检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 170-171页

作者：蒋宝贵何静褚宸一张泮河赵秋敏詹琳杨红孙毅曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

莱姆病是由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi，又称莱姆病螺旋体）引起的重要的动物疫源性疾病。伯氏疏螺旋体的分子遗传学研究缺乏相关载体，遗传学转化异常困难，因此对于伯氏疏螺旋体致病因子的研究进展缓慢。伯氏疏螺旋体具有较... 详细信息

莱姆病是由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi，又称莱姆病螺旋体）引起的重要的动物疫源性疾病。伯氏疏螺旋体的分子遗传学研究缺乏相关载体，遗传学转化异常困难，因此对于伯氏疏螺旋体致病因子的研究进展缓慢。伯氏疏螺旋体具有较大的遗传差异性，如果在动物实验中采用活体成像技术便可直接观察病原体在小鼠体内的分布、迁移和定植规律，

关键词：伯氏疏螺旋体穿梭载体动物模型体成像莱姆病螺旋体分子遗传学疫源性疾病

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针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第11期24卷 1076-1080页

作者：康晓平杨银辉刘洪李永强孙庆歌祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片,本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针,每种5条,长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型,摸索了合适的病毒基因处理与... 详细信息

为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片,本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针,每种5条,长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型,摸索了合适的病毒基因处理与扩增方法.将提取的病毒RNA先用DNaseⅠ处理,以去除掉其中的DNA分子,然后利用病毒属特异性引物进行反转录,以引导病毒基因组的合成,从而尽可能地减少宿主细胞基因成分的干扰.进行随机PCR扩增后将扩增产物与基因芯片进行杂交,分别出现了4条基孔肯亚病毒探针信号和5条黄热病毒的探针信号,说明所设计的检测探针具有较好的特异性,可用于这2种病毒的特异性检测.这种病毒基因样品的处理和扩增方法也为此基因芯片的临床应用奠定了基础.

关键词：病毒探针设计芯片检测

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西尼罗病毒Chin-01株基因组非编码区的序列测定及分析

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解放军医学杂志 2008年第7期33卷 829-832页

作者：李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对西尼罗病毒(WNV)Chin-01株基因组非编码区(UTR)序列进行测定,了解其与已报道毒株的序列差异及系统发育关系。方法采用5′和3′RACE法对Chin-01株病毒基因组的UTR进行RT-PCR扩增,测定扩增产物序列,采用DNAstar软件对该株及其他9株... 详细信息

目的对西尼罗病毒(WNV)Chin-01株基因组非编码区(UTR)序列进行测定,了解其与已报道毒株的序列差异及系统发育关系。方法采用5′和3′RACE法对Chin-01株病毒基因组的UTR进行RT-PCR扩增,测定扩增产物序列,采用DNAstar软件对该株及其他9株WNV的UTR进行序列同源性分析,同时构建了基于3′UTR的系统发育树,并用RNA structure软件预测其二级结构。结果Chin-01株基因组5′和3′UTR分别为96nt和630nt,序列同源性分析的结果表明,其5′UTR与其他9株的同源性均达到99%或100%,而3′区UTR与埃及Eg101株的同源性最高,达98·1%。5′UTR的起始核苷酸为AG,并含有一段与3′UTR互补的14nt序列。3′UTR的末端为CUOH,包含一段完全保守的5nt序列,以及三个保守的称为CS2、RCS2和CS1的基序。二级结构预测发现,Chin-01株5′UTR呈长茎环结构,3′UTR的3′端也可形成多个保守的茎环结构。结论Chin-01株与埃及Eg101株亲缘关系最为密切。

关键词：西尼罗病毒非翻译区序列分析蛋白质结构,二级

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狂犬病毒载体的构建与鉴定

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中国人兽共患病学报 2008年第11期24卷 1047-1051页

作者：刘忠钰袁慧君朱武洋姜涛陈水平于曼秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据。方法将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止-起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prM... 详细信息

目的构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据。方法将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止-起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prME基因分别克隆至pSAETOPO,然后将带有这两个基因的狂犬病毒全长cDNA切下并克隆至pcDNA3.1(+)载体。将获得的重组质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME转染细胞,分别观察辅助病毒对外源基因表达的影响。结果获得狂犬病毒载体质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME,经酶切分析和序列测定表明所构建克隆是正确的。pcSAE-GFP及pcSAE-ME转染细胞后,在辅助病毒存在下可表达相应外源基因。结论构建的狂犬病毒载体质粒可表达外源基因,为进一步获得表达外源基因的重组狂犬病毒奠定了基础。

关键词：狂犬病毒病毒载体 SAE株绿色荧光蛋白西尼罗病毒prME蛋白

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大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究

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军事医学科学院院刊 2008年第5期32卷 436-438页

作者：蔡昆包士中史晶刘昊高翔王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28... 详细信息

目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构。结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒。菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变。4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%。电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性。结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础。

关键词：大肠杆菌细菌菌蜕噬菌体PhiX174裂解基因E 温度控制

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呼肠病毒感染实验动物致病性的研究进展

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军事医学科学院院刊 2008年第4期32卷 389-391页

作者：左庭婷端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

呼肠病毒属于呼肠病毒科正呼肠病毒属,是无包膜、有双层蛋白衣壳、分节段的双股RNA病毒,被广泛用于感染动物模型,研究无包膜病毒的致病机制。本文综述了呼肠病毒感染实验动物的致病性研究进展。

关键词：呼肠病毒实验动物致病性

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1株辛德毕斯病毒基因组编码区序列测定及分析

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军事医学科学院院刊 2008年第1期32卷 8-10页

作者：张雨司炳银杨银辉祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:对保存的一株辛德毕斯病毒基因组编码区序列进行测定,阐明其与已报道毒株序列的差异。方法:对辛德毕斯病毒基因组编码区进行分段RT-PCR扩增,将扩增产物直接进行测序,采用DNA Star软件将分段测序结果拼接得到全长编码区序列。结果... 详细信息

目的:对保存的一株辛德毕斯病毒基因组编码区序列进行测定,阐明其与已报道毒株序列的差异。方法:对辛德毕斯病毒基因组编码区进行分段RT-PCR扩增,将扩增产物直接进行测序,采用DNA Star软件将分段测序结果拼接得到全长编码区序列。结果与结论:此株辛德毕斯病毒基因组编码区全长11 322 nt,编码3 774个氨基酸,其中非结构基因长7 539 nt,编码4种非结构蛋白NSp1,NSp2,NSp3,NSp4;结构基因全长3 735 nt,编码5种结构蛋白E1,E2,E3,6K和C蛋白。非结构基因和结构基因之间有48 nt的不翻译连接区。序列同源性分析结果表明,此株病毒与HRsp株的同源性最高,两者核苷酸序列同源性为99.7%,氨基酸序列同源性为99.6%。此株病毒与HRsp株病毒亲缘性最高,同属于南非-欧洲组。

关键词：辛德毕斯病毒编码区序列测定

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含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

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军事医学科学院院刊 2008年第2期32卷 101-105页

作者：于学东秦成峰姜涛陈水平邓永强刘然赵慧李晓峰朱武洋于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：构建含有海肾萤光素酶（Renilla luciferase，***）报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子。为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段。方法：利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型... 详细信息

目的：构建含有海肾萤光素酶（Renilla luciferase，***）报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子。为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段。方法：利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子（DENRP），用顺式水解酶元件（cis-acting hydrolase element，CHYSEL）技术将***报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区，构建含有R．1uc报告基因的复制子（***2A-RP）。将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后，经电穿孔转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光、***和***检测技术对复制子进行鉴定。结果：所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子，均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白。***2A-RP可持续表达外源***报告基因21d，在转染后24～96h ***荧光信号呈线性增强。在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化。结论：获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子，为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础。

关键词：登革病毒复制子海肾萤光素酶

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脂肪来源间充质干细胞研究进展

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军事医学科学院院刊 2008年第1期32卷 81-83页

作者：于婷陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

间充质干细胞最早发现于骨髓中,脂肪来源的间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性和分化潜能,并且具有很多优势,有望成为组织工程和基因治疗的新型靶细胞,具有广阔的应用前景。本文综述了脂肪来源间充质干细胞的分离培养... 详细信息

间充质干细胞最早发现于骨髓中,脂肪来源的间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性和分化潜能,并且具有很多优势,有望成为组织工程和基因治疗的新型靶细胞,具有广阔的应用前景。本文综述了脂肪来源间充质干细胞的分离培养、生物学特性及其应用等进展,并对其研究前景进行了探讨。

关键词：间充质干细胞脂肪来源间充质干细胞组织工程

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炭疽保护性抗原与炭疽毒素受体结合特征分析

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军事医学科学院院刊 2008年第5期32卷 428-431页

作者：张军赵剑董大勇宋小红徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析。方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化。采用Binding-ELISA方法,通过测定... 详细信息

目的:建立检测炭疽毒素保护性抗原(PA)与靶细胞受体(ATR)结合能力的Binding-ELISA方法,并对两者结合特征进行分析。方法:以ELISA实验为基础,建立PA与ATR结合的体外模型,并对实验中的反应条件进行优化。采用Binding-ELISA方法,通过测定不同包被蛋白、不同二价阳离子条件下的D450以及相对饱和度等参数,分析PA与两种ATR的结合特征。结果与结论:以重组PA作为包被抗原时灵敏度更高,包被浓度为2μg/ml;二价阳离子浓度为5 mmol/L。两种受体与PA的亲和力不同,其中CMG2与PA的结合能力更强;并且两者与PA结合时离子依赖特征不同,PA与TEM8的结合能力在Mn2+存在时最强,PA与CMG2的结合能力在Ca2+存在时最强。这一结果与国外报道相符,进一步说明Binding-ELISA方法用于定性分析炭疽毒素与其受体结合能力的可行性,为评价以抑制PA与ATR结合为靶点的毒素抑制剂提供了有效的手段。

关键词：炭疽毒素炭疽保护性抗原炭疽毒素受体酶联免疫吸附试验

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