检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2007年第4期47卷 673-676页

作者：蔡昆王慧包士中史晶侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱... 详细信息

以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性。结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白。荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高。这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料。

关键词：狂犬病毒单链二硫键稳定抗体表达

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中国大林姬鼠携带Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征分析

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中华流行病学杂志 2007年第5期28卷 482-486页

作者：张文义江佳富姚昆吴晓明左曙青詹琳褚宸一赵秋敏张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林... 详细信息

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林姬鼠肺标本JilinAP06中分别扩增出长度383 bp（M基因）和1696 bp（S基因）大小的目的eDNA片段,其S基因全长由1696个核苷酸组成,完整的开放阅读框从37位核苷酸至1323位核苷酸,共1287个核苷酸,编码429个氨基酸的蛋白。JilinAP06 S基因与1378、Liu株同源性最高,与H5株同源性次之,与AP63、AP61和AP1371同源性为91．0%～91．7%,与76．118同源性为81．0%。S全序列基因推导的氨基酸序列与其他汉坦病毒已知序列比较显示：JilinAP06与AP1371同源性最高（98．4%）,与AP61同源性为98．1%,与AP63和Liu、B78和H5株同源性为97．2%～97．9%,与76-118同源性为95．1%。系统发育分析结果显示：JilinAP06与Amur类汉坦病毒构成一个相对独立的分支。M基因片段同源性比较和系统发育分分析结果与基于S基因全长得到的结果一致.结论中国大林姬鼠存在Amur类病毒，大林姬鼠很可能为Amur类病毒的自然宿主和人群Amur类病毒感染的重要来源。

关键词：汉坦病毒 Amur病毒大林姬鼠

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衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

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南方医科大学学报 2007年第1期27卷 31-34,37页

作者：朱武洋秦鄂德于曼秦成峰于学东军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒。方法在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋... 详细信息

目的制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒。方法在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒。结果序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变。结论成功制备衣壳蛋白缺失突变病毒,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础。

关键词：登革病毒感染性全长cDNA克隆缺失突变病毒

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HSP65-MUC1 VNTR_2融合蛋白的表达、纯化及其抗肿瘤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1014-1016,1024页

作者：郑玉玲江华王希良姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-M... 详细信息

目的:通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白、鉴定和纯化,并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法:通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因,以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列,构建原核重组表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中利用IPTG诱导表达;利用单克隆抗体(mAb)进行Westernblot鉴定,以Q柱和凝胶过滤纯化获得纯化蛋白。通过建立转染人MUC1基因的B16黑色素瘤小鼠肿瘤模型,在C57BL/6小鼠体内研究HSP65-MUC1VNTR2融合蛋白的肿瘤生长抑制活性。结果:获得的结核分支杆菌HSP65基因和人MUC1基因VNTR区的2个重复片段,经测序证明分别与GenBank中结核杆菌HSP65基因和人MUC1基因的VNTR完全相符;构建的原核表达载体HSP65-MUC1VNTR2-pET28a(+)可稳定的可溶性表达HSP65-MUC1VNTR2蛋白;经Q柱和凝胶过滤纯化,纯化的目的蛋白纯度达95%以上;利用鼠抗人MUC1mAb对表达蛋白进行验证,结果阳性;小鼠肿瘤预防免疫实验表明,实验组小鼠抑瘤率大于对照组,且具有明显性差异。结论:成功地利用原核表达系统实现了对HSP65-MUC1VNTR2蛋白的可溶性表达,并对其体内预防实验进行了初步研究,证明该融合蛋白能明显抑制表达MUC1的肿瘤生长。为进一步评价其作为肿瘤疫苗可能性的研究打下了基础。

关键词：热休克蛋白65 MUC1 VNTR 纯化预防免疫

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多重实时PCR检测三种呼吸道病毒

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第9期27卷 856-859页

作者：赵海龙姜涛邓永强陈水平李晓峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线... 详细信息

目的建立多重实时PCR检测体系可同时快速检测引起人呼吸道感染的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SAPS冠状病毒(SARS-CoV)。方法通过对PCR反应条件的优化,建立了同时检测IAV、RSV和SARS-CoV的多重实时PCR方法。结果经熔解曲线分析,证实了该法可同时或分别检测3种重要呼吸道病毒。检测灵敏度分别为10^(0.7)TCID_(50)/ml、1 TCID_(50)/ml和10^(-0.5) TCID_(50)/ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒(包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型)进行扩增,均未检测出扩增产物。此种方法可在4h内完成。结论建立的多重实时PCR检测方法适用于3种重要呼吸道病毒的快速检测。

关键词：多重实时PCR 甲型流感病毒呼吸道合胞病毒 SARS冠状病毒

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用DREAM技术纠正人工合成基因中的突变

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中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 86-92页

作者：朱晓峰陈锦辉张昕安小平周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的:介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法:根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列,再以此氨基酸序列进行逆翻译,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变(silent mutations),这些突变中包含大量的限制性内... 详细信息

目的:介绍一种简便、有效的定点突变技术。方法:根据突变位点附近的DNA序列推导出氨基酸序列,再以此氨基酸序列进行逆翻译,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变(silent mutations),这些突变中包含大量的限制性内切酶位点,选择合适的酶切位点,自酶切位点向两侧合成引物(其中仅一个引物含有突变),用这些引物扩增两侧DNA片段(其中仅一个片段含有突变),然后将这两个片段以相应的内切酶切割后融合即可完成定点突变。结果:用该方法成功地纠正了人工合成的可溶性组织因子基因中两个碱基的缺失,校正了阅读框架,获得了预期的目的基因。结论:该方法简便、有效,突变成功率高,适合于在一般分子生物学实验室使用;该方法能避免了因多轮PCR和合成长引物导致突变的可能性,可作为一种定点突变的替代方法。这种改进的PCR定点诱变技术我们称之为“设计限制酶辅助突变”(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)。

关键词：定点突变聚合酶链反应设计限制酶辅助突变

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TAT蛋白转导域:蛋白质治疗的新曙光

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第7期23卷 519-524页

作者：秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

TAT蛋白转导域是源自人类免疫缺陷病毒Tat蛋白的一段碱性氨基酸多肽,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,在药物转运和疾病治疗等领域有着巨大的应用潜力.TAT蛋白转导域首先通过电荷相互作用... 详细信息

TAT蛋白转导域是源自人类免疫缺陷病毒Tat蛋白的一段碱性氨基酸多肽,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,在药物转运和疾病治疗等领域有着巨大的应用潜力.TAT蛋白转导域首先通过电荷相互作用吸附于细胞膜,然后通过脂筏介导的巨胞饮作用进入细胞.随着体外研究的不断成熟,应用TAT蛋白转导域治疗人类肿瘤、卒中、炎症等疾病的动物模型也获得了成功,TAT蛋白转导域进入临床指日可待.

关键词：蛋白转导域蛋白质治疗巨胞饮应用

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中国蚋科一新记录(双翅目：蚋科)

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寄生虫与医学昆虫学报 2008年第4期15卷 262页

作者：聂维忠李俊成李德昕王海军安继尧虞以新秦皇岛出入境检验检疫局秦皇岛066002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

2005年6月16日,在河北省秦皇岛市采到蚋科中国新记录种Simulium (Simulium) flavidum Rubtsov,1947。标本保存于军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：保存生物学河北军事医学昆虫双翅目中国蚋科

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中国蚋科一新记录(双翅目:蚋科)(英文)

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寄生虫与医学昆虫学报 2008年第4期15卷 262-262页

2005年6月16日,在河北省秦皇岛市采到蚋科中国新记录种Simulium (Simulium) flavidum Rubtsov,1947。标本保存于军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：蚋科蚋属新记录种中国

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新型阳离子基因传递载体PEI-PBLG的细胞转染研究

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生物工程学报 2007年第2期23卷 229-234页

作者：尉继征林磊熊伟祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性... 详细信息

对新型阳离子聚合物PEI（10kD）-PBLG进行研究，重点考察其基因转染效率与细胞毒性，探讨其作为基因载体的可能性。通过粒径分析及扫描电镜（SEM）观察PEI（10kD）-PBLG与质粒pEGFP自组装形成的颗粒形态及粒径，预测其进入细胞的可能性。使用MTT比色法分析PEI（10kD）-PBLG、PEI（25kD）．PBLG、PEI（10kD）和PEI（25kD）的细胞毒性差异。选用表达增强型绿色荧光蛋白的质粒pEGFP作为报告基因模型，将其与PEI（10kD）-PBLG自组装后，分别转染真核细胞株Hela、COS-7、Vero-E6和ECV304，应用流式细胞术检测细胞转染效率，并比较了血清、缓冲液、细胞谱等多种因素对基因转染效率的影响。PEI（10kD）-PBLG可包裹质粒形成粒径100—120nm的纳米复合物，适合介导质粒进入细胞。该纳米粒复合物对转染缓冲液的敏感度较低，并能够在10％血清存在的条件下，转染全部实验用细胞株，尤其对Hela的转染效率最高，其次是COS-7、Vero-E6和ECV304；其中PEI-PBLG（10kD）／pEGFP复合物转染Hela细胞的比率为45．02％，高于Pri（10kD）／pEGFP的29．16％；PEI（10kD）-PBLG的细胞毒性作用显著低于PEI（25kD）、PEI（10kD）和PEI（25kD）-PBLG。新型阳离子多聚物PEI（10kD）-PBLG在提高PEI介导的基因转染效率的同时降低了其细胞毒性，提高了生物相容性，有望成为基因转移的有效载体。

关键词：聚乙烯亚胺聚谷氨酸基因传递转染效率细胞毒性

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