检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 509-512页

作者：庄道民刘思扬董如华白丽姜标赵小龙李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 中国科学院上海有机化学研究所上海200032

目的:评价两种非核苷类逆转录酶抑制剂(JB25、JB26)与3种已上市药物齐多夫定(AZT)、依非韦仑(EFV)、沙奎那韦(SQV)联合应用的体外抗HIV活性。方法:将10个浓度的JB25、JB26分别与AZT、EFV、SQV的7个浓度组成各种浓度的组合,加入384孔细... 详细信息

目的:评价两种非核苷类逆转录酶抑制剂(JB25、JB26)与3种已上市药物齐多夫定(AZT)、依非韦仑(EFV)、沙奎那韦(SQV)联合应用的体外抗HIV活性。方法:将10个浓度的JB25、JB26分别与AZT、EFV、SQV的7个浓度组成各种浓度的组合,加入384孔细胞培养板,与HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞共培养3d,最后利用TZMbl细胞报告基因检测HIV-1的表达,共重复3次。利用MacSynergyⅡ软件对数据进行分析,得到药物相互作用的情况。结果:JB25与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是244.45/-5.05,119.58/-65.93,145.83/-0.32(nmol/L)2%;JB26与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是398.90/0,103.62/-0.49,138.473/-0.27(nmol/L)2%。结论:两种非核苷类逆转录酶抑制剂与3种已上市的药物在体外联合应用,具有协同抗HIV作用,MacSynergyⅡ软件可以全面评价两种药物的联合作用情况。

关键词：人免疫缺陷病毒非核苷类逆转录酶抑制剂联合用药协同作用齐多夫定依非韦仑沙奎那韦

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人免疫缺陷病毒Ⅰ型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备

引用

生物技术通讯 2009年第4期20卷 475-478页

作者：隋洪帅郭东星刘思扬鲍作义刘永健庄道民李韩平李敬云李林军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,... 详细信息

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Vif蛋白,制备其单克隆抗体。方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Western印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形式存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1∶16×106,抗体纯化后保持了活性和特异性。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础。

关键词：人免疫缺陷病毒Ⅰ型 Vif蛋白原核表达单克隆抗体

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人免疫缺陷病毒I型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备

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生物技术通讯 2009年第4期20卷 475-478页

作者：隋洪帅郭东星刘思扬鲍作义刘永健庄道民李韩平李敬云李林军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室　　北京　　（100071）

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)vif蛋白,制备其单克隆抗体.方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Westem印迹鉴定目的蛋白,亲和... 详细信息

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)vif蛋白,制备其单克隆抗体.方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Westem印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体.结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形武存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1:16x106,抗体纯化后保持了活性和特异性.结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础.

关键词：人免疫缺陷病毒I型 Vif蛋白原核表达单克隆抗体

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1例早期HIV感染者体内病毒准种的各基因片段分析

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中国艾滋病性病 2009年第1期15卷 1-3,10页

作者：李林隋洪帅鲍作义刘永健刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的比较1例早期艾滋病病毒(HIV)感染者体内病毒不同基因片段准种复杂度。方法使用套式聚合酶链反应(Nested-PCR),扩增HIV感染者外周血淋巴细胞中病毒的gag、pol、vif-vpr和env区的部分基因,通过克隆、测序方法观察该感染者体内病毒准... 详细信息

目的比较1例早期艾滋病病毒(HIV)感染者体内病毒不同基因片段准种复杂度。方法使用套式聚合酶链反应(Nested-PCR),扩增HIV感染者外周血淋巴细胞中病毒的gag、pol、vif-vpr和env区的部分基因,通过克隆、测序方法观察该感染者体内病毒准种分布情况,比较不同基因片段检测病毒准种的可靠性。结果不同基因片段检测病毒准种结果显示,该早期感染者体内的病毒不同基因片段显示的准种基因离散率不同,其中gag区显示出的病毒准种复杂度最高,反映为该区段病毒准种的基因离散率最高,为0·008;其他各区基因(pol、vif-vpr、env)的离散率依次为0·006、0·001、0·000。结论该HIV感染者体内病毒准种的基因中,gag区基因的突变率较高,提示Gag在机体感染HIV早期承受的免疫压力较高,因此在病毒准种研究中,gag区应该作为重要的基因区域。

关键词：艾滋病病毒准种 gag pol vif-vpr env

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ASPCR检测微量HIV-1 K103N耐药突变方法的建立

ASPCR检测微量HIV-1 K103N耐药突变方法的建立

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：郭东星李韩平李林庄道民王铮鲍作义刘思扬刘永健李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR(ASPCR)方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法：首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建... 详细信息

目的：建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR(ASPCR)方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法：首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建含K103N突变的质粒作为标准品，然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板，采用SYBR green法进行实时定量PCR，并绘制标准曲线。分别采用特异性和非特异性引物扩增模板，根据二者Ct(Cycle threshold)值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例。对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证。结果：特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差(△Ct)可达13.56;当突变比例小于0.1％时仍具有良好的准确性;批内变异系数小于0.7％，批间变异系数小于1.6％;检测灵敏度可达0.01％。检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值，阳性对照样本检测结果均为阳性。结论：ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法，可为临床抗病毒治疗提供理论指导。

关键词：人类免疫缺陷病毒免疫学检验基因突变耐药突变

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1例早期HIV感染者外周血抗体变化和病毒基因序列分析

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军事医学科学院院刊 2008年第1期32卷 15-18,48页

作者：李林鲍作义苗文泉刘永健隋洪帅刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:观察HIV早期感染者体内的抗体变化特征,为进一步研究HIV感染早期病毒与宿主的相互作用奠定基础。方法:对一名HIV感染者进行流行病学调查、外周血血清学检测、病毒载量和CD4细胞数检测、体外病毒分离,观察该感染者体内免疫学反应及... 详细信息

目的:观察HIV早期感染者体内的抗体变化特征,为进一步研究HIV感染早期病毒与宿主的相互作用奠定基础。方法:对一名HIV感染者进行流行病学调查、外周血血清学检测、病毒载量和CD4细胞数检测、体外病毒分离,观察该感染者体内免疫学反应及病毒复制特点。使用巢式PCR方法扩增病毒env区C2-V3区基因,通过测序及序列分析观察病毒部分膜区基因特点。结果:该感染者为早期感染,外周血抗体S/CO值呈逐渐增高趋势,外周血中针对HIV抗原的特异性条带呈逐渐增多趋势,感染183 d后出现针对所有HIV抗原的特异性抗体,病毒载量在感染后3个月时最高(18 000 cp/ml),随后下降,从该感染者外周血中分离的病毒毒力较强。基因序列分析显示该病毒为CRF01_AE亚型,与泰国93TH054毒株基因距离最近。结论:该感染者体内病毒可能起源于泰国毒株,对HIV早期感染的鉴定为研究我国HIV早期感染者体内病毒进化奠定了基础。

关键词：人免疫缺陷病毒早期感染血清学检测 CRF01_AE亚型 HIV抗体序列分析

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我国部分地区HIV感染者HCV协同感染状况的调查研究

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中国艾滋病性病 2008年第1期14卷 9-11页

作者：李林鲍作义隋洪帅刘思扬庄道民刘永健苗文泉李珏李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解我国部分地区艾滋病病毒(HIV)感染者体内丙型肝炎病毒(HCV)的协同感染状况。方法以我国北京、河南、广西部分地区的HIV感染者为研究对象,通过访谈了解病人的基本状况,采集病人的EDTA抗凝静脉血,对感染者的HIV感染状况、CD4细胞... 详细信息

目的了解我国部分地区艾滋病病毒(HIV)感染者体内丙型肝炎病毒(HCV)的协同感染状况。方法以我国北京、河南、广西部分地区的HIV感染者为研究对象,通过访谈了解病人的基本状况,采集病人的EDTA抗凝静脉血,对感染者的HIV感染状况、CD4细胞数、HIV病毒载量及HCV感染状况进行检测,分析我国部分地区HIV感染者中HCV的协同感染状况。结果共收集到HIV感染者血液249份,其中有34.14%的感染者同时感染HCV。统计学分析显示,河南地区的HIV感染者同时感染HCV的比例显著高于北京和广西地区;经静脉吸毒和输血传播感染HIV的病人同时感染HCV的几率相近,但都明显高于性传播;感染了HCV的HIV感染者体内的病毒载量要显著高于未感染HCV的HIV感染者,但CD4细胞数没有显著差别。结论HCV协同感染率在不同的HIV感染者人群中存在差异,而且这种协同感染会影响感染者HIV病毒载量,因此在观察HIV感染者疾病进程及考虑治疗措施时,应充分考虑HCV协同感染的影响。

关键词：艾滋病病毒协同感染丙型肝炎病毒

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APOBEC3G蛋白的原核表达及纯化

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生物技术通讯 2008年第2期19卷 163-166页

作者：隋洪帅李林鲍作义李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:原核表达重组APOBEC3G蛋白,为其功能及免疫原性研究奠定基础。方法:提取H9细胞全细胞基因组RNA,通过RT-PCR获得目的基因,经纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,并对表达条件和纯... 详细信息

目的:原核表达重组APOBEC3G蛋白,为其功能及免疫原性研究奠定基础。方法:提取H9细胞全细胞基因组RNA,通过RT-PCR获得目的基因,经纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,并对表达条件和纯化条件进行优化;利用WesternBlot分析鉴定目的蛋白。结果:构建了APOBEC3G蛋白的原核表达载体Apo-His-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性蛋白形式存在;经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化,获得了高纯度的重组APOBEC3G蛋白,蛋白浓度可达1.2mg/mL;WesternBlot显示获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化了可溶性APOBEC3G蛋白,为进一步对其进行免疫原性和功能研究奠定了基础。

关键词： APOBEC3G蛋白原核表达蛋白纯化溶茵酶裂解超声破碎

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HIV抗体免疫印迹试验不确定结果的特征及鉴别方法研究

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中华流行病学杂志 2008年第5期29卷 478-481页

作者：鲍作义刘永健王海燕王全力骆群刘元东马峰邢颜超童贻刚李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 武警总医院检验科解放军307医院输血科解放军总医院输血科济南军区疾病预防控制中心成都军区疾病预防控制中心新疆军区总医院输血科

目的研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果。方法以解放军艾滋病检测确认实验室2005—2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象，对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测... 详细信息

目的研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果。方法以解放军艾滋病检测确认实验室2005—2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象，对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24抗原检测，同时进行随访，将随访前后的标本同时检测，比较免疫印迹带型的进展，判断HIV感染的真实状况，以随访的结果为标准，判断不同的方法鉴别不确定结果的效果。结果（1）42例HIV抗体不确定病例中，共有8种带型：p24（45．2％）、gp160（30．9％）、gp160±p24（11．9％）。（2）对23例进行3个月以上随访，其中22例带型没有变化，判断为HIV抗体阴性；1例的带型在随访后出现显著进展，满足HIV抗体阳性诊断标准；随访证实，22例（95．6％）的不确定是非特异反应，只有1例是早期HIV感染。（3）对23例通过随访确定HIV感染状态的病例，条带免疫印迹检测1例血清学阳转的病例为阳性，22例血清学没有进展的病例巾16例为阴性，6例仍为不确定，特异性是72．7％。HIV-1 p24抗原检测23份标本全部为阴性，1例血清学阳转标本漏检。检测7份血浆标本的病毒载量，1例血清学阳转的病例病毒载量为18000cp／ml，而6例血清学没有进展的病例检测结果全部低于最低检测限（〈LDL）。结论条带免疫印迹试验能够鉴别大约70．0％的不确定反应，病毒载量检测也是鉴别不确定结果的有效方法；使用这两种方法，可以对HIV抗体不确定进行早期鉴别诊断。

关键词：艾滋病病毒抗体免疫印迹确认

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HIV抗体免疫印迹试验不确定结果的特征及鉴别方法研究

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中国学术期刊文摘 2008年第17期14卷 185-186页

研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果.以解放军艾滋病检测确认实验室2005-2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象,对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24... 详细信息

研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果.以解放军艾滋病检测确认实验室2005-2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象,对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24抗原检测,同时进行随访,将随访前后的标本同时检测,比较免疫印迹带型的进展,判断HIV感染的真实状况,以随访的结果为标准,

关键词：艾滋病病毒抗体免疫印迹确认

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