检索结果-内蒙古大学图书馆

四川动物 2008年第2期27卷 165-166页

作者：虞以新军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

2006年9月在法国南部佩皮里昂的马力布度假村发现马力布毛蠓新种Dasyhelea(Pseudocu licoides)mali-bui ***.和尖突柱蠓Stilobezzia oxiana Remm,1980一新纪录,本文分别予以记述。

关键词：蠓新种毛蠓柱蠓

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伯氏考克斯体新桥株感染BALB/c小鼠的实验研究

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军事医学科学院院刊 2008年第5期32卷 421-423页

作者：熊小路陈梅玲邢洪光王锡乐温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:分析伯氏考克斯体新桥株对BALB/c小鼠的感染性。方法:用伯氏考克斯体新桥株腹腔接种感染小鼠,于感染后7,14,21,28 d分别处死小鼠,采用伯氏考克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠肝、脾、肺组织样本中伯氏考克斯体含量。采用间接... 详细信息

目的:分析伯氏考克斯体新桥株对BALB/c小鼠的感染性。方法:用伯氏考克斯体新桥株腹腔接种感染小鼠,于感染后7,14,21,28 d分别处死小鼠,采用伯氏考克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠肝、脾、肺组织样本中伯氏考克斯体含量。采用间接免疫荧光法检测感染小鼠血清特异性抗体水平。结果:感染后28 d内,小鼠肝、脾、肺组织中均检出大量伯氏考克斯体,第7天检出量最高,脾的含量显著高于肝和肺,肝的含量显著高于肺。随着感染时间延长,伯氏考克斯体检出量呈下降趋势,但血清特异性抗体水平则不断升高。结论:伯氏考克斯体新桥株为强毒株,可以引起BALB/c小鼠较长时间的稳定感染;BALB/c小鼠可以用作伯氏考克斯体感染模型。

关键词：伯氏考克斯体 BALB/c小鼠实时定量PCR

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乳杆菌电转化的研究进展

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军事医学科学院院刊 2008年第6期32卷 590-593页

作者：曹晓梅张虎成李曼陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

乳杆菌在食品、工业、微生物学等领域发挥着重要作用,作为益生菌,既可向体外生物反应器方向开发,又可作为潜在疫苗的抗原递送载体。由于乳杆菌属革兰阳性菌,细胞壁厚,重组质粒电转化效率低,甚至不能实现转化,影响了它作为基因工程受体... 详细信息

乳杆菌在食品、工业、微生物学等领域发挥着重要作用,作为益生菌,既可向体外生物反应器方向开发,又可作为潜在疫苗的抗原递送载体。由于乳杆菌属革兰阳性菌,细胞壁厚,重组质粒电转化效率低,甚至不能实现转化,影响了它作为基因工程受体菌的应用。笔者研究了近年来有关乳杆菌的电转化方案,总结了影响电转化效率的因素。如细胞壁预处理、电转缓冲液、电击参数、培养基、孵育时间以及菌体密度、质粒用量、热击条件等,并根据自己的试验结果提出优化方案,为乳杆菌在疫苗及生物反应器等领域的遗传开发研究提供较全面的借鉴。

关键词：乳杆菌属电转化转化效率

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Ⅱ型志贺样毒素B亚单位的重组表达及其受体结合活性

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中国生物工程杂志 2008年第10期28卷 23-27页

作者：包士中史晶蔡昆荫俊王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中重组表达Ⅱ型志贺样毒素B亚单位(Stx2B),并对其表达形式和受体结合活性进行分析。方法:PCR方法从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7中钓取Stx2B编码基因,利用基因克隆技术构建重组大肠杆菌pET-stx2B/BL21,IPTG诱导目的蛋... 详细信息

目的:在大肠杆菌中重组表达Ⅱ型志贺样毒素B亚单位(Stx2B),并对其表达形式和受体结合活性进行分析。方法:PCR方法从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7中钓取Stx2B编码基因,利用基因克隆技术构建重组大肠杆菌pET-stx2B/BL21,IPTG诱导目的蛋白高效表达并对表达的包涵体进行变性和复性处理,离子交换层析纯化蛋白。通过SDS-PAGE变性和非变形蛋白电泳,分析重组Stx2B的表达形式,并利用Hela细胞结合模型,评价重组Stx2B与细胞受体的结合活性。结果:构建的重组大肠杆菌pET-stx2B/BL21能高效表达Stx2B,经变性、复性及离子交换层析操作,获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE变性和非变形蛋白电泳分析显示,重组Stx2B以二聚体形式存在,单体之间通过二硫键相连。细胞结合试验显示,重组Stx2B与Hela细胞具有特异结合活性。结论:成功构建表达Stx2B的基因工程菌,Stx2B的受体结合活性不依赖于五聚体形式。

关键词： Ⅱ型志贺样毒素B亚单位重组表达受体结合活性

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登革1型病毒广州2006年分离株的基因组特征与进化分析

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解放军医学杂志 2008年第9期33卷 1055-1058页

作者：韩剑峰于曼陈水平姜涛李晓峰秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对2006年分离自广州登革热患者血清的4株登革1型病毒(GZ57/06、GZ63/06、GZ69/06和GZ128/06)进行全基因组序列测定,并同其他毒株序列进行比对分析,以了解其基因组序列特征及可能的传播来源。方法将登革1型病毒分离株基因组分为9个... 详细信息

目的对2006年分离自广州登革热患者血清的4株登革1型病毒(GZ57/06、GZ63/06、GZ69/06和GZ128/06)进行全基因组序列测定,并同其他毒株序列进行比对分析,以了解其基因组序列特征及可能的传播来源。方法将登革1型病毒分离株基因组分为9个片段进行RT-PCR扩增,5′与3′末端序列采用RACE法扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序。通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析。结果测序获得的4株广州登革1型病毒基因组全长均为10735核苷酸(nt),编码3393个氨基酸。5′和3′端各有一段非编码区,长度分别为94nt和462nt。4株病毒的编码区与非编码区核苷酸及氨基酸序列存在一些差异,其中GZ57/06、GZ63/06和GZ69/06毒株的基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均在99%以上,而GZ128/06株变异较其他3株大,编码区差异尤其明显。序列比对分析表明,GZ57/06、GZ63/06和GZ69/06毒株均与泰国2001年分离毒株ThD1/0049/01和ThD1/0102/01同源性最高,而GZ128/06毒株与缅甸1998年分离毒株***.r31987/98同源性最高。这些新分离毒株与东南亚毒株属于同一基因型。结论新分离毒株可能来自泰国等东南亚国家和地区,不同毒株表型差异可能与其基因组特征具有密切关系。

关键词：登革热病毒基因组,病毒序列分析进化,分子

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志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应

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军事医学科学院院刊 2008年第6期32卷 537-540页

作者：包士中史晶蔡昆侯晓军高翔刘昊荫俊王慧军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗... 详细信息

目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。

关键词：志贺毒素B亚单位模拟表位免疫保护效应

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噬菌体治疗细菌性疾病的研究进展

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军事医学科学院院刊 2008年第2期32卷 172-174,178页

作者：温占波李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

噬菌体自发现之初就被人们应用于治疗各种细菌感染。近年来由于各种耐药菌株的出现,新抗生素的研制困难重重,研究噬菌体用于治疗细菌性疾病又重新受到重视。本文综述了近年来噬菌体治疗方面的研究进展。

关键词：噬菌体治疗细菌性疾病

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基孔肯雅病毒中和表位的筛选及表达

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军事医学科学院院刊 2008年第5期32卷 424-427页

作者：安小平李博侯利华李建民徐俊杰李冰陈薇童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：寻找基孔肯雅病毒中和表位，并将其表达为重组融合蛋白。方法：对噬菌体展示12肽库进行了生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆，使用ELISA方法筛选并鉴定阳性克隆，分析阳性克隆的DNA序列，将其翻译成氨基酸序列进行同源性比较。将其中... 详细信息

目的：寻找基孔肯雅病毒中和表位，并将其表达为重组融合蛋白。方法：对噬菌体展示12肽库进行了生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆，使用ELISA方法筛选并鉴定阳性克隆，分析阳性克隆的DNA序列，将其翻译成氨基酸序列进行同源性比较。将其中一个表位连同M13噬菌体PⅢ蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ的编码序列用PCR技术扩增后插入原核表达载体pQE30，用IPTG诱导融合蛋白表达。结果与结论：从经过3轮淘洗的噬菌体中随机挑选123个克隆，从中筛选到20个阳性克隆，其中包含7种不同的氨基酸序列，这些序列缺乏同源性，表明该单抗表位应为构象型表位。在室温培养条件下成功地在大肠杆菌周质腔表达了一种可溶性的表位融合蛋白，经亲和层析得到了纯化的表位融合蛋白。

关键词：基孔肯雅病毒中和抗体噬菌体展示肽库中和表位

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CIP29对布鲁氏菌侵袭和巨噬细胞凋亡影响的初步研究

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免疫学杂志 2008年第1期24卷 106-110页

作者：吴小艳赵忠鹏张良艳王希良军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究CIP29在细胞中的定位及其对巨噬细胞凋亡和布鲁氏菌侵袭的影响。方法通过RT-PCR方法从细胞中获取CIP29基因片段,并将其亚克隆入质粒载体pET28a和eGFP,构建原核表达质粒pET28a-CIP29和真核表达质粒eGFP-CIP29,原核表达质粒用于制... 详细信息

目的研究CIP29在细胞中的定位及其对巨噬细胞凋亡和布鲁氏菌侵袭的影响。方法通过RT-PCR方法从细胞中获取CIP29基因片段,并将其亚克隆入质粒载体pET28a和eGFP,构建原核表达质粒pET28a-CIP29和真核表达质粒eGFP-CIP29,原核表达质粒用于制备CIP29抗体,用于后续CIP29蛋白的检测;真核表达质粒用于转染巨噬细胞,通过荧光显微镜、Western blot技术检测CIP29在真核细胞中的表达及定位,Annexin-Ⅴ/PI双染检测其对细胞凋亡的影响,布鲁氏菌侵袭试验检测其对布鲁氏菌入侵巨噬细胞的影响。结果获得了CIP29基因,构建的表达质粒pET28a-CIP29和eGFP-CIP29经测序和双酶切鉴定,证实重组表达质粒构建成功。将pET28a-CIP29转化BL21中,CIP29蛋白得到了表达,制备了特异性抗体,经ELISA检测效价达1∶25600。进一步构建真核表达质粒eGFP-CIP29,转染细胞后,荧光显微镜观察结果显示其定位于核内,但也有部分扩散之胞质中,CIP29可诱导细胞的凋亡,但对布鲁氏菌侵袭的影响无统计学意义。结论本研究获得CIP29重组蛋白,并制备了其多克隆抗体,CIP29瞬时高表达诱导巨噬细胞凋亡。

关键词：巨噬细胞 CIP29 布鲁氏菌凋亡

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一株粘质沙雷氏菌烈性噬菌体污水分离及特性

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微生物学报 2008年第4期48卷 498-502页

作者：于龙温占波杨文慧李娜王洁鹿建春李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

【目的】以粘质沙雷氏菌(8039)为宿主菌从医院污水中分离噬菌体并对其基本生物学特点进行研究。【方法】四步法污水分离噬菌体;单、双层平板噬菌斑实验筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态;纯化后2%磷钨酸染色电镜观察;手工法提取噬菌体核... 详细信息

【目的】以粘质沙雷氏菌(8039)为宿主菌从医院污水中分离噬菌体并对其基本生物学特点进行研究。【方法】四步法污水分离噬菌体;单、双层平板噬菌斑实验筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态;纯化后2%磷钨酸染色电镜观察;手工法提取噬菌体核酸酶切后琼脂糖凝胶电泳分析;利用双层平板噬菌斑实验测定最佳感染复数和完成一步生长实验。【结果】从医院污水中成功分离出粘质沙雷氏菌烈性噬菌体一株(SM701),该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部,头径约64nm,无囊膜,有一长尾,无收缩尾鞘,尾长约143nm;基因组核酸能被双链DNA内切酶BamHⅠ及HindⅢ切开,大小约57kb;噬菌斑圆形透明,直径1mm左右(培养12h),边界清楚;当感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10时,子代噬菌体滴度较高;按照一步生长实验结果绘制出一步生长曲线,可知感染宿主菌的潜伏期是约为30min,爆发期约100min,平均爆发量约为63。【结论】按照国际病毒分类委员会分类标准,该噬菌体属于长尾噬菌体科(siphoviridae)烈性噬菌体,按照Bradley和Ackermann形态分类法属于B1亚群;噬菌斑与周围红色细菌生长区,颜色差异明显,非常便于观察和计数;噬菌体头部大小和形态与呼吸道病毒中的呼肠病毒和腺病毒最为接近;国内尚未见粘质沙雷氏菌噬菌体相关报道。

关键词：粘质沙雷氏菌噬菌体分离生物学形态学

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