检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2005年第3期29卷 263-267页

作者：王壮李劲松军事医学科学院科技部北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

三级生物实验室(BSL3实验室)的研究对象都是对个人和环境有高度危险性的致病微生物,如何避免其对环境的影响,成为各国政府、环境保护和相关科研人员高度关注的一个问题。本文将重点阐述三级生物实验室对环境危害的重要因素和防范对策。... 详细信息

三级生物实验室(BSL3实验室)的研究对象都是对个人和环境有高度危险性的致病微生物,如何避免其对环境的影响,成为各国政府、环境保护和相关科研人员高度关注的一个问题。本文将重点阐述三级生物实验室对环境危害的重要因素和防范对策。主要研究了其对环境潜在危害的影响因素和造成危害的基本要素,对实验室的设施建设、安全设备要求、防护性能检测验证以及管理软件建设进行了探讨,以最终实现BSL3实验室的感染性三废(固体、液体和气体)“零排放”的目标。

关键词：三级生物安全实验室实验室感染潜在影响设备安全性对策

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低出血倾向、低免疫原性葡激酶mSAK(K130T,K135R)的表达、纯化与活性测定

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第5期21卷 610-615页

作者：郑玉玲宁保安马茹高志贤姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原... 详细信息

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原性葡激酶突变体.表达后的蛋白用Q-Sepharose FF柱与Sephacryl S-200进行纯化,纤维蛋白溶圈法进行活性测定,体外抗体中和试验与豚鼠免疫试验测定突变体蛋白的免疫原性,同时进行动物体内出血倾向观察.测序结果表明,相应位点获得突变,无非特异性突变,将突变后的片段连接pBV220导入大肠杆菌热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%～50%.产物主要以可溶性形式存在,经两步纯化后的蛋白的纯度可达98%以上.活性测定试验表明,该突变体的活性较野生型葡激酶稍低,体外中和抗体试验和豚鼠免疫试验证明免疫原性大为下降,豚鼠的皮肤出血以及肺部病理切片均显示该突变体蛋白引起的出血倾向明显降低.

关键词：葡激酶免疫原性低出血倾向

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用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 452-455页

作者：李韩平郑玉玲周宏熊正英姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 陕西师范大学运动生物学研究所陕西西安710062

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗... 详细信息

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005所挑选的7肽阳性克隆的测序结果均相同。结论:通过淘选获得的抗体模拟肽(CLPRQSSFC)是有效的,为导向治疗提供了新的实验依据。

关键词：噬菌体肽库淘选肝细胞癌

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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 269-272页

作者：郝淮杰郑玉玲余多慰马茹姜永强南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室江苏南京210097 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hip... 详细信息

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。

关键词：单链二硫键稳定抗体产量超抗原 SEA(D227A) 稳定性

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地理信息系统应用于中国大陆高致病性禽流感的空间分布及环境因素分析

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中华流行病学杂志 2005年第11期26卷 839-842页

作者：方立群曹春香陈国胜雷富民刘亚岚李承毅杨红韩晓娜闫磊闫磊李小文曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院遥感应用研究所国家农业部兽医局中国科学院动物研究所

目的应用地理信息系统(GIS)技术分析中国大陆高致病性禽流感的空间分布特征和探讨疫情发生的相关环境因素。方法收集中国2004年1、2月份高致病性禽流感疫情资料建立数据库,在ArcGIS 8.3软件中与省级、县级行政区划数字地图建立关联,对... 详细信息

目的应用地理信息系统(GIS)技术分析中国大陆高致病性禽流感的空间分布特征和探讨疫情发生的相关环境因素。方法收集中国2004年1、2月份高致病性禽流感疫情资料建立数据库,在ArcGIS 8.3软件中与省级、县级行政区划数字地图建立关联,对禽流感疫情的分布进行空间聚类分析、空间统计分析和追踪分析;收集中国气象资料、植被遥感影像及候鸟迁移数据,分析禽流感疫情发生的相关环境因素。结果空间聚类分析显示中国大陆2004年1、2月份禽流感高发区聚集在圆心为东经113.261°、北纬23.119°、半径为1090.52 km的区域内(RR=2.646,P=0.001);空间统计分析显示中国大陆禽流感疫情大都发生在各省(自治区、直辖市)的省会城市及周边地区,并主要分布于一级河流、湖泊周边及沿海区域;环境因素分析显示禽流感疫情发生的当天气温较低、相对湿度和平均气压较高,疫区与中国东、中部候鸟迁徙区的联系密切,疫区1—2月份平均归一化差值植被指数(NDVI)为0 36±0.11。结论中国大陆高致病性禽流感的空间分布为非随机分布,且具有明显的地域聚集性。

关键词：高致病性禽流感地理信息系统空间分析环境因素

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肠上皮内淋巴细胞对肠上皮屏障功能的影响

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军事医学科学院院刊 2005年第4期29卷 301-304页

作者：徐鹏辉高杰英陈德蕙陈洁曾丽玲何乐思陈小章军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 香港中文大学上皮细胞生物学研究中心

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表... 详细信息

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表达及透射电镜来反映上皮屏障功能的变化。结果:共培养后跨上皮电阻增加,但在LPS刺激后显著降低;紧密连接相关蛋白ZO-2mRNA表达在共培养后增加,LPS刺激后共培养细胞ZO-1mRNA表达显著下降;透射电镜下可见共培养后细胞间紧密连接显著增强,但在LPS刺激后共培养细胞间的连接几乎消失。首次在电镜下发现上皮细胞与IEL间有连接样结构的存在,为其相互作用提供了形态学的证据。结论:IEL对上皮屏障功能具双向调节作用,在生理状态下增强,但在感染信号存在时降低。

关键词：肠黏膜上皮细胞上皮内淋巴细胞共培养跨上皮电阻紧密连接屏障功能

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2003年度部队病毒性肝炎住院病例特征及费用分析

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解放军预防医学杂志 2005年第3期23卷 213-215页

作者：孙海龙范国英汤浩马纯钢胡湖曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 总后勤部卫生部

目的对2003年度部队病毒性肝炎住院病例进行分析,为掌握部队病毒性肝炎发病状况及流行特征提供参考。方法采集总后勤部卫生部信息中心的综合数据库资料,以EXCEL和SPSS对病例特征及费用进行统计分析。结果2003年部队病毒性肝炎住院病例共... 详细信息

目的对2003年度部队病毒性肝炎住院病例进行分析,为掌握部队病毒性肝炎发病状况及流行特征提供参考。方法采集总后勤部卫生部信息中心的综合数据库资料,以EXCEL和SPSS对病例特征及费用进行统计分析。结果2003年部队病毒性肝炎住院病例共2757例,其中新发病例占70.62%。在住院病例中,甲型肝炎占6.96%、乙型肝炎占61.04%、丙型肝炎占5.15%,戊型肝炎占2.58%,未分型占22.78%,重叠感染占1.02%;其中60.71%为乙型合并其他型别。年龄分布:病例平均年龄为27岁,甲、乙、丙、戊型肝炎的平均年龄分别为:22岁、27岁、37岁和36岁,年龄分布差异有显著性(P<0.01)。职别分布:甲型肝炎以战士为主(64.06%),乙型肝炎中干部(41.89%)与战士(47.53%)病例相近,丙型肝炎、戊型肝炎均以干部为主,分别占58.45%、57.75%。平均住院天数50d,住院病例所用的住院费用中,以戊型肝炎平均费用为最高。结论部队病毒性肝炎以乙型肝炎为主,各型肝炎人群特征不同,尤其是戊型肝炎,临床症状重,易暴发,对部队具有潜在危害。由于病毒性肝炎是影响部队官兵健康以及耗费大量卫生资源的重要传染病,对其的防治应加以重视。

关键词：部队病毒性肝炎病例特征住院费用

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空气和空调器样本中SARS冠状病毒的检测

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中国消毒学杂志 2005年第2期22卷 156-158页

作者：杜宗敏王效义戴二黑刘海洪韩延平庞昕翟俊辉杨瑞馥吴清发李京湘杨玲汪建军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国医学科学院北京基因组研究所

为研究SARS的传播途径,给医务人员防护提供依据。采用8级安德森空气微生物采样器对SARS病房中空气进行采样、收集空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,应用常规反转录套式PCR检测样本中SARS冠状病毒。结果,共检测40份样,检出阳性标本18份... 详细信息

为研究SARS的传播途径,给医务人员防护提供依据。采用8级安德森空气微生物采样器对SARS病房中空气进行采样、收集空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,应用常规反转录套式PCR检测样本中SARS冠状病毒。结果,共检测40份样,检出阳性标本18份,阳性率为45%;其中空气标本36份,阳性15份,2份空调滤网尘土标本均为阳性,2份空调冷凝水标本检出1份阳性。随机挑选PCR阳性标本2份进行病毒分离试验,2份均为阳性。结果显示,检测SARS病房空气标本以及空调器冷凝水和空调器滤网尘土标本,均获得较高的SARS冠状病毒阳性率并分离到存活病毒。表明环境空气中存在活的SARS冠状病毒,推测SARS确有可能通过空气飞沫传播,本结果可供SARS病房的医护人员采取防护措施参考。

关键词：安德森采样器反转录套式PCR 重症呼吸综合症冠状病毒

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北京市褐家鼠中汉坦病毒的分离和初步鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第5期25卷 367-368页

作者：左曙青张泮河吴晓明詹琳江佳富汤芳孙培源王炳才蔡伟张久松杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京市海淀区疾病预防控制中心

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是由鼠类传播的自然疫源性疾病.现已证实我国主要存在汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)汉坦病毒.近年来,北京市HFRS发病出现不断上升趋势,流行形势比较严峻.近年的流行病学研究证... 详细信息

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是由鼠类传播的自然疫源性疾病.现已证实我国主要存在汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)汉坦病毒.近年来,北京市HFRS发病出现不断上升趋势,流行形势比较严峻.近年的流行病学研究证实北京地区存在鼠间SEO型汉坦病毒感染[1-3].为了解近期北京地区HFRS流行毒株的型别和特点,从病原学角度阐明疫情原因,我们在对北京地区宿主动物进行汉坦病毒分子流行病学调查研究的基础上,进行了病毒分离和初步鉴定。

关键词：北京市褐家鼠汉坦病毒分离鉴定肾综合征出血热

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重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

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中国生物工程杂志 2005年第4期25卷 47-51页

作者：孙嗣梅王利春康琳王景林中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 内蒙古大学生物工程中心呼和浩特010020

用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到*** BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／... 详细信息

用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到*** BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／L IPTG诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。

关键词：可溶性表达蓖麻毒素抗原性纯化 Western印迹间接ELISA A链原核表达质粒重组表达质粒 E.coli 抗原抗体反应 PCR方法相对分子量亲和层析法特异性抗体 pET 序列分析工程菌株目的蛋白显示表达 PAGE 表达产物检测方法

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