检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2006年第3期17卷 370-373页

作者：谭亚芳杜宗敏何晓晓翟俊辉郭兆彪王津杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 湖南大学化学化工学院生物技术研究院化学生物传感与计量学国家重点实验室长沙410082

目的:利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒,通过荧光扫描技术,建立一种特异、快速、准确地检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌pMT1质粒上的caf1基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记... 详细信息

目的:利用特异的肽核酸(PNA)探针、链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒,通过荧光扫描技术,建立一种特异、快速、准确地检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌pMT1质粒上的caf1基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记后,分别与链霉亲和素包被的磁珠和cy5纳米颗粒结合;将探针与待测鼠疫耶尔森氏菌的基因组DNA杂交后,利用荧光扫描技术进行检测。探讨了多个实验因素对测定的影响,并进行了特异性和灵敏度检测。结果:建立并优化了利用PNA探针检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,得到较好的线性关系;检测的灵敏度为0.9μg/mL(待测DNA)。结论:PNA探针与靶基因的结合不易受杂交液离子强度的影响,结合后具有较高的稳定性。本研究建立的分析方法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫的监控、诊断提供了有力手段。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌肽核酸磁珠荧光扫描技术

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空间信息技术分析北京市肾综合征出血热流行特征及其危险因素

空间信息技术分析北京市肾综合征出血热流行特征及其危险因素

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第九届海内外生命科学论坛

作者：赵文娟曹务春方立群闫磊冯丹韩晓娜杨红贾忠伟生甡吴晓明军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院遥感应用研究所北京100101 北京邮电大学北京100876

目的：了解北京市近年来肾综合征出血热(HFRS)空间分布,初步探讨其发生的危险因素.方法：收集北京市2004年至2005年HFRS病例个案资料,分析HFRS的空间、人群、时间分布特征.以北京市乡镇级行政边界矢量图层为背景,根据患者的家庭住址,建... 详细信息

目的：了解北京市近年来肾综合征出血热(HFRS)空间分布,初步探讨其发生的危险因素.方法：收集北京市2004年至2005年HFRS病例个案资料,分析HFRS的空间、人群、时间分布特征.以北京市乡镇级行政边界矢量图层为背景,根据患者的家庭住址,建立病人发病地点矢量图层;应用SaTScan 6.0软件,标化性别构成,对各乡镇HFRS的发病情况进行空间聚类分析,确定HFRS发生的高流行区域范围.在ENVI 4.0遥感影像处理软件和ArcGIS 9.0地理信息系统软件的支持下,从2005年6月2 3日的Land Sat 7 TM卫星影象图中建立北京市2005年土地利用图;建立北京市植被影像图.分别叠加北京市乡镇行政边界图层于土地利用图、植被影像图、高程图,提取各个乡镇各土地利用类型的面积、平均校正植被指数、平均海拔高度.在SPSS 13.0中分析发病乡镇与未发病乡镇间的各地理环境因素有无统计学差异.结果：北京市HFRS病例以朝阳区最多,各乡镇年均发病率从0至33/10万不等,差异有统计学意义(x2=831.62,P=0.000).人群发病以青壮年为主,占94.3％.职业分布处于前三位的是为农民、民工和工人.发病高峰在2月至6月,占总发病例的78％.空间聚类分析结果显示北京市HFRS病例成聚集性分布;高发聚集区包括36个乡镇;城乡结合部为HFRS的高发区域.发病乡镇与未发病乡镇的建筑面积比重、水域面积比重、林地面积比重、水田面积比重、海拔、校正植被指数间存在统计学差异,在旱地面积比重、果园面积比重、水浇地面积比重间没有统计学差异.结论：北京市HFRS发病空间分布呈聚集性,HFRS发病乡镇与未发病乡镇的地理环境因素存在差异,这为预防控制HFRS提供一定依据.

关键词：肾综合征出血热地理信息系统汉坦病毒流行特征空间聚类分析

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甘露糖结合凝集素基因多态性与肺结核易感性的研究

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中国热带医学 2006年第3期6卷 387-389页

作者：刘玮张芳赵秋敏吴晓明张翠英田磊李春芝张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第309医院北京100091 解放军第91医院山东兖州272100 解放军总参三部防疫队北京100091

目的探讨甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与中国汉族人群肺结核发病间的关联。方法采用以医院为基础的病例对照研究设计,对结核病相关危险因素进行问卷调查。联合应用引物序列特异性PCR(PCR-SSP)和序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP... 详细信息

目的探讨甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与中国汉族人群肺结核发病间的关联。方法采用以医院为基础的病例对照研究设计,对结核病相关危险因素进行问卷调查。联合应用引物序列特异性PCR(PCR-SSP)和序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)等方法对MBL基因H／L、X／Y、P／Q和A／B四个多态性位点进行基因型分析及单倍体型分析。将各位点的基因型或单倍体型在病例组和对照组的分布进行比较,并将有显著作用的环境危险因素纳入进行多因素非条件logistic回归分析。结果 133名肺结核病例和177名对照纳入本研究,多因素分析调整结核病暴露史和疫苗接种史两个因素后,MBL基因的HL和LL基因型与疾病的保护作用显著相关,调整OR值(95％CI)分别为0．54(0．30-0．95)和0．50(0．26-0．96)。MBL基因XB组单倍体型与中国汉族人群肺结核发生的易感性显著相关,调整OR值(95％CI)为1．60(1．07-2．41)。而其余多态性位点,包括X／Y、P／Q和A／B位点与肺结核的发生均无显著性关联。结论中国汉族人群MBL基因多态性可能与汉族人群肺结核发生的易感性显著相关。

关键词：肺结核甘露糖结合凝集素基因多态性病例对照研究

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森林脑炎病毒prM-E蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫活性测定

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第4期19卷 335-339页

作者：刘艳丽司炳银户义张雨杨银辉祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的为了表达森林脑炎病毒prME蛋白,为森林脑炎快速诊断试剂的研制奠定基础。方法经过RTPCR扩增、重组转移载体构建、细菌内转座和昆虫细胞转染,以杆状病毒昆虫细胞表达系统成功地表达了森林脑炎病毒MDJ01株prME蛋白。结果从感染细胞上... 详细信息

目的为了表达森林脑炎病毒prME蛋白,为森林脑炎快速诊断试剂的研制奠定基础。方法经过RTPCR扩增、重组转移载体构建、细菌内转座和昆虫细胞转染,以杆状病毒昆虫细胞表达系统成功地表达了森林脑炎病毒MDJ01株prME蛋白。结果从感染细胞上清中电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,说明重组病毒感染细胞后产生病毒样表达颗粒(viruslikeparticlesVLPs),并且分泌至细胞外。免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的重组蛋白能够与抗森林脑炎病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性。ELISA和间接免疫荧光染色证实,重组prME蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在昆虫细胞中表达的prME具有良好的抗原性,本研究为森林脑炎快速特异诊断试剂研制奠定了基础。

关键词：脑炎病毒亚组,蜱传基因,prM-E 杆状病毒科表达的序列标记

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西尼罗病毒与乙型脑炎病毒生物学性状的比较与鉴别

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第4期19卷 340-343,F0003页

作者：张久松张泮河司炳银杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对西尼罗病毒(WNV)和乙脑病毒(JEV)的致细胞病变效应(CPE)、致病性、形态学、免疫学和分子生物学性状进行比较,为WNV感染的鉴别诊断提供依据。方法通过给C6/36细胞和乳鼠接种WNV或JEV,观察两种病毒的CPE和致病性;制作组织切片的透... 详细信息

目的对西尼罗病毒(WNV)和乙脑病毒(JEV)的致细胞病变效应(CPE)、致病性、形态学、免疫学和分子生物学性状进行比较,为WNV感染的鉴别诊断提供依据。方法通过给C6/36细胞和乳鼠接种WNV或JEV,观察两种病毒的CPE和致病性;制作组织切片的透射电镜标本进行病毒形态学观察;分别用间接免疫荧光试验(IFA)和RTPCR方法对两种病毒抗体阳性血清及病毒核酸进行检测。结果WNV和JEV所致C6/36细胞CPE分别以细胞融合和细胞脱落为主要特征;脑内接种两种病毒对乳鼠的致病性未见明显差别;电镜下,两种病毒体的形态与大小相似;WNV与JEV之间存在抗原交叉反应;用黄病毒通用引物可从WNV和JEV感染组织中检出病毒核酸,而用特异引物仅能扩增出相应病毒的核苷酸片段。结论病毒所致C6/36细胞CPE与病毒核酸检测可作为WNV与JEV有效的鉴别方法,对两种病毒抗体效价进行同时测定有助于病原体感染的诊断。

关键词：西尼罗病毒脑炎病毒,日本生物学性状

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炭疽毒素受体胞外区在毕赤酵母中分泌表达、纯化与活性鉴定

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生物化学与生物物理进展 2005年第7期32卷 657-661页

作者：赵剑徐俊杰缪静李冰杨秀旭宋小红陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 烟台师范大学生命科学院烟台264025

使用分泌型表达载体,实现了重组炭疽毒素受体胞外区(rATR(CMG2)-EXCELL)在毕赤酵母KM71H培养物上清中的分泌表达.表达量约占培养物上清总蛋白质的20%.经过螯合柱初步纯化,每升诱导培养物可获得约1mg电泳纯的rATR(CMG2)-EXCELL.体外与配... 详细信息

使用分泌型表达载体,实现了重组炭疽毒素受体胞外区(rATR(CMG2)-EXCELL)在毕赤酵母KM71H培养物上清中的分泌表达.表达量约占培养物上清总蛋白质的20%.经过螯合柱初步纯化,每升诱导培养物可获得约1mg电泳纯的rATR(CMG2)-EXCELL.体外与配基PA结合试验和细胞保护试验显示,rATR(CMG2)-EXCELL具有很好的生物活性.rATR(CMG2)-EXCELL的成功表达为今后研究炭疽毒素受体的作用机理、发展新型炭疽治疗药物打下基础.

关键词：炭疽杆菌炭疽毒素受体蛋白质表达毕赤酵母

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炭疽毒素受体与人IgG1的Fc段融合蛋白ATR-Fc在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2005年第5期21卷 826-831页

作者：高丽华胡显文陈薇徐俊杰赵剑陈惠鹏军事医学科学院生物工程研究所北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽... 详细信息

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽感染的生物制品。将编码炭疽毒素受体N端1_227氨基酸的基因和编码Fc段的基因连接,插入到pcDNA3.1的HindⅢ和NotⅠ位点得到表达ATR_Fc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1ATR_Fc,并用脂质体方法将该载体转染至CHO_K1细胞中,用G418筛选并获得ATR_Fc表达水平为10～15μg(106cells·d)的基因工程CHO细胞系ATR_Fc_1D5。采用蛋白A纯化重组蛋白,并用ELISA法鉴定ATR_Fc与PA的亲和性,表明ATR_Fc可与PA特异性结合。

关键词：炭疽毒素受体 Fc融合蛋白重组CHO细胞抗体类分子抗毒素

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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 397-402页

作者：赵慧陈水平段鸿元邓永强姜涛赵卓于曼康晓平杨保安李晓萸秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的... 详细信息

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础.

关键词： SARS冠状病毒,RNAi,siRNA

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普氏立克次体120×10~3表面抗原的N端和C端重组蛋白免疫原性的研究

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 429-431,435页

作者：高宁温博海张军陈梅玲邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性。方法:将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况... 详细信息

目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性。方法:将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,分析免疫小鼠的细胞免疫应答水平,并采用RT-PCR方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞被重组蛋白刺激后细胞因子的表达。结果:N端和C端重组蛋白均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,诱导高水平的小鼠脾淋巴细胞增殖;经两种重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2。结论:普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,可作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白。

关键词：普氏立克次体表面抗原重组蛋白免疫原性

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一株西尼罗病毒基因组cDNA亚克隆的构建与鉴定

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 424-428页

作者：李晓峰姜涛陈水平秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及O ligo6软件设计5对引物。以感染... 详细信息

目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及O ligo6软件设计5对引物。以感染细胞中的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的5个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM-T easy载体,通过片段间共有的酶切位点进行连接,最终获得基因组5′和3′半分子,并分别通过序列测定加以鉴定。结果与结论:已构建出西尼罗病毒CH-01株基因组的5′和3′半分子,经酶切鉴定和序列测定表明所获得的cDNA克隆为该株病毒的特异性序列。

关键词：黄病毒西尼罗病毒 RT-PCR cDNA亚克隆

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