检索结果-内蒙古大学图书馆

第二届媒介生物可持续控制国际论坛

作者：周毅彬赵彤言冷培恩军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室上海市疾病预防控制中心

目的在上海市共青森林公园和内燃机研究所观察孳生地治理控制白纹伊蚊的效果。方法在试验区共青森林公园游乐区采取各种方法对白纹伊蚊孳生地进行治理;对照区内燃机研究所不采取任何防治措施。试验采用诱蚊诱卵器和CO诱蚊灯监测白纹伊... 详细信息

目的在上海市共青森林公园和内燃机研究所观察孳生地治理控制白纹伊蚊的效果。方法在试验区共青森林公园游乐区采取各种方法对白纹伊蚊孳生地进行治理;对照区内燃机研究所不采取任何防治措施。试验采用诱蚊诱卵器和CO诱蚊灯监测白纹伊蚊幼虫和成蚊密度,评价其控制效果。结果在孳生地治理后白纹伊蚊幼虫和成蚊密度逐步下降,在2～3周后幼虫和成蚊相关密度指数皆控制在35以下,密度下降率皆>50%。结论孳生地治理可有效控制白纹伊蚊的密度。

关键词：白纹伊蚊孳生地治理诱蚊诱卵器诱蚊灯相关密度指数

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HIV抗体免疫印迹试验不确定结果的特征及鉴别方法研究

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中国学术期刊文摘 2008年第17期14卷 185-186页

研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果.以解放军艾滋病检测确认实验室2005-2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象,对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24... 详细信息

研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果.以解放军艾滋病检测确认实验室2005-2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象,对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24抗原检测,同时进行随访,将随访前后的标本同时检测,比较免疫印迹带型的进展,判断HIV感染的真实状况,以随访的结果为标准,

关键词：艾滋病病毒抗体免疫印迹确认

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西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第11期27卷 1037-1040页

作者：刘志国朱晓光杨保安刘伯华祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达... 详细信息

目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M，进行融合表达和纯化。将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验，观察其保护作用。结果分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M，表达和纯化了融合蛋白Nus-M，该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击。结论构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达，表达产物有较弱的免疫保护反应，为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料，但需要进一步改进。

关键词：西尼罗病毒多表位基因免疫保护

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人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第5期23卷 450-452页

作者：蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌***2566,IPT... 详细信息

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌***2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。

关键词：抗狂犬病毒二硫键稳定抗体 MBP融合蛋白原核表达

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实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体

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中华流行病学杂志 2007年第3期28卷 277-281页

作者：张晶波温博海陈梅玲李丽莉邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时... 详细信息

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法，对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析，并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．997）；与普通PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，除军团菌检出微弱信号（2个拷贝）外，其余检出结果均为0；对重复性进行了评价，批内和批间的变异系数在0．2％～1．9％之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本，在感染后第2天、第3天、第5天，检出少量的汉赛巴通体，在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性，可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。

关键词：汉赛巴通体巴通体感染实时定量PCR

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人源抗狂犬病毒单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

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微生物学报 2007年第4期47卷 673-676页

作者：蔡昆王慧包士中史晶侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱... 详细信息

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性。结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白。荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高。这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料。

关键词：狂犬病毒单链二硫键稳定抗体表达

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衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

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南方医科大学学报 2007年第1期27卷 31-34,37页

作者：朱武洋秦鄂德于曼秦成峰于学东军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒。方法在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋... 详细信息

目的制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒。方法在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒。结果序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变。结论成功制备衣壳蛋白缺失突变病毒,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础。

关键词：登革病毒感染性全长cDNA克隆缺失突变病毒

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HSP65-MUC1 VNTR_2融合蛋白的表达、纯化及其抗肿瘤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1014-1016,1024页

作者：郑玉玲江华王希良姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-M... 详细信息

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导表达;利用单克隆抗体(mAb)进行Westernblot鉴定,以Q柱和凝胶过滤纯化获得纯化蛋白。通过建立转染人MUC1基因的B16黑色素瘤小鼠肿瘤模型,在C57BL/6小鼠体内研究HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白的肿瘤生长抑制活性。结果:获得的结核分支杆菌HSP65基因和人MUC1基因VNTR区的2个重复片段,经测序证明分别与GenBank中结核杆菌HSP65基因和人MUC1基因的VNTR完全相符;构建的原核表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+)可稳定的可溶性表达HSP65-MUC1VNTR2蛋白;经Q柱和凝胶过滤纯化,纯化的目的蛋白纯度达95%以上;利用鼠抗人MUC1mAb对表达蛋白进行验证,结果阳性;小鼠肿瘤预防免疫实验表明,实验组小鼠抑瘤率大于对照组,且具有明显性差异。结论:成功地利用原核表达系统实现了对HSP65-MUC1VNTR2蛋白的可溶性表达,并对其体内预防实验进行了初步研究,证明该融合蛋白能明显抑制表达MUC1的肿瘤生长。为进一步评价其作为肿瘤疫苗可能性的研究打下了基础。

关键词：热休克蛋白65 MUC1 VNTR 纯化预防免疫

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中国大林姬鼠携带Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征分析

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中华流行病学杂志 2007年第5期28卷 482-486页

作者：张文义江佳富姚昆吴晓明左曙青詹琳褚宸一赵秋敏张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林... 详细信息

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林姬鼠肺标本JilinAP06中分别扩增出长度383 bp（M基因）和1696 bp（S基因）大小的目的eDNA片段,其S基因全长由1696个核苷酸组成,完整的开放阅读框从37位核苷酸至1323位核苷酸,共1287个核苷酸,编码429个氨基酸的蛋白。JilinAP06 S基因与1378、Liu株同源性最高,与H5株同源性次之,与AP63、AP61和AP1371同源性为91．0%～91．7%,与76．118同源性为81．0%。S全序列基因推导的氨基酸序列与其他汉坦病毒已知序列比较显示：JilinAP06与AP1371同源性最高（98．4%）,与AP61同源性为98．1%,与AP63和Liu、B78和H5株同源性为97．2%～97．9%,与76-118同源性为95．1%。系统发育分析结果显示：JilinAP06与Amur类汉坦病毒构成一个相对独立的分支。M基因片段同源性比较和系统发育分分析结果与基于S基因全长得到的结果一致.结论中国大林姬鼠存在Amur类病毒，大林姬鼠很可能为Amur类病毒的自然宿主和人群Amur类病毒感染的重要来源。

关键词：汉坦病毒 Amur病毒大林姬鼠

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多重实时PCR检测三种呼吸道病毒

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第9期27卷 856-859页

作者：赵海龙姜涛邓永强陈水平李晓峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线... 详细信息

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线分析,证实了该法可同时或分别检测3种重要呼吸道病毒。检测灵敏度分别为10^(0.7)TCID_(50)/ml、1 TCID_(50)/ml和10^(-0.5) TCID_(50)/ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒(包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型)进行扩增,均未检测出扩增产物。此种方法可在4h内完成。结论建立的多重实时PCR检测方法适用于3种重要呼吸道病毒的快速检测。

关键词：多重实时PCR 甲型流感病毒呼吸道合胞病毒 SARS冠状病毒

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