检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 86-92页

作者：朱晓峰陈锦辉张昕安小平周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的:介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法:根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列,再以此氨基酸序列进行逆翻译,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变(silent mutations),这些突变中包含大量的限制性内... 详细信息

目的:介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法:根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列,再以此氨基酸序列进行逆翻译,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变(silent mutations),这些突变中包含大量的限制性内切酶位点,选择合适的酶切位点,自酶切位点向两侧合成引物(其中仅一个引物含有突变),用这些引物扩增两侧DNA片段(其中仅一个片段含有突变),然后将这两个片段以相应的内切酶切割后融合即可完成定点突变。结果:用该方法成功地纠正了人工合成的可溶性组织因子基因中两个碱基的缺失,校正了阅读框架,获得了预期的目的基因。结论:该方法简便、有效,突变成功率高,适合于在一般分子生物学实验室使用;该方法能避免了因多轮PCR和合成长引物导致突变的可能性,可作为一种定点突变的替代方法。这种改进的PCR定点诱变技术我们称之为“设计限制酶辅助突变”(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)。

关键词：定点突变聚合酶链反应设计限制酶辅助突变

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TAT蛋白转导域:蛋白质治疗的新曙光

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第7期23卷 519-524页

作者：秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

TAT蛋白转导域是源自人类免疫缺陷病毒Tat蛋白的一段碱性氨基酸多肽,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,在药物转运和疾病治疗等领域有着巨大的应用潜力.TAT蛋白转导域首先通过电荷相互作用... 详细信息

TAT蛋白转导域是源自人类免疫缺陷病毒Tat蛋白的一段碱性氨基酸多肽,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,在药物转运和疾病治疗等领域有着巨大的应用潜力.TAT蛋白转导域首先通过电荷相互作用吸附于细胞膜,然后通过脂筏介导的巨胞饮作用进入细胞.随着体外研究的不断成熟,应用TAT蛋白转导域治疗人类肿瘤、卒中、炎症等疾病的动物模型也获得了成功,TAT蛋白转导域进入临床指日可待.

关键词：蛋白转导域蛋白质治疗巨胞饮应用

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中国蚋科一新记录(双翅目：蚋科)

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寄生虫与医学昆虫学报 2008年第4期15卷 262页

作者：聂维忠李俊成李德昕王海军安继尧虞以新秦皇岛出入境检验检疫局秦皇岛066002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

2005年6月16日,在河北省秦皇岛市采到蚋科中国新记录种Simulium (Simulium) flavidum Rubtsov,1947。标本保存于军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：保存生物学河北军事医学昆虫双翅目中国蚋科

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新型阳离子基因传递载体PEI-PBLG的细胞转染研究

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生物工程学报 2007年第2期23卷 229-234页

作者：尉继征林磊熊伟祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性... 详细信息

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI（10kD）-PBLG、PEI（25kD）．PBLG、PEI（10kD）和PEI（25kD）的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI（10kD）-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI（10kD）-PBLG可包裹质粒形成粒径100—120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10％血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG（10kD）／pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45．02％，高于Pri（10kD）／pEGFP的29．16％；PEI（10kD）-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI（25kD）、PEI（10kD）和PEI（25kD）-PBLG。新型阳离子多聚物PEI（10kD）-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

关键词：聚乙烯亚胺聚谷氨酸基因传递转染效率细胞毒性

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中国蚋科一新记录(双翅目:蚋科)(英文)

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寄生虫与医学昆虫学报 2008年第4期15卷 262-262页

2005年6月16日,在河北省秦皇岛市采到蚋科中国新记录种Simulium (Simulium) flavidum Rubtsov,1947。标本保存于军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：蚋科蚋属新记录种中国

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东部马脑炎病毒E2基因与GM-CSF共表达质粒的构建及其免疫原性初步研究

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军事医学科学院院刊 2007年第1期31卷 28-31,53页

作者：尉继征林磊熊伟李佳明杨保安祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)作为基因佐剂,提高东部马脑炎病毒E2基因重组质粒的免疫效果。方法:分别扩增E2基因与GM-CSF基因,连接进入含有内部核糖体插入位点(IRES)的真核表达载体中,构建共表达质粒。Lipofectamine2... 详细信息

目的:利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)作为基因佐剂,提高东部马脑炎病毒E2基因重组质粒的免疫效果。方法:分别扩增E2基因与GM-CSF基因,连接进入含有内部核糖体插入位点(IRES)的真核表达载体中,构建共表达质粒。Lipofectamine2000介导转染真核细胞BHK-21,反转录PCR检测E2和GM-CSF两个基因的转录,Western印迹法和间接免疫荧光法(IFA)检测细胞内E2基因表达产物的抗原性。通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠,IFA法测定血清抗体效价,FACS测定免疫小鼠脾细胞中CD4+/CD8+淋巴细胞构成比,初步观察共表达质粒的免疫原性。结果:经酶切鉴定与序列测定证明重组共表达质粒中含有E2和GM-CSF两个基因且序列正确。转染细胞的反转录PCR可见E2和GM-CSF两个基因的转录。Western印迹结果可见转染细胞的裂解液在相对分子质量50000位置有特异性条带。将转染细胞制成荧光抗原片,经IFA检测可见胞浆中出现特异荧光。免疫小鼠的最高血清抗体效价为1∶160,但细胞免疫未观察到明显的提高。结论:构建的共表达质粒pE2-IRES-mGM-CSF具有良好的免疫原性,能有效刺激小鼠特异性体液免疫应答,提高了E2基因重组质粒诱导的血清抗体效价。

关键词：东部马脑炎病毒 E2基因粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子共表达免疫原性

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肝特异性假病毒转运系统的构建

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军事医学科学院院刊 2007年第4期31卷 338-342页

作者：安小平朱晓峰张昕陈锦辉陈士华周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced ... 详细信息

目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段。方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因。同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白。以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测。结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle)。实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl。ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达。

关键词：肝特异性病毒载体乙型肝炎病毒基因转运

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特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变

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中国媒介生物学及控制杂志 2007年第3期18卷 255-256页

作者：李春晓张晓龙曹晓梅董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道。昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在... 详细信息

城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道。昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在家蝇对拟除虫菊酯的抗性中具有重要作用。[第一段]

关键词：击倒抗性 PCR扩增拟除虫菊酯类杀虫剂家蝇基因突变技术检测等位基因钠通道

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实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1054-1056页

作者：杨晓陈梅玲温博海牛东升孙长俭李青凤军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR。方法依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线... 详细信息

目的采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR。方法依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出<10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1000倍。用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性。用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性。结论该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒。

关键词：莫氏立克次体实时定量PCR 外膜蛋白B基因地方性斑疹伤寒

来源：评论

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基于N蛋白稳定表达细胞株的SARS-CoV间接免疫荧光检测方法的建立

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军事医学科学院院刊 2007年第2期31卷 166-169页

作者：赵海龙姜涛陈水平赵慧邓永强于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立基于SARS-CoVN蛋白稳定表达细胞系的间接免疫荧光法,以在普通实验室对SARS-CoV特异抗体进行检测。方法:将含有SARS-CoVN基因的重组质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,筛选稳定表达细胞系并制备间接免疫荧光抗原片,以鼠抗SARS血清... 详细信息

目的:建立基于SARS-CoVN蛋白稳定表达细胞系的间接免疫荧光法,以在普通实验室对SARS-CoV特异抗体进行检测。方法:将含有SARS-CoVN基因的重组质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,筛选稳定表达细胞系并制备间接免疫荧光抗原片,以鼠抗SARS血清进行检测,并以其他呼吸道病毒抗体评估其特异性。结果与结论:建立了可检测SARS-CoV抗体的基于SARS-CoVN蛋白稳定表达重组细胞系的间接免疫荧光法,检测其他呼吸道病毒抗体为阴性,特异性良好。该间接免疫荧光法为SARS-CoV抗体的普通实验室检测提供了快速安全的诊断方法。

关键词： SARS冠状病毒 N蛋白重组细胞株免疫荧光

来源：评论

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