检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第1期46卷 136-138页

作者：史晶王慧荫俊侯晓军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以设计合成的A型肉毒毒素表位模拟肽为亲和靶标,对噬菌体随机肽库进行筛选,寻找能与A型肉毒毒素表位模拟肽特异结合并能拮抗毒素毒性效应的分子,通过ELISA鉴定阳性克隆,并对鉴定的阳性克隆进行特异性分析及DNA测序。氨基酸序列同源性分... 详细信息

以设计合成的A型肉毒毒素表位模拟肽为亲和靶标,对噬菌体随机肽库进行筛选,寻找能与A型肉毒毒素表位模拟肽特异结合并能拮抗毒素毒性效应的分子,通过ELISA鉴定阳性克隆,并对鉴定的阳性克隆进行特异性分析及DNA测序。氨基酸序列同源性分析发现,针对P4、P5表位模拟肽获得了两条特异的结合序列,并通过动物保护实验在噬菌体展示肽水平对特异结合分子的毒素毒性拮抗效应进行了初步研究,初步证明结合肽对A型肉毒毒素有一定的保护作用。

关键词： A型肉毒毒素表位噬菌体肽文库

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人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 145-148页

作者：李冰张军徐俊杰刘树玲付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框... 详细信息

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。

关键词：单链抗体免疫原性人源化炭疽

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实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体

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中华流行病学杂志 2007年第3期28卷 277-281页

作者：张晶波温博海陈梅玲李丽莉邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时... 详细信息

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法，对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析，并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．997）；与普通PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，除军团菌检出微弱信号（2个拷贝）外，其余检出结果均为0；对重复性进行了评价，批内和批间的变异系数在0．2％～1．9％之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本，在感染后第2天、第3天、第5天，检出少量的汉赛巴通体，在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性，可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。

关键词：汉赛巴通体巴通体感染实时定量PCR

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利用噬菌体随机肽库筛选可结合志贺毒素B亚单位的短肽序列

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微生物学报 2006年第5期46卷 749-752页

作者：包士中王慧荫俊杨慧盈史晶军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以制备的重组志贺毒素B亚单位(StxB)为靶标,利用噬菌体展示亲和淘选技术,经4轮筛选,从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆,对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定,其中A6序列出现16次,A9和A3序列分... 详细信息

以制备的重组志贺毒素B亚单位(StxB)为靶标,利用噬菌体展示亲和淘选技术,经4轮筛选,从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆,对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定,其中A6序列出现16次,A9和A3序列分别出现2次和3次。为评价筛选克隆中和毒素毒性的能力,将展示肽出现频率最高的A6噬菌体克隆,体外与志贺毒素孵育进行动物试验,动物存活率达33.3%,表明毒素的毒性得到部分抑制,A6短肽可能发展成为志贺毒素的拮抗剂。

关键词：志贺毒素B亚单位噬菌体展示技术淘选毒性中和试验

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HSP65-MUC1 VNTR_2融合蛋白的表达、纯化及其抗肿瘤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1014-1016,1024页

作者：郑玉玲江华王希良姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-M... 详细信息

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导表达;利用单克隆抗体(mAb)进行Westernblot鉴定,以Q柱和凝胶过滤纯化获得纯化蛋白。通过建立转染人MUC1基因的B16黑色素瘤小鼠肿瘤模型,在C57BL/6小鼠体内研究HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白的肿瘤生长抑制活性。结果:获得的结核分支杆菌HSP65基因和人MUC1基因VNTR区的2个重复片段,经测序证明分别与GenBank中结核杆菌HSP65基因和人MUC1基因的VNTR完全相符;构建的原核表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+)可稳定的可溶性表达HSP65-MUC1VNTR2蛋白;经Q柱和凝胶过滤纯化,纯化的目的蛋白纯度达95%以上;利用鼠抗人MUC1mAb对表达蛋白进行验证,结果阳性;小鼠肿瘤预防免疫实验表明,实验组小鼠抑瘤率大于对照组,且具有明显性差异。结论:成功地利用原核表达系统实现了对HSP65-MUC1VNTR2蛋白的可溶性表达,并对其体内预防实验进行了初步研究,证明该融合蛋白能明显抑制表达MUC1的肿瘤生长。为进一步评价其作为肿瘤疫苗可能性的研究打下了基础。

关键词：热休克蛋白65 MUC1 VNTR 纯化预防免疫

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实时荧光定量PCR检测普氏立克次体

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中华流行病学杂志 2006年第11期27卷 963-967页

作者：杨晓陈梅玲温博海牛东升朱丽娜李青凤孙长俭军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因(ompB)序列设计引物和探针,以克隆的OmpB基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900型)上建立实时荧光定量检测方法... 详细信息

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因(ompB)序列设计引物和探针,以克隆的OmpB基因片段作DNA模板,在荧光定量PCR检测仪(ABI 7900型)上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0．999)；与巢式PCR相比较,荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测莫氏立克次体及其他相关立克次体和细菌DNA,检出结果均为阴性。用荧光定量PCR检测普氏立克次体感染的豚鼠血标本,某些样本检测为阳性,而用巢式PCR检测的结果均为阴性。结论研究中建立的检测普氏立克次体实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量普氏立克次体DNA,可用作临床实验室快速确诊流行性斑疹伤寒。

关键词：流行性斑疹伤寒普氏立克次体实时定量PCR 外膜蛋白B基因

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中国大林姬鼠携带Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征分析

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中华流行病学杂志 2007年第5期28卷 482-486页

作者：张文义江佳富姚昆吴晓明左曙青詹琳褚宸一赵秋敏张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林... 详细信息

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林姬鼠肺标本JilinAP06中分别扩增出长度383 bp（M基因）和1696 bp（S基因）大小的目的eDNA片段,其S基因全长由1696个核苷酸组成,完整的开放阅读框从37位核苷酸至1323位核苷酸,共1287个核苷酸,编码429个氨基酸的蛋白。JilinAP06 S基因与1378、Liu株同源性最高,与H5株同源性次之,与AP63、AP61和AP1371同源性为91．0%～91．7%,与76．118同源性为81．0%。S全序列基因推导的氨基酸序列与其他汉坦病毒已知序列比较显示：JilinAP06与AP1371同源性最高（98．4%）,与AP61同源性为98．1%,与AP63和Liu、B78和H5株同源性为97．2%～97．9%,与76-118同源性为95．1%。系统发育分析结果显示：JilinAP06与Amur类汉坦病毒构成一个相对独立的分支。M基因片段同源性比较和系统发育分分析结果与基于S基因全长得到的结果一致.结论中国大林姬鼠存在Amur类病毒，大林姬鼠很可能为Amur类病毒的自然宿主和人群Amur类病毒感染的重要来源。

关键词：汉坦病毒 Amur病毒大林姬鼠

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人源抗狂犬病毒单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

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微生物学报 2007年第4期47卷 673-676页

作者：蔡昆王慧包士中史晶侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱... 详细信息

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性。结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白。荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高。这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料。

关键词：狂犬病毒单链二硫键稳定抗体表达

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大肠埃希菌的群体基因组学研究

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中华预防医学杂志 2016年第6期50卷 554-558页

作者：武雅蓉杨瑞馥崔玉军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

将群体遗传学的理论与方法应用于特定种群多个分离株的全基因组序列中，进行数据挖掘和分析的学科称为群体基因组学（population genomics）。近年来，测序技术的迅猛发展使得低成本、快速获得大量个体全基因组序列成为可能，这推动了... 详细信息

将群体遗传学的理论与方法应用于特定种群多个分离株的全基因组序列中，进行数据挖掘和分析的学科称为群体基因组学（population genomics）。近年来，测序技术的迅猛发展使得低成本、快速获得大量个体全基因组序列成为可能，这推动了群体基因组学在进化领域的广泛应用。本文以经典模式生物大肠埃希菌为例，回顾了大肠埃希菌A、B1、B2、D和E五个基因型之间进化关系的确立历程；总结了基因组突变率、选择信号以及适应性进化模式的分析实例；并对群体基因组学在应对O157：H7和O104：H4菌株所致疫情暴发中的应用进行了综述。这些研究结果说明，尽管发展时间较短，群体基因组学在解析细菌种群结构、探索进化规律以及疾病暴发应对等领域已经发挥了重要作用；加强该学科研究对大肠埃希菌以及其他病原细菌的进化与防控研究工作均有积极意义。

关键词：大肠杆菌基因组遗传学,群体种群结构流行病学

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TBEV对人神经细胞致病性的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第5期32卷 415-418页

作者：魏婧靖李裕昌吴晓燕司炳银张雨李靖户义祝庆余杨银辉康晓平军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK－N－SH，取不同时间点的细胞培养上清，分别采用real－timeRT－PCR方法及空斑测定的方法测定... 详细信息

目的确定蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK－N－SH，取不同时间点的细胞培养上清，分别采用real－timeRT－PCR方法及空斑测定的方法测定病毒滴度，以确定TBEV在SK－N－SH细胞中的复制增殖情况；同时进行细胞形态观察及免疫荧光检测，以确定TBEV感染后的SK－N－SH细胞形态变化。结果TBEV感染SK－N－SH细胞后，可进行大量复制增殖，感染后3d，病毒滴度达到峰值，可达2．92×10＾7PFU／ml，感染细胞产生明显的形态改变，免疫荧光法可检测到细胞内的病毒粒子。结论TBEV可在人神经母瘤细胞SK－N－SH中大量复制增殖，并可造成细胞明显的形态改变，因此人神经母瘤细胞SK-N-SH可以作为TBEV培养良好的细胞模型。

关键词：蜱传脑炎病毒神经细胞致病性

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