检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2008年第2期32卷 106-110,120页

作者：韩剑峰姜涛陈水平李晓峰秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观... 详细信息

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观察突变病毒与原型病毒对细胞感染性的差异。结果:获得了S蛋白不同位点的突变病毒,受体结合位点的突变明显降低了BJ01株病毒对Vero E6细胞的感染性,突变病毒的蚀斑滴度比原型病毒降低3个数量级。结论:SARS-CoV BJ01株S蛋白的受体结合位点及七肽重复区与病毒的毒力及致病性密切相关。

关键词： SARS冠状病毒刺突蛋白受体结合域七肽重复区

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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 397-402页

作者：赵慧陈水平段鸿元邓永强姜涛赵卓于曼康晓平杨保安李晓萸秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的... 详细信息

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础.

关键词： SARS冠状病毒,RNAi,siRNA

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西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能研究

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解放军医学杂志 2008年第7期33卷 816-822页

作者：李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以... 详细信息

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以上此为模板,经体外RdRp活性分析及凝胶阻滞试验,观察NS5的RdRp活性及与突变体的结合能力,再将突变位点引入该病毒感染性全长cDNA克隆,初步观察突变体恢复病毒的生物学特性。结果5′UTR中第45-60位核苷酸缺失的突变体无法合成子链,与NS5的结合能力也显著降低。第8和9位核苷酸改变的突变体则丧失了合成子代RNA及与NS5的结合能力,第8、9、69和70位核苷酸突变后形成的结构恢复突变体则可以合成子链RNA,并可与NS5特异性结合。同时,第45-60位核苷酸缺失及第8和9位核苷酸突变的恢复病毒的增殖能力也显著降低。结论Chin-01株5′UTR中的第45-60位及第8、9、69和70位核苷酸维持的结构可能是该病毒基因组复制的关键位点。

关键词：西尼罗病毒 5′非翻译区病毒非结构蛋白质类

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感染布氏杆菌后的THP-1细胞的蛋白质组学研究

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微生物学报 2006年第4期46卷 629-634页

作者：高永辉任昶应天翼王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室北京100071 北京朝阳医院北京100043 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了3... 详细信息

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了38个差异表达的蛋白质点。这些点经过胶内酶切后进行MALDI-TOF质谱鉴定,每个蛋白质点的肽质量指纹图谱都在人类的蛋白质组数据库中用Mascot进行检索后,发现这些差异表达的蛋白主要集中在结构蛋白,信号传导途径和物质代谢等领域,还有一些功能未知的蛋白。这一结果为研究布氏杆菌的感染与致病机制提供了方向,对深入探讨病原菌-宿主的相互作用模式具有参考价值。

关键词：布氏杆菌 THP-1细胞比较蛋白质组学双向电泳质谱

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登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

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军事医学科学院院刊 2008年第3期32卷 201-206页

作者：于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建... 详细信息

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、***报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测。结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调。结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用。

关键词：登革病毒复制子报告基因复制翻译

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2011年第一届牛津国际噬菌体大会介绍

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生物工程学报 2012年第3期28卷 368-375页

作者：范华昊童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

1会议简介噬菌体是一类以原核生物（包括细菌、真菌、放线菌或螺旋体等）为宿主的病毒,它最早于1915年被发现,之后,d＇Herelle在1917年再次发现了这种能裂解细菌的生物类群,并将其命名为＂bacteriophage＂,简称＂phage＂。近年来随着细... 详细信息

1会议简介噬菌体是一类以原核生物（包括细菌、真菌、放线菌或螺旋体等）为宿主的病毒,它最早于1915年被发现,之后,d＇Herelle在1917年再次发现了这种能裂解细菌的生物类群,并将其命名为＂bacteriophage＂,简称＂phage＂。近年来随着细菌耐药形势的日益严峻,越来越多有远见和责任感的科学家和企业开始把目光投向这种细菌的天然病毒，越来越多的科学家开始对噬菌体产生浓厚的兴趣，更多噬菌体产品开始走向市场。

关键词：噬菌体国际牛津会议简介原核生物生物类群科学家细菌

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荧光定量PCR检测嗜吞噬细胞无形体

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中国人兽共患病学报 2006年第4期22卷 289-293页

作者：张晶波温博海陈梅玲朱丽娜邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量... 详细信息

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环闻值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．996）；与套式PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌DNA样本，检出结果几乎为0；对荧光定量PCR检测重复性进行分析，变异系数（CV）批内和批间误差在0-2．1％之间，证明该荧光定量PCR具有种特异性和良好的重复性。用荧光定量PCR检测体疑染嗜吞噬细胞无形体的10份蜱和30份小鼠脾脏标本，结果与套式PCR检测结果有密切相关性，但是定量PCR检测敏感性和准确率均高于套式PCR。结论本研究建立的检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，特别适合检出样本中微量嗜吞噬细胞无形体。

关键词：嗜吞噬细胞无形体实时定量PCR gltA基因埃立克体感染

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利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 27-32页

作者：张建山陈泽良宋亚军郭兆彪王津王红霞翟俊辉杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板... 详细信息

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板载体pBSMH。设计与待标记基因末端及其下游同源的引物,从模板载体上扩增标签与抗性基因的融合模块,获得两端带同源区的PCR产物,电击转化鼠疫菌感受态细胞。在λRed重组系统的辅助下,标签和抗性基因重组到目的基因的下游,得到表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用针对表位标签的单克隆抗体进行Westernblot分析,验证C末端标记目的蛋白的表达。结果:成功构建了组氨酸标签与抗性基因融合的质粒,以该质粒作为模板,扩增标记标签盒,对鼠疫菌的rpoS基因进行了标记,利用针对组氨酸标签的抗体能够检测到rpoS基因的表达。结论:基于重组工程的基因标记技术可以为基因功能研究提供一个有价值的研究手段。

关键词：融合PCR λRed重组系统基因标记 Western blot

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中国登革2型病毒反向遗传系统的构建与鉴定

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科学通报 2006年第15期51卷 1764-1770页

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电... 详细信息

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果表明,获得的基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该反向遗传系统的构建为深入探讨登革病毒的致病机理及新型疫苗的研制奠定了基础.

关键词：登革病毒反向遗传系统恢复病毒

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新型阳离子基因传递载体PEI-PBLG的细胞转染研究

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生物工程学报 2007年第2期23卷 229-234页

作者：尉继征林磊熊伟祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性... 详细信息

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI（10kD）-PBLG、PEI（25kD）．PBLG、PEI（10kD）和PEI（25kD）的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI（10kD）-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI（10kD）-PBLG可包裹质粒形成粒径100—120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10％血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG（10kD）／pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45．02％，高于Pri（10kD）／pEGFP的29．16％；PEI（10kD）-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI（25kD）、PEI（10kD）和PEI（25kD）-PBLG。新型阳离子多聚物PEI（10kD）-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

关键词：聚乙烯亚胺聚谷氨酸基因传递转染效率细胞毒性

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