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免疫学杂志 2023年第6期39卷 539-545页

作者：李欣昱谭凌云孙千姿李德雨赵红赵怀龙杨盼韩越郑学星贺威王慧赵忠鹏安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 济南市疾病预防控制中心病毒性疾病检验所 250021 山东大学齐鲁医学院公共卫生学院济南250012

目的本研究旨在建立新型布尼亚病毒抗体检测的高特异性、低成本间接ELISA方法。方法通过优化抗原表达、纯化、包被、血清稀释、孵育时间等条件,以Gn的截短蛋白Gn2为包被抗原,开发了一种间接ELISA方法。检测该方法的稳定性、敏感性、特... 详细信息

目的本研究旨在建立新型布尼亚病毒抗体检测的高特异性、低成本间接ELISA方法。方法通过优化抗原表达、纯化、包被、血清稀释、孵育时间等条件,以Gn的截短蛋白Gn2为包被抗原,开发了一种间接ELISA方法。检测该方法的稳定性、敏感性、特异性、符合率。结果批内和批间变异系数均小于10%,阳性血清临床符合率达76.9%(10/13),阴性血清临床符合率达86.7%(26/30)。结论本研究所建立的间接ELISA方法可用于临床血清样品的检测,为发热伴血小板减少综合征的疾病诊断和监测提供了较为可靠和廉价的检测方法。

关键词：新型布尼亚病毒原核表达 Gn2蛋白间接ELISA

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大肠杆菌裂解性噬菌体生物学特性及其解聚酶活性验证

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中国兽医学报 2022年第12期42卷 2394-2400页

作者：吕金晖于诗筠喻鑫婷张雅倩崔玉军黄海龙米志强张加力吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事科学院、军事医学研究院、微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

利用禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)从鸡粪中分离出1株裂解性噬菌体,测定噬菌体相关生物学特性,对噬菌体高通量测序、克隆、表达并纯化得到噬菌体来源解聚酶,通过苯酚硫酸法和联合血清杀菌验证解聚酶的活性... 详细信息

利用禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)从鸡粪中分离出1株裂解性噬菌体,测定噬菌体相关生物学特性,对噬菌体高通量测序、克隆、表达并纯化得到噬菌体来源解聚酶,通过苯酚硫酸法和联合血清杀菌验证解聚酶的活性。结果显示,该噬菌体感染宿主菌潜伏期小于5 min,感染25 min后达到平台期,噬菌体源性的解聚酶可以特异性降解宿主菌表面多糖,同时可以大幅度提高猴血清对宿主菌的杀灭作用。本试验一方面验证了噬菌体源性解聚酶的活性,另一方面给抗生素替代物提供了一个新的选择。

关键词：大肠杆菌噬菌体生物学特性解聚酶

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人类呼吸道病毒核酸检测技术研究进展

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病毒学报 2022年第4期38卷 965-973页

作者：柳婷婷徐靖淋郭子槊辛文文赵宝华康琳河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

呼吸道病毒感染是威胁人类健康的主要疾病之一,大约80%的呼吸道感染是由病毒引起的。快速准确地检测与鉴定呼吸道病毒具有重要临床意义,是应对突发性传染疾病公共卫生事件,防控疫病的关键。随着分子生物学的不断发展,基于核酸的检测技... 详细信息

呼吸道病毒感染是威胁人类健康的主要疾病之一,大约80%的呼吸道感染是由病毒引起的。快速准确地检测与鉴定呼吸道病毒具有重要临床意义,是应对突发性传染疾病公共卫生事件,防控疫病的关键。随着分子生物学的不断发展,基于核酸的检测技术日新月异。本文综述了针对人类呼吸道病毒基于核酸的检测技术应用现状,并分析对比了各技术的优缺点。此外,本文还介绍了一些对呼吸道病毒检测有潜在应用价值的新兴技术。这些技术的发展和应用,不仅提高了甄别呼吸道病毒的效率,也为新的呼吸道病毒的发现提供了线索。

关键词：呼吸道病毒核酸 PCR 质谱检测分型

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我国HIV流行毒株分离培养与标准株筛选鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 2023年第3期37卷 286-295页

作者：李思其朱国新李林李敬云李韩平刘永健贾磊王晓林李天一张伯寒韩婧婉马春涛军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室病毒学研究室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的通过对我国人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者全血样本中的HIV进行分离培养与基因型、表型鉴定,筛选符合中华预防医学会团体标准《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)... 详细信息

目的通过对我国人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者全血样本中的HIV进行分离培养与基因型、表型鉴定,筛选符合中华预防医学会团体标准《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)评价要求的HIV标准株。方法收集48份HIV感染者全血样本;通过分离样本中的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并将其与健康人全血样本中分离得到的PBMCs共培养分离感染者体内的HIV,测定培养上清液中的p24抗原浓度和病毒滴度;对于分离成功的毒株,提取病毒RNA,对gag、pol基因和env C2V3片段进行扩增测序,判断基因型、基因重组和耐药位点;通过将病毒培养上清液接种到表达CCR5或CXCR4的Ghost细胞,判断病毒嗜性;通过将病毒培养上清液接种MT-2细胞,观察合胞体的形成。结果从48份HIV感染者的新鲜EDTA抗凝全血中分离培养出14株病毒培养上清液的p24抗原浓度>1 ng/ml的HIV毒株;1株病毒滴度≥10^(5)TCID_(50)/ml,8株滴度≥10^(4)TCID_(50)/ml,5株滴度≥10^(3)TCID_(50)/ml;其基因型为9株B亚型、3株CRF01AE重组型和2株CRF07BC重组型;14株HIV毒株中11株含有耐药位点;细胞嗜性分析结果显示其中8株为CCR5嗜性,6株为CXCR4/CCR5双嗜性;14株毒株中只有2株可引起MT-2细胞病变,为合胞体诱导型。结论本研究共分离出14株具有HIV典型生物学、遗传学特性的HIV毒株,经评价1株为符合《病原微生物菌(毒)种标准株艾滋病病毒毒株建立技术规范》(T/CPMA 027—2023)的HIV标准株。本研究可为HIV-1标准株的筛选提供技术指导。下一步可按照标准株的共享机制完成申请及储备库建设,为HIV疫苗与药物研发等相关研究提供资源。

关键词：人免疫缺陷病毒标准株分离基因型筛选

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恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒稳定复制细胞系的转录组学分析

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解放军医学杂志 2021年第5期46卷 448-455页

作者：张孝璐杨兰孙岩松徐东平李晓峰刘妍李浩病原微生物生物安全国家重点实验室军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 解放军总医院第五医学中心感染病医学部北京100039

目的分析恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒(ETV-r HBV)稳定转染前后宿主细胞转录组水平的基因差异表达,为后续开展HBV感染相关机制研究提供基础数据和参考。方法对ETV-r HBV稳定转染细胞株(HepG2.A64)及其原始背景细胞株(HepG2)进行转录组测序(... 详细信息

目的分析恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒(ETV-r HBV)稳定转染前后宿主细胞转录组水平的基因差异表达,为后续开展HBV感染相关机制研究提供基础数据和参考。方法对ETV-r HBV稳定转染细胞株(HepG2.A64)及其原始背景细胞株(HepG2)进行转录组测序(n=3),利用DESeq2软件以|log2 Fold Change|>2、padj<0.05为差异基因筛选条件对测序结果进行差异基因筛选;利用clusterProfiler软件对差异基因进行GO功能富集分析和KEGG功能富集分析。采用RT-qPCR及Western blotting分别检测HBV稳定转染前后宿主细胞DNA修复相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果转录组测序结果显示,与HepG2细胞系相比,ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系共有613个基因存在差异表达,其中401个上调,212个下调(padj<0.05),GO和KEGG富集分析结果显示,差异表达基因主要参与炎症反应、PI3K/Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路以及免疫相关的生物学过程。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与HepG2细胞系相比,HepG2.A64细胞系中RAD52和XRCC2 mRNA表达量分别下降68.96%±7.59%、69.58%±6.32%,RAD52和XRCC2蛋白表达量分别下降69.93%±3.88%、26.47%±12.7%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与原始细胞系HepG2相比,ETV-r HBV稳定转染的HepG2.A64细胞系在转录水平出现大量差异表达基因,同时HepG2.A64细胞系中DNA修复相关基因表达量出现下调。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA修复计算生物学转录组测序恩替卡韦 HepG2.A64细胞系

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细菌最小基因组研究进展

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遗传 2021年第2期43卷 142-159页

作者：李金玉杨姗崔玉军王涛滕越天津大学生命科学学院天津300110 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

具有最小基因组的细菌只包含维持自我生命复制所必需的基因,其作为一种潜在的工业生产平台具有诸多优势。由于高通量DNA测序和合成技术的发展,目前已经构建了多种缩减基因组的菌株。本文首先介绍了最小基因组的概念,其次总结了细菌必需... 详细信息

具有最小基因组的细菌只包含维持自我生命复制所必需的基因,其作为一种潜在的工业生产平台具有诸多优势。由于高通量DNA测序和合成技术的发展,目前已经构建了多种缩减基因组的菌株。本文首先介绍了最小基因组的概念,其次总结了细菌必需基因的相关研究进展,然后梳理了人工缩减与合成微生物基因组的相关工作,最后探讨了在设计和组装基因组的过程中遇到的技术障碍和限制,以期为人工合成基因组的实验与应用提供理论参考。

关键词：细菌最小基因组必需基因合成生物学人工设计

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CRF01_AE/CRF07_BC重组毒株近似全长基因组序列和系统进化分析

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中华医院感染学杂志 2023年第12期33卷 1761-1768页

作者：刘志朱博赵锦李思其张冬施玉婷韩芹芹李林昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055

目的鉴定我国深圳地区人类免疫缺陷病毒-Ⅰ型(HIV-1)新型二代毒株(CRF01_AE/CRF07_BC),了解重组毒株的流行特征及新型重组模式。方法对深圳市2011-2016年新确诊的未接受抗逆转录病毒治疗的HIV-1感染者血浆样本进行近似全长基因组扩增和... 详细信息

目的鉴定我国深圳地区人类免疫缺陷病毒-Ⅰ型(HIV-1)新型二代毒株(CRF01_AE/CRF07_BC),了解重组毒株的流行特征及新型重组模式。方法对深圳市2011-2016年新确诊的未接受抗逆转录病毒治疗的HIV-1感染者血浆样本进行近似全长基因组扩增和测序,选取第一代重组毒株作为母本的第二代独特重组毒株作为研究对象;获得的近似全长基因组序列使用Quality Control工具进行质量检测和基因型初步分析,基于近似全长序列使用最大似然法构建系统进化树;随后使用jpHMM和RIP工具进行重组断点分析,并构建Neighbor-Joining系统进化树验证重组断点,并对来自不同母本的重组片段进行同源性分析。结果从我国深圳地区HIV-1感染者中发现了两种新型二代独特重组毒株(CRF01_AE/CRF07_BC):LS13810和LS4017并获得其近似全长基因组序列;其中LS13810近似全长基因组以CRF01_AE为骨架,分别在病毒的pol和tat区插入两个来自于CRF07_BC的片段;而LS4017近似全长基因组的5′半分子来源于CRF07_BC,而3′半分子主要来源于CRF01_AE,3′半分子的gp120区插入了部分CRF07_BC片段。结论深圳市已经出现了完全由一代重组毒株重组形成的第二代独特重组毒株,重组毒株正在向更加复杂的形式演变,当地乃至我国均亟需建立能准确监测重组毒株发生和流行情况的分子监测策略,以应对毒株重组模式变化和重组毒株流行为HIV-1感染的精准防控和诊断、治疗带来的挑战。

关键词：人类免疫缺陷病毒近似全长基因组独特重组毒株亚型系统进化分析

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FoxO1在小鼠感染流感病毒H1N1中的作用及机制

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免疫学杂志 2022年第2期38卷 145-150页

作者：李佳佳宫赛赛何志利孙娅坤程洋袁顺宗罗德炎吕树娟王慧安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军总医院第五医学中心北京100071

目的探讨叉头盒转录因子O1(forkhead box O1,FoxO1)在小鼠抵抗流感病毒H1N1感染中发挥的作用及机制。方法用琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠的基因型后,将小鼠分为2组:条件性敲除NKp46^(+)细胞中FoxO1基因的Foxo1^(△NK)组小鼠,以及对照组WT小... 详细信息

目的探讨叉头盒转录因子O1(forkhead box O1,FoxO1)在小鼠抵抗流感病毒H1N1感染中发挥的作用及机制。方法用琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠的基因型后,将小鼠分为2组:条件性敲除NKp46^(+)细胞中FoxO1基因的Foxo1^(△NK)组小鼠,以及对照组WT小鼠;2组小鼠使用滴鼻法同1天感染流感病毒H1N1,每天记录小鼠体质量及2组小鼠的死亡情况;在2组小鼠体质量及状态差异明显的第10天取样,HE染色法观察肺组织病理;Luminex液相芯片技术检测肺组织匀浆上清中36种细胞因子的表达情况;流式细胞术检测肺组织免疫细胞的比例变化。结果与WT组相比,感染流感病毒后Foxo1^(△NK)组小鼠死亡率增加,体质量下降更加严重;肺组织病理显示炎症反应减弱;肺组织匀浆上清中的细胞因子表达水平下降,ENA-78、IFN-α、IL-4、IL-5显著降低;肺组织免疫细胞中CD3^(+)NKp46^(+)NKT细胞比例显著下降。结论FoxO1基因的缺失加重了小鼠流感感染进程,可能是通过抑制依赖FoxO1基因调控的CD3^(+)NKp46^(+)NKT细胞相关免疫反应。

关键词：叉头盒转录因子O1 NKT细胞甲型流感病毒免疫反应

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湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂抗药性调查研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2023年第2期30卷 80-82页

作者：张恒端麻祖吴群刘钦梅邢丹李春晓郭晓霞赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071

测定湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为登革热媒介防制提供科学用药指导。从湛江市霞山区、雷州市乌石镇和企水镇采集白纹伊蚊幼虫,在实验室繁殖1~2代,用WHO推荐的浸渍法测定抗药性指数。结果显示,霞山区白纹伊蚊对残杀威(2.99... 详细信息

测定湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为登革热媒介防制提供科学用药指导。从湛江市霞山区、雷州市乌石镇和企水镇采集白纹伊蚊幼虫,在实验室繁殖1~2代,用WHO推荐的浸渍法测定抗药性指数。结果显示,霞山区白纹伊蚊对残杀威(2.99)、毒死蜱(2.19)、氯菊酯(8.09)和溴氰菊酯(14.32)产生抗性;雷州市乌石镇白纹伊蚊对残杀威(0.67)、毒死蜱(0.76)较敏感但对氯菊酯(5.53)、溴氰菊酯(5.66)产生抗性;企水镇白纹伊蚊对溴氰菊酯(21.68)达到了高抗水平,对残杀威(2.46)、氯菊酯(5.38)具有一定抗性,对毒死蜱(1.25)较敏感。结果表明,毒死蜱药效较好,雷州市乌石镇和企水镇白纹伊蚊都对其敏感;3个地区白纹伊蚊对溴氰菊酯产生较高抗性,尤其是企水镇达到高抗水平。

关键词：白纹伊蚊杀虫剂抗药性湛江市

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云南省西部地区宿主和媒介感染伯氏疏螺旋体的基因多样性调查与分析

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中国人兽共患病学报 2024年第3期40卷 208-213页

作者：何志海和仙孙毅蒋宝贵邵宗体张云李玉琼浦恩念姚明国王帆别双双高子厚江佳富杜春红云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控重点实验室大理671000 深圳市光明区疾病预防控制中心深圳518106 云南省迪庆州疾病预防控制中心香格里拉674400 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解云南省西部地区宿主动物和媒介蜱感染伯氏疏螺旋体的基因多样性,为进一步掌握该地区莱姆病菌株的特性奠定基础。方法对采用伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区基因筛查阳性的云南西部地区采集的家畜、小型兽类、蜱虫样本,进行伯氏... 详细信息

目的了解云南省西部地区宿主动物和媒介蜱感染伯氏疏螺旋体的基因多样性,为进一步掌握该地区莱姆病菌株的特性奠定基础。方法对采用伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区基因筛查阳性的云南西部地区采集的家畜、小型兽类、蜱虫样本,进行伯氏疏螺旋体鞭毛蛋白基因(FLA基因)和16S rRNA基因的检测,综合分析病原体的基因信息,了解当地流行株的生物学特性及流行特征。结果共检测301份样本,共检出7种基因型伯氏疏螺旋体,其中宿主动物共检出5种:***(阿弗西尼疏螺旋体)、***(伽氏疏螺旋体)、*** s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、***(日本疏螺旋体)、***(法雷斯疏螺旋体);媒介蜱检出7种:***(阿弗西尼疏螺旋体)、***(伽氏疏螺旋体)、*** s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、***(日本疏螺旋体)、***(法雷斯疏螺旋体)、***(中华基因型伯氏疏螺旋体)及未定种Borrelia sp.。***、***和*** s.s.为优势流行株,占总阳性的85.04%(256/301)。不同地区、不同来源的相同基因型株基因序列存在种内差异,同一地区的宿主和媒介中检出的相同基因型螺旋体具有较高的同源性和较近的遗传进化关系。结论云南西部地区宿主和媒介感染伯氏疏螺旋体基因型具有较高的多样性特征,存在多种致病基因型,给当地人群的健康造成一定危害,需加强防范。

关键词：云南西部伯氏疏螺旋体宿主动物蜱多样性

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