检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 893-897页

作者：赵晶孙恩成刘霓红杨涛杨银辉耿宏伟秦永丽王凌凤徐青元吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室北京100071

为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a... 详细信息

为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应。利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33(321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位。本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础。

关键词：东方马脑炎病毒 E2蛋白原核表达真核表达单克隆抗体抗原表位

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西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定

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中国免疫学杂志 2011年第6期27卷 529-532页

作者：马健男杨涛徐青元孙恩成林燕刘霓红杨银辉李文京步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国动物疫病预防控制中心北京100125

目的:制备针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性单克隆抗体。方法:以原核表达的重组NS1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。以真核表达的重组NS1蛋白为检测用抗原,建立间接ELISA检测方... 详细信息

目的:制备针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性单克隆抗体。方法:以原核表达的重组NS1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合。以真核表达的重组NS1蛋白为检测用抗原,建立间接ELISA检测方法筛选分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。并利用Western blot和IFA试验对所获得的单克隆抗体进行鉴定。结果:共获得了2株稳定分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为WN-1C10和WN-3D10,其亚类鉴定分别属于IgG2a和IgG1。这2株单克隆抗体均能与西尼罗病毒NS1蛋白和病毒抗原发生特异性反应,而与日本脑炎病毒无交叉反应。结论:本实验成功制备出针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性单克隆抗体,为我国建立西尼罗病毒与日本脑炎病毒的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1蛋白单克隆抗体

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重组蓖麻、相思子毒素A链嵌合突变体的制备与分析

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生物技术通讯 2011年第4期22卷 453-457页

作者：韩艳辉张弢康琳高姗辛文文王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及抗原性分析。方法:采用柔性linker连接RIC A链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mA... 详细信息

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及抗原性分析。方法:采用柔性linker连接RIC A链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mABRA,将该嵌合体基因亚克隆至原核载体pQE80L构建表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA,再转化至大肠杆菌M15获得表达工程菌株M15/pQE80L-mRICA/mABRA,工程菌在18℃经0.1 mmol/L的IPTG诱导14 h,表达的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,通过ELISA和Western印迹检测嵌合体蛋白的抗原性。结果:所获得的mRICA/mABRA嵌合体基因经一致性比对分析,与预计嵌合基因的序列一致性为100%,其开放读框全长1572 bp,编码524个氨基酸残基;重组表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,嵌合体蛋白相对分子质量约为62×103,与预测相符,可溶性的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯度可达99%;间接ELISA和Western印迹结果表明,嵌合体蛋白能同时与抗RIC多克隆抗体和抗ABR多克隆抗体发生特异的抗原抗体反应。结论:得到的mRICA/mABRA嵌合体蛋白具有良好的抗原性,为研制新型RIC和ABR双价疫苗奠定了重要基础。

关键词：蓖麻毒素相思子毒素突变体嵌合体抗原性

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虚拟表型方法在HIV-1耐药检测中的应用

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中国艾滋病性病 2011年第2期17卷 188-190页

作者：郭伟李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性检测,已成为抗病毒治疗中进行合理用药的重要依据。基因型和表型耐药检测是最常用的HIV耐药检测方法,这两种方法的局限性在于:基因型方法不能直接提供药物耐受信息,表型方法比较耗时。根据上述两种方法之间... 详细信息

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性检测,已成为抗病毒治疗中进行合理用药的重要依据。基因型和表型耐药检测是最常用的HIV耐药检测方法,这两种方法的局限性在于:基因型方法不能直接提供药物耐受信息,表型方法比较耗时。根据上述两种方法之间的良好相关性提出的虚拟表型耐药检测方法,尽管也存在不足,但是提供了另外一种方便的得到耐药信息的方法,从而更好地指导抗病毒治疗。

关键词：耐药 cut-off值虚拟表型

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高致病性禽流感H5N1病毒M1蛋白的重组表达及在感染检测中的初步应用

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中国卫生检验杂志 2011年第9期21卷 2117-2119页

作者：茹志涛寇志华李军锋孙世慧赵光宇郭彦董雨春周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:原核表达重组高致病性禽流感基质蛋白M1并分析其在感染检测中的作用。方法:根据NCBI公布的基质蛋白M1的核苷酸序列设计特异性引物,用高致病禽流感H5N1病人分离的病毒提取病毒RNA进行反转录合成cD-NA,扩增基质蛋白M1基因。将M1基因... 详细信息

目的:原核表达重组高致病性禽流感基质蛋白M1并分析其在感染检测中的作用。方法:根据NCBI公布的基质蛋白M1的核苷酸序列设计特异性引物,用高致病禽流感H5N1病人分离的病毒提取病毒RNA进行反转录合成cD-NA,扩增基质蛋白M1基因。将M1基因克隆到pQE30原核表达载体进行非融合表达,纯化重组表达的蛋白并用免疫学方法检测分析。结果:克隆了高致病禽流感H5N1病毒基质蛋白M1基因,并采用pQE30原核表达载体成功表达该蛋白。以该重组蛋白为检测包被抗原建立间接ELISA,检测6份病人血清标本均为阳性,而正常对照人群为阴性。结论:高致病禽流感H5N1病毒M1蛋白可以应用于感染检测中。

关键词：高致病禽流感2006年深圳株H5N1病毒基质蛋白M1 非融合表达

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贝氏柯克斯体血清学反应蛋白芯片的研制

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第2期18卷 90-94页

作者：熊小路王锡乐孟艳芬齐永温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

贝氏柯克斯体为Q热的病原菌。本研究对19个贝氏柯克斯体血清学反应阳性蛋白基因进行PCR扩增，将扩得的基因片段与表达载体连接，将重组质粒转化大肠杆菌并表达目的蛋白，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化... 详细信息

贝氏柯克斯体为Q热的病原菌。本研究对19个贝氏柯克斯体血清学反应阳性蛋白基因进行PCR扩增，将扩得的基因片段与表达载体连接，将重组质粒转化大肠杆菌并表达目的蛋白，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。将贝氏柯克斯体新桥株实验感染小鼠血清分别对蛋白芯片进行血清学分析，结果显示能与贝氏柯克斯体感染1、2、3、4周小鼠血清反应的蛋白数分别是0、16、19和18个。结果说明该芯片上的重组蛋白具有贝氏柯克斯体感染血清反应特异性，该芯片分析有望用于Q热的血清学诊断。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热血清反应阳性蛋白蛋白芯片

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云南中缅边境蚊科昆虫群落的研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第4期18卷 216-219页

作者：王刚郑重董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为调查和了解云南省瑞丽市中缅边境蚊虫多样性状况，应用灯诱法和采集幼虫法对瑞丽市中缅边境上高丽村和周边方圆4km原始森林内的蚊虫的优势种组成、蚊虫群落结构的集中性指数、多样性指数和均匀度指数进行分析。结果显示，在居民区共... 详细信息

为调查和了解云南省瑞丽市中缅边境蚊虫多样性状况，应用灯诱法和采集幼虫法对瑞丽市中缅边境上高丽村和周边方圆4km原始森林内的蚊虫的优势种组成、蚊虫群落结构的集中性指数、多样性指数和均匀度指数进行分析。结果显示，在居民区共采获蚊虫3305只，共5属13种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属Aedes、库蚊属Culex、按蚊属Anopheles、曼蚊属Mansonia和阿蚊属Arm函eres。其中优势种蚊虫为三带喙库蚊和中华按蚊。在非居民区共采或蚊虫200只，共5属21种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属、库蚊属、按蚊属、巨蚊属Toxorhynchites和蓝带蚊属Uanotaenia。其中优势种蚊虫为白纹伊蚊、拟态库蚊。由于自然环境的破坏，居民区优势集中度过高，群落结构不均匀，非居民区多样性较差，群落内物种的均匀度也偏低。

关键词：蚊虫中缅边境群落

来源：评论

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用人MHC转基因小鼠模型鉴定高致病禽流感病毒核蛋白CTL表位

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生物技术通讯 2011年第5期22卷 657-661页

作者：茹志涛寇志华李军锋孙世惠赵光宇郭彦董雨春周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:筛选高致病禽流感病毒核蛋白(NP)中可用于高致病禽流感病毒感染检测或疫苗设计的CTL表位,为评价疫苗接种效果和开发新型疫苗奠定基础。方法:根据NCBI公布的NP的核苷酸序列设计特异性引物,以2006年深圳株高致病禽流感H5N1病人分离... 详细信息

目的:筛选高致病禽流感病毒核蛋白(NP)中可用于高致病禽流感病毒感染检测或疫苗设计的CTL表位,为评价疫苗接种效果和开发新型疫苗奠定基础。方法:根据NCBI公布的NP的核苷酸序列设计特异性引物,以2006年深圳株高致病禽流感H5N1病人分离的病毒cDNA为模板扩增NP全长基因(1500 bp)并测序。通过生物信息学方法,预测NP氨基酸序列中潜在的HLA-A觹0201限制性表位。构建重组pJW4303-NP核酸疫苗并肌肉免疫HLA-A2/DP4转基因小鼠,利用ELISPOT法筛选特异性CTL表位。结果:克隆了2006年深圳株高致病禽流感NP基因,构建的重组pJW4303-NP核酸疫苗能在体外COS-7细胞中表达,免疫小鼠后能引起小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫。结论:生物信息学和转基因小鼠模型筛选相结合的方法,能用于高致病性禽流感核蛋白CTL表位的筛选。

关键词：高致病禽流感H5N1病毒核蛋白 CTL表位 HLA转基因小鼠

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云南中老边境蚊科昆虫群落的研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第3期18卷 152-155页

作者：王刚郑重罗森董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为调查和了解云南省西双版纳中老边境蚊虫多样性状况，应用灯诱法和采集幼虫法对西双版纳州中老边境上5个村落和周边方圆4km原始森林内的蚊虫的优势种组成、蚊虫群落结构的集中性指数、多样性指数和均匀度指数进行分析。结果显示，在居... 详细信息

为调查和了解云南省西双版纳中老边境蚊虫多样性状况，应用灯诱法和采集幼虫法对西双版纳州中老边境上5个村落和周边方圆4km原始森林内的蚊虫的优势种组成、蚊虫群落结构的集中性指数、多样性指数和均匀度指数进行分析。结果显示，在居民区共采获蚊虫8762只，共8属33种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属Aedes、库蚊属Culex、按蚊属Anopheles、曼蚊属Mansonia、柯蚊属Coquilleuidia、阿蚊属Armigere$、蓝带蚊属Uanotaenia和小蚊属Mimomyia，其中优势种蚊虫为三带喙库蚊、中华按蚊和微小按蚊。在非居民区共采获蚊虫535只，共9属46种，隶属于蚊科Culicidae中的伊蚊属Aedes、库蚊属Culex、按蚊属Anopheles、巨蚊属Toxorhynchite~、领蚊属Heizmannia、局限蚊属Topomyia、钩蚊属Malaya、杵蚊属n如抛rDi如s和蓝带蚊属Uanotaenln，其中优势种蚊虫为白纹伊蚊。结果表明，居民区和非居民区其生物群落内种群结构稳定，均匀度较好。

关键词：蚊虫中老边境群落

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不同促渗剂对氯诺昔康体外经皮吸收的影响

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解放军药学学报 2011年第1期27卷 20-22页

作者：李理宇张东娜窦媛媛兰晶王洪权军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的考察氮酮、月桂醇、油酸等几种常用促渗剂在不同浓度和联合使用对氯诺昔康体外经皮渗透的影响。方法用改良的Franz扩散池作为离体透皮试验装置,用pH8的磷酸盐缓冲液作为接收液,以稳态流量(Js)、增渗倍数(ER)及滞后时间为考察指标,... 详细信息

目的考察氮酮、月桂醇、油酸等几种常用促渗剂在不同浓度和联合使用对氯诺昔康体外经皮渗透的影响。方法用改良的Franz扩散池作为离体透皮试验装置,用pH8的磷酸盐缓冲液作为接收液,以稳态流量(Js)、增渗倍数(ER)及滞后时间为考察指标,观察不同促渗剂对氯诺昔康经皮吸收的促进作用。结果油溶性促渗剂促渗效果要好于水溶性促渗剂。以丙二醇为溶剂时,油溶性促渗剂氮酮、薄荷醇、十二醇、油酸对氯诺昔康都有促进作用。其中,氮酮渗透促进作用最为显著,月桂醇次之,两者联合应用效果显著。结论氮酮及其联合促渗剂的应用对氯诺昔康经皮给药均有理想渗透促进作用。

关键词：促渗剂氯诺昔康经皮渗透性

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