检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2020年第1期31卷 19-23页

作者：孙志会罗声栋何泽民胡燕宋立华王景林病原微生物生物安全国家重点实验室军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 解放军总医院第五医学中心临床研究管理中心北京100039

目的:在原核表达系统中表达沙眼衣原体CT135蛋白,并制备抗体,建立CT135蛋白免疫检测方法。方法:将沙眼衣原体CT135基因(1083 bp)克隆入带有His标签的pET-32a(+)载体中,通过NdeⅠ/XhoⅠ双酶切构建CT135全长的重组质粒WT,CT135基因N端逐... 详细信息

目的:在原核表达系统中表达沙眼衣原体CT135蛋白,并制备抗体,建立CT135蛋白免疫检测方法。方法:将沙眼衣原体CT135基因(1083 bp)克隆入带有His标签的pET-32a(+)载体中,通过NdeⅠ/XhoⅠ双酶切构建CT135全长的重组质粒WT,CT135基因N端逐渐缩短的重组质粒MT1、MT2、MT3,以及CT135基因C端逐渐缩短的重组质粒MT4、MT5、MT6,在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,然后腹腔注射5周龄BALB/c雌鼠制备抗血清。结果:Western印迹使用高灵敏的二抗通过红外扫描系统检测到所有质粒可表达重组蛋白,但考马斯亮蓝染色结果显示只有MT6可高表达重组蛋白。制备纯化了MT6重组蛋白,通过腹腔注射免疫法制备了小鼠抗MT6血清。结论:大肠杆菌表达系统中,沙眼衣原体CT135蛋白的N端片段(1~374 bp)可以获得高表达。小鼠抗MT6血清的制备为后期检测沙眼衣原体CT135蛋白的表达奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 CT135基因蛋白表达

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鼠疫耶尔森氏菌基因转录调控的研究进展

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微生物学通报 2019年第4期46卷 891-899页

作者：刘磊郑山根郑娅琼蔡李平杨瑞馥中国人民解放军武汉总医院输血科湖北武汉430070 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

细菌基因转录调控是多种调控机制中研究最为广泛的一种模式。复杂而精细的基因转录调控网络有助于细菌应答外界环境压力,在病原菌致病与传播中均发挥着关键作用。本文以鼠疫耶尔森氏菌基因转录调控的相关研究进展为基础展开论述,重点阐... 详细信息

细菌基因转录调控是多种调控机制中研究最为广泛的一种模式。复杂而精细的基因转录调控网络有助于细菌应答外界环境压力,在病原菌致病与传播中均发挥着关键作用。本文以鼠疫耶尔森氏菌基因转录调控的相关研究进展为基础展开论述,重点阐述细菌的转录调控机制、转录调控的研究策略及鼠疫菌致病与传播中转录调控的作用,以期为深入研究鼠疫菌致病与传播中的基因转录调控分子机制提供新思路。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因转录调控生物膜毒力

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鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品的研制

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微生物学免疫学进展 2020年第1期48卷 44-49页

作者：张园园张平平王春娥赵爱华杨瑞馥魏东中国食品药品检定研究院卫生部生物技术检定方法及其标准化重点实验室北京102629 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)抗原检测试剂用国家参考品。方法通过对5株鼠疫耶尔森菌和10株非鼠疫耶尔森菌的菌种检定、培养及灭活、抗原检测,组建鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品。对参考品进行样品均匀性以及稳定性评... 详细信息

目的研制鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)抗原检测试剂用国家参考品。方法通过对5株鼠疫耶尔森菌和10株非鼠疫耶尔森菌的菌种检定、培养及灭活、抗原检测,组建鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品。对参考品进行样品均匀性以及稳定性评估,组织5家实验室协作标定。结果参考品由5份阳性、10份阴性、1份最低检出量以及1份重复性样品组成,均匀性和稳定性良好。协作标定结果显示:①5份阳性参考品阳性率100%;②10份阴性参考品阴性率100%;③最低检出量参考品的检出量不高于1.0×10~6个菌/mL;④重复性参考品检测反应结果应一致(酶联免疫法、上转发光免疫层析法等CV<5%)。结论建立的鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂用国家参考品填补了相关领域的空白,可用于相关试剂的质量控制。

关键词：鼠疫耶尔森菌抗原检测试剂国家参考品

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Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建

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动物医学进展 2019年第5期40卷 13-17页

作者：黄静高洁夏苏苏金志颖康琳高姗杨浩辛文文赵宝华王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学河北石家庄050024

应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中... 详细信息

应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中,用嘌呤霉素筛选敲除Annexin A2蛋白的MDCK细胞株,并通过测序和Western blot验证敲除效果。通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的Annexin A2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。测序结果和Western blot结果表明,通过Crispr/Cas9技术成功敲除了MDCK细胞的Annexin A2基因,但细胞毒性试验结果表明,敲除Annexin A2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。结果表明,Annexin A2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体,研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法,构建的Annexin A2基因敲除的MDCK细胞也为Annexin A2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。

关键词： Crispr/Cas9技术基因敲除 Annexin A2 MDCK细胞系

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媒介蚊虫抗病毒重要途径的研究进展

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寄生虫与医学昆虫学报 2020年第3期27卷 189-198页

作者：朱春玲李金福郭晓霞赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 贵州医科大学人体寄生虫学教研室贵州贵阳550000

蚊虫是蚊媒病的重要传播媒介,可传播多种蚊媒病毒,如乙型脑炎病毒、登革热病毒和寨卡病毒等,对全球人类和动物健康构成巨大威胁,媒介蚊虫的防治仍然是限制蚊媒病毒传播的主要途径。了解蚊虫如何抵抗病毒感染,病毒如何在蚊虫体内持续稳... 详细信息

蚊虫是蚊媒病的重要传播媒介,可传播多种蚊媒病毒,如乙型脑炎病毒、登革热病毒和寨卡病毒等,对全球人类和动物健康构成巨大威胁,媒介蚊虫的防治仍然是限制蚊媒病毒传播的主要途径。了解蚊虫如何抵抗病毒感染,病毒如何在蚊虫体内持续稳定增殖,可为发展新的蚊虫控制策略提供新的理论基础。本文主要综述小RNA干扰(RNAi)和一些保守的固有免疫信号途径在蚊虫体内发挥抗病毒机制的相关研究进展。

关键词：蚊虫蚊媒病毒 RNAi 固有免疫

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布鲁氏菌抗原检测试剂用国家参考品的研制

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中国医药生物技术 2020年第3期15卷 255-259页

目的研制布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。方法将3株布鲁氏菌标准株和10株阴性参考菌株在各自适宜的培养基和温度下进行培养,收集新鲜培养物并灭活,采用比浊法制备阳性和阴性参考品菌液;分光光度法制备最低检出量和重复性参考品... 详细信息

目的研制布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。方法将3株布鲁氏菌标准株和10株阴性参考菌株在各自适宜的培养基和温度下进行培养,收集新鲜培养物并灭活,采用比浊法制备阳性和阴性参考品菌液;分光光度法制备最低检出量和重复性参考品菌液。对参考品进行均匀性检测和稳定性试验,组织4个实验室对布鲁氏菌抗原检测试剂用参考品进行协作标定。结果建立了由3株布鲁氏菌为阳性参考品、10株阴性菌为阴性参考品、最低检出量参考品及重复性参考品组成的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。该参考品具有较好的均匀性及稳定性。协作标定结果为阳性参考品符合率均为100%,阴性参考品符合率均为90%,最低检出量参考品的检出限为1×10^7~1×10^6个/ml之间,重复性参考品均符合规定。结论研制的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品可用于布鲁氏菌抗原检测试剂的质量控制。

关键词：布鲁氏菌抗原国家参考品均匀性稳定性

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胞外囊泡介导的虫媒病毒传播机制及其应用前景

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寄生虫与医学昆虫学报 2020年第4期27卷 264-269页

作者：王欣秦通张美娜孙毅淮安市清江浦区疾病预防控制中心江苏淮安223001 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京市虫媒病与自然疫源性疾病重点实验室北京100071

针对新型病毒的疫苗和特效药物缺乏,导致虫媒病毒的防控形式日益严峻。虫媒病毒在媒介、宿主之间跨物种传播机制,是当前虫媒研究的热点之一。胞外囊泡不但是细胞间通讯的信使,也参与病毒的入侵和释放。本文重点围绕虫媒病毒如何利用胞... 详细信息

针对新型病毒的疫苗和特效药物缺乏,导致虫媒病毒的防控形式日益严峻。虫媒病毒在媒介、宿主之间跨物种传播机制,是当前虫媒研究的热点之一。胞外囊泡不但是细胞间通讯的信使,也参与病毒的入侵和释放。本文重点围绕虫媒病毒如何利用胞外囊泡进行传播的机制进行综述,为相关虫媒病毒疫苗和药物的研究提供参考。

关键词：胞外囊泡媒介虫媒病毒传播

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云南省腾冲市牛羊感染梨形虫的分子流行病学调查

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畜牧与兽医 2020年第3期52卷 61-68页

作者：沈雪鹰何志海傅国璋姚明国张云江佳富孙毅蒋宝贵刘洪波杜春红云南省地方病防治所云南大理671000 云南省腾冲市动物疫病控制中心云南腾冲679100 大理大学公共卫生学院云南大理671000 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071

为了解腾冲市牛、羊感染梨形虫的流行情况,本研究选择腾冲市11个乡镇为采样点,采集牛、羊血液样本,采用分子生物学方法,扩增包括泰勒虫属和巴贝斯虫属在内的梨形虫科18S rRNA基因约1600 bp片段,阳性产物进行测序,根据序列同源性比对和... 详细信息

为了解腾冲市牛、羊感染梨形虫的流行情况,本研究选择腾冲市11个乡镇为采样点,采集牛、羊血液样本,采用分子生物学方法,扩增包括泰勒虫属和巴贝斯虫属在内的梨形虫科18S rRNA基因约1600 bp片段,阳性产物进行测序,根据序列同源性比对和遗传进化分析,进行虫种鉴定。共采集758头牛、羊的血样,检出阳性207头,总阳性率27.31%。其中牛、羊阳性率分别为45.02%(149/331)、13.58%(58/427)。11个乡镇的牛均有检出,6个乡镇的羊有阳性。检出虫种包括巴贝斯虫(Babesia)和泰勒虫(Theileria)两属共13种,均为蜱传血液原虫,泰勒虫占82.13%(170/207),巴贝斯虫占17.87%(37/207)。巴贝斯虫种类包括:狍巴贝斯虫(***)、猎户巴贝斯虫(***)、双芽巴贝斯虫(***)、牛巴贝斯虫(***)、微小巴贝斯虫(***)等5种;泰勒虫种类包括:吕氏泰勒虫(***)、环形泰勒虫(***)、水牛泰勒虫(***)、东方泰勒虫(***)、瑟氏泰勒虫(***)、绵羊泰勒虫(***)、附膜泰勒虫(***)和一种新的未命名泰勒虫共8种。牛感染6种泰勒虫和4种巴贝斯虫,羊感染3种泰勒虫和2种巴贝斯虫。该结果表明腾冲市养殖的牛羊存在梨形虫病的广泛流行,且虫种丰富,具有较高的多样性特征,需加强防范。

关键词：家畜梨形虫分子流行病学云南腾冲

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一株肺炎克雷伯菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

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微生物学通报 2019年第12期46卷 3402-3413页

作者：王九儒赵飞扬李曼莉裴广倩范航张湘莉兰米志强童贻刚北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 青岛农业大学动物医学院山东青岛266109

【背景】随着抗生素的广泛使用甚至滥用,细菌耐药性问题日益显著,利用噬菌体治疗耐药致病菌的方法重新开始被人们关注。【目的】对一株烈性肺炎克雷伯菌噬菌体vB_KpnP_IME279进行生物学特性研究及生物信息学分析。【方法】以一株多重耐... 详细信息

【背景】随着抗生素的广泛使用甚至滥用,细菌耐药性问题日益显著,利用噬菌体治疗耐药致病菌的方法重新开始被人们关注。【目的】对一株烈性肺炎克雷伯菌噬菌体vB_KpnP_IME279进行生物学特性研究及生物信息学分析。【方法】以一株多重耐药的肺炎克雷伯菌为宿主菌,从医院污水中分离噬菌体,应用双层平板法检测噬菌体效价、最佳感染复数(Optimal MOI)、一步生长曲线以及裂解谱,纯化后通过透射电镜观察噬菌体形态;应用蛋白酶K/SDS法提取噬菌体全基因组,使用Illumina MiSeq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。【结果】分离到一株新的肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为vB_KpnP_IME279;其最佳感染复数为0.1,一步生长曲线显示潜伏期为20 min,平均裂解量140 PFU/cell,电镜观察显示该噬菌体属于短尾噬菌体科(Podoviridae)。基因组测序表明,噬菌体基因组全长为42 518 bp,(G+C)mol%含量为59.3%。BLASTn比对结果表明,该噬菌体与目前已知噬菌体的相似性较低,基因组仅70%区域与已知噬菌体有同源性。构建噬菌体主要衣壳蛋白的基因进化树,分析了噬菌体IME279与其他短尾科噬菌体的进化关系,结果表明该噬菌体是短尾科噬菌体的一名新成员。【结论】分离鉴定了一株新的肺炎克雷伯菌噬菌体,进行了生物学特性、全基因组测序和生物信息学分析,为研究肺炎克雷伯菌噬菌体与宿主之间的相互作用关系以及治疗多重耐药细菌感染奠定了基础。

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性全基因组分析

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三带喙库蚊微卫星标记的筛选及遗传多样性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2020年第4期27卷 218-222页

作者：褚宏亮吴治明田野高剑周明浩赵彤言江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京市虫媒病与自然疫源性疾病重点实验室北京100071

为了便于对我国三带喙库蚊种群的遗传结构和多样性进行动态检测,本研究利用磁珠富集法进行三带喙库蚊微卫星标记的开发和筛选,共获得40个微卫星位点,且位点的多态性验证结果表明:有24个位点在不同三带喙库蚊地理株间呈现多态性。微卫星... 详细信息

为了便于对我国三带喙库蚊种群的遗传结构和多样性进行动态检测,本研究利用磁珠富集法进行三带喙库蚊微卫星标记的开发和筛选,共获得40个微卫星位点,且位点的多态性验证结果表明:有24个位点在不同三带喙库蚊地理株间呈现多态性。微卫星位点的遗传多样性分析结果表明:各位点的平均多态信息含量(PIC)和香农指数(SI)均较高,其中位点P17最高(PIC=0.853,SI=2.281),最低的为位点P40(PIC=0.503,SI=1.195),都属于高度多态性位点,适用于后续三带喙库蚊种群遗传多样性及遗传结构的研究。

关键词：三带喙库蚊日本脑炎病毒磁珠富集法微卫星标记遗传多样性

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