检索结果-内蒙古大学图书馆

中华检验医学杂志 2011年第7期34卷 650-655页

作者：梁冰玉李敬云庄道民苏齐鉴刘思扬蒋俊俊肖信岑平陈晖梁浩广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究实验室南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物安全国家重点实验室

目的附测定双抗体夹心法检测p24抗原表达.用Student-t检验或方差分析（ANOVA）比较不同细胞处理组间p24抗原表达差异;采用重复测量数据的方差分析比较不同时间吗啡处理组比对照组的p24抗原表达增加或减少倍数的变化趋势.结果 HIV-1感染... 详细信息

目的附测定双抗体夹心法检测p24抗原表达.用Student-t检验或方差分析（ANOVA）比较不同细胞处理组间p24抗原表达差异;采用重复测量数据的方差分析比较不同时间吗啡处理组比对照组的p24抗原表达增加或减少倍数的变化趋势.结果 HIV-1感染MT2细胞后第3、4、5和6天,3个浓度的吗啡处理的（1）组的p24抗原表达[第3天：（4.44±0.30）、（5.59±0.25）和（4.60±0.24） ng/ml;第4天：（24.30±2.66）、（31.73±1.17）和（26.02±0.37） ng/ml;第5天：（56.30±1.26）、（81.77±2.49）和（63.66±2.57） ng/ml;第6天：（150.70±8.97）、（243.09±8.93）和（173.72±7.73） ng/ml]均高于（4）组[第3~6天分别为（1.93±0.05）、（8.03±0.09）、（15.30±0.91）、（41.01±0.84） ng/ml],差异有统计学意义（第3天：t值分别为14.15、24.74和19.14,P均〈0.01;第4天：t值分别为10.59、34.92和81.2,P均〈0.01;第5天：t值分别为45.83、43.51和30.07,P均〈0.01;第6天：t值分别为20.09、39.02和29.55,P均〈0.01）.3个浓度的吗啡处理的（1）组的p24抗原表达比（4）组增加的倍数,随HIV-1感染MT2细胞的时间的延长具有上升的趋势,时间效应具有统计学意义（F=842.18,P〈0.01）.HIV-1感染巨噬细胞组后第4、6、8和10天,3个浓度的吗啡处理的（5）组的p24抗原表达[第4天：（0.68±0.15）、（0.87±0.41）和（0.75±0.09） ng/ml;第6天：（1.64±0.57）、（2.07±0.12）和（1.75±0.17） ng/ml;第8天：（6.31±0.17）、（8.81±0.34）和（7.19±0.11） ng/ml;第10天：（32.30±17.55）、（50.74±17.55）和（39.74±0.56） ng/ml]均高于（8）组[第4、6、8、10天分别为（0.60±0.01）、（1.16±0.07）、（3.84±0.45）、（17.55±0.86） ng/ml],差异有统计学意义（第4天：t值分别为7.27、11.06和3.02,P均〈0.05;第6天：t值分别为8.93、11.3和5.45,P均〈0.01;第8天：t值分别为8.83、15.11和12.42,P均〈0.01;第10天：t值分别为13.65、17.84和36.69,P均〈0.01）.3个浓度的吗啡处理的（5）组的p24抗原表达比（8）组增加的倍数,随HIV-1感染时间的延长具有上升的趋势,时间效应具有统计学意义（F=135.58,P〈0.01）.结论吗啡能够促进HIV-1在MT2细胞和巨噬细胞内的复制,并且随着感染时间的延长而增加;吗啡促进HIV-1复制的作用可被纳洛酮阻断.

关键词：吗啡 HIV-1 HIV核心蛋白质p24 巨噬细胞纳洛酮病毒复制

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HSV-2 gD融合gB CTL表位重组蛋白的原核表达及免疫原性评价

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动物医学进展 2011年第6期32卷 19-23页

作者：李君丽刘坤姜德玉张伟王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达载体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(... 详细信息

为研制具有较强细胞免疫作用的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)疫苗,将HSV-2糖蛋白D(gD)序列与糖蛋白B(gB)上两种CTL表位序列连接,人工合成重组基因gD-gBCTL,通过PCR扩增,将其克隆后连接至原核表达载体pET-22b(+),构建重组基因表达质粒pET-22b(+)-gD-gBCTL,转化***21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,His TrapTMHP柱纯化目的蛋白并免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测血清抗体效价,结果显示重组蛋白在大肠埃希菌中得到了高效表达,该重组蛋白具有较好的免疫原性。

关键词： HSV-2 糖蛋白D CTL表位原核表达免疫原性

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淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达

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动物医学进展 2011年第5期32卷 77-81页

作者：赵莉群陈中伟张伟王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GS-GGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆载体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)... 详细信息

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GS-GGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆载体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-PIA-表位、pET32a-PIB-表位、pET32a-PIA和pET32a-PIB重组表达质粒,PCR、双酶切鉴定及测序正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE鉴定分析,成功表达融合蛋白。

关键词：淋球菌孔蛋白脂寡糖表位基因融合表达

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不同破壁方法提取酵母菌总RNA的比较

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食品科学 2011年第11期32卷 161-164页

作者：易弋容元平程谦伟黎娅王晓林广西工学院生物与化学工程系广西柳州545006 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

选择液氮碾磨、反复冻融、超声波、加玻璃珠漩涡振荡和蜗牛酶酶解5种方法破碎酵母菌细胞壁,再使用Trizol法提取酵母菌总RNA,通过对总RNA进行质量浓度和纯度分析,比较不同破壁方法对酵母菌总RNA提取的影响。结果表明:在使用Trizol法提取... 详细信息

选择液氮碾磨、反复冻融、超声波、加玻璃珠漩涡振荡和蜗牛酶酶解5种方法破碎酵母菌细胞壁,再使用Trizol法提取酵母菌总RNA,通过对总RNA进行质量浓度和纯度分析,比较不同破壁方法对酵母菌总RNA提取的影响。结果表明:在使用Trizol法提取酵母菌总RNA的实验中,反复冻融和液氮碾磨是较为有效且简便的酵母菌细胞壁破碎方法。

关键词： Trizol试剂 RNA提取酵母菌破壁

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埃及伊蚊传播西尼罗病毒的媒介效能研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2011年第2期22卷 107-109页

作者：张映梅姜淑芳郭晓霞董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军总医院

目的研究我国埃及伊蚊传播西尼罗病毒的潜在能力。方法人工配制病毒血餐感染埃及伊蚊并进行传播实验,应用反转录聚合酶链反应(RT?PCR)、病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)检测蚊虫和来亨鸡体内病毒。结果动物实验结果表明敏感动物来亨鸡感... 详细信息

目的研究我国埃及伊蚊传播西尼罗病毒的潜在能力。方法人工配制病毒血餐感染埃及伊蚊并进行传播实验,应用反转录聚合酶链反应(RT?PCR)、病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)检测蚊虫和来亨鸡体内病毒。结果动物实验结果表明敏感动物来亨鸡感染西尼罗病毒后,第2天其体内病毒量达到最高,说明进行传播实验后的第2天是检测传播是否成功的最佳时间。感染与传播实验结果表明埃及伊蚊对西尼罗病毒的感染率达到了63.3%,而且通过刺叮敏感动物(来亨鸡)能够传播该病毒,其传播率为30.0%。结论在未来我国可能的西尼罗热暴发中,埃及伊蚊可能成为其在海南等地的潜在传播媒介。

关键词：埃及伊蚊西尼罗病毒易感性传播

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甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2011年第6期27卷 470-474页

作者：高啸潘玉竹陈中伟邢丽刘坤王文娟杨鹏辉王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 重庆大学A区生物工程学院 400044

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot... 详细信息

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。

关键词：甲型H1N1 病毒样颗粒疫苗

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HIV-1N348I耐药突变流行状况及突变模式的研究

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中华流行病学杂志 2011年第9期32卷 908-912页

作者：李韩平韩扬朱新鹏路新利郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京协和医院感染科河南省疾病预防控制中心河北省疾病预防控制中心

目的阐明HIV-1耐药相关突变N348I在中国艾滋病患者中的流行率及突变模式。方法用RT-PCR从血浆标本中扩增614例治疗失败和619例未治疗的艾滋病患者的HIV-1po1基因蛋白酶（PR）反转录酶（RT）全长基因（2100bp）。将获得的1233条序列提交... 详细信息

目的阐明HIV-1耐药相关突变N348I在中国艾滋病患者中的流行率及突变模式。方法用RT-PCR从血浆标本中扩增614例治疗失败和619例未治疗的艾滋病患者的HIV-1po1基因蛋白酶（PR）反转录酶（RT）全长基因（2100bp）。将获得的1233条序列提交斯坦福大学HIV-1耐药数据库，根据数据库比对结果，分析N348I出现的频率及模式。结果N348I突变在抗病毒治疗失败患者中的流行率为6．5％，在未治疗患者中的流行率为0．8％。使用含齐多夫定（AZT）方案治疗的患者，N348I突变的流行率显著高于使用不含AZT方案治疗的患者（14．1％vs4．7％，x2=10．21，P〈0．01）；在出现N348I突变的接受治疗的患者中，N348I均以与其他突变联合的形式出现，与胸苷类似物耐药突变（TAMs）共同发生占85．0％（34／40）、与M184V／I共同出现占52．5％。结论使用一线方案治疗失败的艾滋病患者中，N348I突变有一定流行，该突变的发生以特有突变模式出现。

关键词：艾滋病毒1型耐药 N348I

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利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平

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中国生物工程杂志 2011年第8期31卷 92-96页

作者：陈斌李建彬米志强安小平李存刘大斌姜焕焕王娟黄芬张宝中范华昊何后军童贻刚江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广州510642

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后... 详细信息

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。

关键词：慢病毒载体报告基因基因表达定点突变

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医学媒介生物学纵论

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中华卫生杀虫药械 2011年第1期17卷 2-9页

作者：虞以新军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

1媒介生物的自然属性媒介生物这词显现着生物功能及行为,充溢着生态学的内涵。因为媒介行为必然至少涉及三方,而且需要有相宜的时机和条件方可。按黑克儿（Haeckel）早在1869年所述＂生态学是研究生物有机体与其周围环境（包括生物环境... 详细信息

1媒介生物的自然属性媒介生物这词显现着生物功能及行为,充溢着生态学的内涵。因为媒介行为必然至少涉及三方,而且需要有相宜的时机和条件方可。按黑克儿（Haeckel）早在1869年所述＂生态学是研究生物有机体与其周围环境（包括生物环境和非生物环境）

关键词：媒介生物学医学周围环境媒介行为自然属性生物功能生态学有机体

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黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第1期18卷 28-33页

作者：孟艳芬段长松王锡乐熊小路温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的... 详细信息

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特异性结果显示,4个重组蛋白免疫血清,其特异性抗体效价均≥1：5 120,与斑点热群立氏立克次体有相对明显的血清学交叉反应（≥1：40）,而和斑疹伤寒群立克次体仅有轻度交叉反应（≤1：40）.结果表明,重组OmpB蛋白能有效诱导机体产生特异性体液免疫应答,并能与黑龙江立克次体抗体产生特异反应,显示其具有良好的抗原性.

关键词：黑龙江立克次体外膜蛋白抗原性

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