构建成含有病毒基因组c... 详细信息

负链RNA病毒基因组由单负链RNA构成。其基因组RNA需要被转录为mRNA才能引导病毒蛋白在细胞内合成。使用传统的DNA重组技术对负链RNA病毒进行基因操作已经难以奏效。反向遗传学方法是通过反转录病毒RNA为cDNA，从而构建成含有病毒基因组cDNA的质粒并转染相应细胞产生病毒。通过中间的DNA环节在DNA相对负链RNA病毒基因组进行人工操作，这使得研究者可以自定义产生需要的病毒。因而研究反向遗传学技术的建立、发展过程以及它在相关病毒基因片段结构功能、疫苗研制、外源基因表达、基因治疗等方面的应用很有意义。

关键词：反向遗传学负链RNA病毒感染性克隆cDNA

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HIV的起源与SIV的跨种传播

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 501-504页

作者：李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HI... 详细信息

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HIV毒株的科学发现及跨种传播病毒在新型宿主中的适应性进化,分析了这些发现的科学和公共卫生意义。

关键词：人免疫缺陷病毒非人灵长类动物免疫缺陷病毒起源进化

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分枝杆菌噬菌体D29裂解酶基因的表达与鉴定

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军事医学科学院院刊 2009年第2期33卷 113-116页

作者：杨文慧于龙胡凌飞温占波李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室生物防护装备工程技术研究中心北京100071

目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性。方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分... 详细信息

目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性。方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒后,在耻垢分枝杆菌中进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE检测,对诱导培养重组菌进行混浊度测定、透射电镜观察以鉴定其裂解活性。结果及结论:成功构建了重组穿梭质粒pUV-gene10并使gene10在耻垢分枝杆菌中获得表达,表达产物能有效降低宿主菌培养液混浊度,降解宿主菌细胞壁,证实gene10表达产物为噬菌体裂解酶,并推测其为非经典分泌蛋白。

关键词：裂解酶分枝杆菌噬菌体D29 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒

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