检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 127-130页

作者：谢亮王俊虹康琳高姗王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段。方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-H is,转化***21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接EL... 详细信息

目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段。方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-H is,转化***21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/B Hc的抗原性。结果:表达工程菌BL21/pETH is-BHc于37℃经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h后,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的24%。经过N i-NTA亲和层析柱一步纯化,rBoNT/B Hc的纯度可达96%以上。W estern印迹和间接ELISA均显示其具有良好的抗原性。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/B Hc片段,并可被抗天然BoNT/B马血清所识别,为建立快速检测方法和制备相应的抗体及亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：肉毒毒素B 克隆表达纯化抗原性

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鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究

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中国人兽共患病学报 2006年第3期22卷 209-211页

作者：裴杰萍朱虹何君檀华张美玲端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在***中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原... 详细信息

目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在***中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性。结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础。

关键词：鹦鹉热衣原体 HSP60 克隆

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应用O-抗原基因簇特异PCR对假结核耶尔森菌分型

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军事医学科学院院刊 2006年第5期30卷 406-409页

作者：王效义李艳君戴二黑郭兆彪宋亚军周冬生杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：依据假结核耶尔森菌O-抗原基因簇多态性，应用PCR基因分型方法替代传统的血清分型方法，时本室保存的31株假结核耶尔森菌进行分型研究。方法：通过比较假结核耶尔森菌与已知血清型假结核耶尔森菌标准参考株O-抗原基因簇的差异，... 详细信息

目的：依据假结核耶尔森菌O-抗原基因簇多态性，应用PCR基因分型方法替代传统的血清分型方法，时本室保存的31株假结核耶尔森菌进行分型研究。方法：通过比较假结核耶尔森菌与已知血清型假结核耶尔森菌标准参考株O-抗原基因簇的差异，确定实验株的血清型。结果：应用PCR基因分型方法替代传统的血清分型方法，对本室保存的31株假结核耶尔森菌进行了成功的血清分型，血清组Ⅰ-Ⅴ与血清型0：1～0：5存在着对应关系。结论：应用PCR方法对假结核耶尔森菌进行血清分型，方法简单、迅速，同时不需要制备特异抗血清，是一种理想的血清分型替代方法。

关键词：假结核耶尔森菌血清分型聚合酶链反应 O-抗原基因簇多基因族

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E型肉毒神经毒素(BoNT)基因序列分析及其B细胞表位预测

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军事医学科学院院刊 2006年第5期30卷 419-423页

作者：刘艳华贾扬王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：分析不同E型肉毒梭菌的肉毒神经毒素（BoNT）基因序列的同源性，预测E型BoNT的B细胞表位。方法：用LaserGene软件中的MegAlign程序比对GenBank中5株不同E型肉毒梭菌的BoNT基因序列；分别利用BioSun和LaserGene软件分析E型BoNT的... 详细信息

目的：分析不同E型肉毒梭菌的肉毒神经毒素（BoNT）基因序列的同源性，预测E型BoNT的B细胞表位。方法：用LaserGene软件中的MegAlign程序比对GenBank中5株不同E型肉毒梭菌的BoNT基因序列；分别利用BioSun和LaserGene软件分析E型BoNT的表位参数、蛋白质二级结构及氨基酸序列保守性，利用三维结构显示软件Cn3D，分析E型BoNT可能的B细胞表位的空间定位，进而预测E型BoNT的B细胞表位。结果：5个E型BoNT基因核酸序列同源性为97．2％-100％，氨基酸序列同源性为95％-100％；E型BoNT轻链中的62-78，111-127区段，重链中443-465，661-677，693～709，727-743，853-869，1093-1109，1128-1144，1163-1179区段最有可能是其B细胞优势表位。结论：我们利用不同分析软件，结合多参数综合预测出了E型BoNT的多个B细胞表位，为进一步鉴定E型BoNer的B细胞表位及其多表位疫苗的研究奠定了基础。

关键词：肉毒梭菌 E型肉毒神经毒素 B细胞表位

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基因芯片技术检测10种烈性RNA病毒

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解放军医学杂志 2006年第3期31卷 203-206页

作者：杨银辉杨瑞馥常国辉司炳银翟俊辉吕富双周东生韩伟国祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用基因芯片技术检测包括披膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼亚病毒科汉坦病毒属及SARS病毒等10种烈性RNA病毒。方法设计了甲病毒属的属保守区通用引物和黄病毒属的通用引物,与布尼亚病毒及SARS病毒的引物一起用于扩增靶... 详细信息

目的利用基因芯片技术检测包括披膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼亚病毒科汉坦病毒属及SARS病毒等10种烈性RNA病毒。方法设计了甲病毒属的属保守区通用引物和黄病毒属的通用引物,与布尼亚病毒及SARS病毒的引物一起用于扩增靶核酸。另外,在通用引物所能扩增的区域内设计每种病毒的特异引物,利用该引物通过PCR反应制备cDNA克隆探针,在判定其特异性后,制备氨基化探针。对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行了优化。结果核酸探针浓度为0·3μg/μl时,可获得杂交信号;在杂交液终浓度含20%甲酰胺、杂交60℃、1·5h的条件下,可分别获得以上10种病毒的特异杂交信号。利用多重PCR扩增靶序列时,可获得2种或4种混合病原体的特异性杂交信号。结论利用基因芯片技术检测病毒性病原体是可行的,关键在于设计合适的引物及探针序列。

关键词：寡核苷酸序列分析 RNA,病毒检测

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鹦鹉热嗜衣原体实时定量PCR检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2006年第8期22卷 701-703页

作者：王争强朱虹苏裕心何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(MOMP)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量PCR检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0&... 详细信息

目的建立一种简便、快速、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鹦鹉热嗜衣原体的快速检测。方法以主要外膜蛋白(MOMP)基因为靶序列设计特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机渗入法建立实时定量PCR检测方法。结果循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×102-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.989。该方法用于鹦鹉热嗜衣原体的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍。结论本研究建立的检测鹦鹉热嗜衣原体的实时定量PCR检测方法具有很高的特异性和敏感性,可以用于鹦鹉热嗜衣原体的检测。

关键词：鹦鹉热嗜衣原体实时定量PCR MOMP基因熔解曲线

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炭疽杆菌芽孢外壁胶原样蛋白(BclA)的多态性分析

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微生物学通报 2006年第1期33卷 100-104页

作者：李冠霖徐俊杰董大勇宋小红陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

炭疽杆菌芽孢外壁胶原样蛋白(Bc lA)是芽孢外壁发状菌丝的主要结构成分,也是芽孢的主要免疫原。从国内分离的3株炭疽杆菌中克隆出Bc lA基因并进行了序列分析,结果发现有2株(A16R和40048)的Bc lA与国外报道菌株长度不同,分别含有388个和... 详细信息

炭疽杆菌芽孢外壁胶原样蛋白(Bc lA)是芽孢外壁发状菌丝的主要结构成分,也是芽孢的主要免疫原。从国内分离的3株炭疽杆菌中克隆出Bc lA基因并进行了序列分析,结果发现有2株(A16R和40048)的Bc lA与国外报道菌株长度不同,分别含有388个和322个氨基酸,72个和50个GXX三氨基酸重复序列,5个和3个含21个氨基酸的(GPT)5GDTGTT重复序列(Bc lA重复)。另一株40022的Bc lA与国外报道的53169株完全一致,含有370个氨基酸,66个GXX重复,5个Bc lA重复。对我国炭疽杆菌Bc lA蛋白多态性的分析为进行炭疽杆菌的基因分型以及研究炭疽芽孢的免疫原性和致病机理打下基础。

关键词：炭疽杆菌 BclA蛋白多态性芽孢

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感染布氏杆菌后的THP-1细胞的蛋白质组学研究

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微生物学报 2006年第4期46卷 629-634页

作者：高永辉任昶应天翼王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室北京100071 北京朝阳医院北京100043 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了3... 详细信息

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了38个差异表达的蛋白质点。这些点经过胶内酶切后进行MALDI-TOF质谱鉴定,每个蛋白质点的肽质量指纹图谱都在人类的蛋白质组数据库中用Mascot进行检索后,发现这些差异表达的蛋白主要集中在结构蛋白,信号传导途径和物质代谢等领域,还有一些功能未知的蛋白。这一结果为研究布氏杆菌的感染与致病机制提供了方向,对深入探讨病原菌-宿主的相互作用模式具有参考价值。

关键词：布氏杆菌 THP-1细胞比较蛋白质组学双向电泳质谱

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干扰素系统与病毒的相互作用

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中国生物工程杂志 2006年第4期26卷 95-100页

作者：徐春娥陈薇军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

干扰素是最早发现的细胞因子之一,不同类型的IFN生物活性基本相同,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。病毒侵染细胞,诱导细胞产生IFN,IFN通过不同的作用机制启动宿主防御系统,激活酶和作用因子来拮抗病毒的侵染、复制和转录过程。正... 详细信息

干扰素是最早发现的细胞因子之一,不同类型的IFN生物活性基本相同,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。病毒侵染细胞,诱导细胞产生IFN,IFN通过不同的作用机制启动宿主防御系统,激活酶和作用因子来拮抗病毒的侵染、复制和转录过程。正因为干扰素在抗病毒防御过程中的关键作用,病毒已经衍生出了有效的方式能够成功的侵染宿主。病毒通过表达一些拮抗蛋白来干扰IFN的诱导产生、IFN的信号转导或效应蛋白的作用,从而终止干扰素的产生,并破坏干扰素诱导的其它因子的作用来逃避干扰素的作用。

关键词：干扰素系统病毒抑制干扰素拮抗

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布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究

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中国人兽共患病学报 2006年第6期22卷 493-497页

作者：李鹏罗德炎高永辉张松乐宋艳王希良军事医学科学院微生物流行病研究所三室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射... 详细信息

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词：布氏杆菌BCSP31 重组表达质粒免疫应答免疫保护

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