检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第5期31卷 55-59页

作者：李浩殷瑛毛亚丽董大勇张军付玲郭继红徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007 空军总医院药学部北京1OO142

从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过... 详细信息

从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 纯化免疫荧光

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霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析

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军事医学 2011年第10期35卷 746-748,753页

作者：李建华王忠田何君左庭婷韩雪莲李岩伟朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国兽医药品监察所北京100081

目的在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白(Omp)W,纯化后制备检测用OmpW抗体。方法采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(D... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白(Omp)W,纯化后制备检测用OmpW抗体。方法采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定。结果扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合。结论霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础。

关键词：外膜蛋白W 霍乱弧菌原核表达抗原性

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猪链球菌2型溶血素的纯化及生物学活性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第4期27卷 374-376页

作者：律清宇郝淮杰毕丽丽郑玉玲姜永强吕淑霞沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一... 详细信息

目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一步亲和纯化。通过溶血实验,细胞毒性测定实验评价纯化蛋白的活性。结果:制备的天然和重组猪溶血素纯度均在90%以上,具有较高的溶血活性,较高浓度时能损伤靶细胞,胆固醇能够完全封闭其活性。结论:制备获得的重组猪溶素与天然蛋白具有相近的生物学活性,为进一步研究猪链球菌2型溶血素在猪链球菌致病机制方面的作用奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型猪链球菌溶血素溶血活性细胞毒性

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沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

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军事医学 2011年第8期35卷 593-595页

作者：陈超卢永峰刘慧莹宋立华左庭婷何君檀华朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007l 解放军307医院呼吸科北京100071

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定。结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1:32以上。为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础。

关键词：沙门菌属 pad蛋白原核表达抗原性

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传染病模型分析与预测方法研究进展

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中华流行病学杂志 2011年第1期32卷 81-85页

作者：肖洪田怀玉赵暕李亚品湖南师范大学资源与环境科学学院长沙410081 北京大学医学部军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

近年来,新发传染病不断出现,曾经被消灭和控制的旧传染病也有死灰复燃之势,生物袭击造成的传染病发生和流行时有出现,所有这些使得人类面临传染病形势日趋严峻.在这种复杂的情况下如何最大限度地减轻疫情影响和造成的损失已经成为值得... 详细信息

近年来,新发传染病不断出现,曾经被消灭和控制的旧传染病也有死灰复燃之势,生物袭击造成的传染病发生和流行时有出现,所有这些使得人类面临传染病形势日趋严峻.在这种复杂的情况下如何最大限度地减轻疫情影响和造成的损失已经成为值得研究的重要课题.

关键词：传染病模型分析预测

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志贺菌检测用抗原研究进展

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军事医学 2011年第11期35卷 877-879页

作者：刘慧莹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军307医院呼吸科北京100071

志贺菌是细菌性痢疾的病原体,目前检测手段主要为常规生化法、免疫学及分子生物学方法,其中免疫学方法快速、便捷,实用性较强。本文综述了志贺菌免疫学检测用抗原的研究进展。

关键词：志贺菌快速检测抗原

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气溶胶沉降模拟方法研究进展

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军事医学 2011年第8期35卷 627-630页

作者：刘克洋李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

对吸入颗粒物致病作用的评估,需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的沉积特征。由于气溶胶进入呼吸道引发的呼吸道疾病致病机制研究和临床药物气溶胶吸入治疗的需要,人们越发关注如气溶胶颗粒在呼吸道特定区域滞留率,研究气溶胶粒子在呼吸道... 详细信息

对吸入颗粒物致病作用的评估,需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的沉积特征。由于气溶胶进入呼吸道引发的呼吸道疾病致病机制研究和临床药物气溶胶吸入治疗的需要,人们越发关注如气溶胶颗粒在呼吸道特定区域滞留率,研究气溶胶粒子在呼吸道中分布和沉降比例的关系。这些都需要借助沉降模型来模拟颗粒的区域沉积特征。沉降模型经过半个多世纪的发展,已经形成了成熟的分析模型。计算机流体动力学(CFD)模拟技术的出现,让沉降模拟进入了一个崭新的时代。该文综述了目前研究气溶胶沉降的主要方法和肺模型的发展趋势。

关键词：沉降模拟气溶胶计算机流体动力学肺模型支气管树

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气溶胶粒子在呼吸道沉降的计算机流体动力学模拟方法研究进展

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军事医学 2011年第2期35卷 153-157页

作者：刘克洋李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

不论是吸入危害评估还是药物气溶胶的靶向治疗,都需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的区域沉积特征。随着科技的进步,已经可以利用计算机流体动力学模拟技术(CFD)生成逼真的呼吸道模型,并在其中模拟复杂的气流传输特征,产生相对准确的沉降... 详细信息

不论是吸入危害评估还是药物气溶胶的靶向治疗,都需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的区域沉积特征。随着科技的进步,已经可以利用计算机流体动力学模拟技术(CFD)生成逼真的呼吸道模型,并在其中模拟复杂的气流传输特征,产生相对准确的沉降结果。该文综述了CFD模拟技术的研究进展,阐述了微米或纳米级颗粒沉降的主要公式和目前运用该方法的一般步骤。

关键词： CFD模拟肺模型气溶胶沉降

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酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

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解放军医学杂志 2011年第4期36卷 382-384页

作者：周希珍赵慧李晓峰邓永强秦成峰秦鄂德高岚兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：酵母双杂交乙型脑炎病毒 NS5蛋白

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鼠疫菌H-NS蛋白的表达与纯化及其DNA结合活性分析

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微生物学报 2011年第5期51卷 615-621页

作者：张义全高鹤王丽罗张谭亚芳郭兆彪杨瑞馥周冬生军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hn... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hns重组质粒转入大肠杆菌BL21λDE3菌株中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出鼠疫菌His-H-NS蛋白;通过体外的凝胶迁移实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验对His-H-NS蛋白与DNA的结合活性进行分析。【结果】成功表达出有活性的鼠疫菌His-H-NS蛋白,该蛋白对鼠疫菌pH6抗原基因(psaA、psaE)及rovA基因均有结合活性。【结论】鼠疫菌His-H-NS具有DNA结合活性,说明H-NS能调控鼠疫菌基因的转录。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌 H-NS DNA结合活性

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