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军事医学 2018年第3期42卷 199-203页

作者：郝嘉男李晓峰徐炎鹏刘忠钰秦成峰安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞... 详细信息

目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞融合病毒Galveston株的全基因序列,通过体外基因合成的手段获得覆盖病毒全基因的3个DNA片段,并分别克隆至p BR002载体。利用限制性内切酶和T4连接酶将分片段基因组连入pACNR载体,最终获得含有pACNR的细胞融合病毒Galveston全长cDNA克隆。根据Galveston病毒株基因组序列和pBR002载体的序列,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物,用来对其连接处进行测序及鉴定。结果与结论构建了细胞融合病毒系统发生树,明确了其进化地位和其他黄病毒的同源性关系。构建出细胞融合病毒Galveston株全长cDNA克隆,经过酶切鉴定和序列测定表明所获得cDNA克隆为该病毒的全长序列。

关键词：黄病毒细胞融合病毒基因合成全长cDNA克隆

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寨卡病毒包膜E蛋白糖基化的生物学功能研究

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军事医学 2018年第12期42卷 930-934页

作者：程梦丽黄星耀邓永强李晓峰秦成峰安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的明确寨卡病毒包膜E蛋白第154位氨基酸糖基化的生物学功能。方法采用反向遗传学技术在寨卡病毒E蛋白引入单氨基酸突变N154Q,通过间接免疫荧光和增殖曲线对突变病毒的生物学特性进行鉴定,通过糖基化实验确定突变病毒E蛋白的糖基化水平... 详细信息

目的明确寨卡病毒包膜E蛋白第154位氨基酸糖基化的生物学功能。方法采用反向遗传学技术在寨卡病毒E蛋白引入单氨基酸突变N154Q,通过间接免疫荧光和增殖曲线对突变病毒的生物学特性进行鉴定,通过糖基化实验确定突变病毒E蛋白的糖基化水平,利用多种小鼠模型分析突变病毒的神经毒力和神经侵袭力。结果与野生型病毒相比,突变病毒能够在不同细胞系进行复制,但其在哺乳细胞上的增殖能力明显降低。更重要的是,突变病毒的乳鼠神经毒力及其对A129小鼠的神经侵袭力均显著减弱。结论寨卡病毒E蛋白第154位突变后无法进行糖基化修饰,进而影响其复制和对小鼠的致病性,具有重要的生物学功能。

关键词：寨卡病毒包膜蛋白糖基化致病性

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1-辛烯-3-醇对我国稻田区主要媒介蚊种的引诱作用研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2019年第2期26卷 88-91页

作者：李春晓阎婷董言德褚宏亮黄谊赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 湖南省疾病预防控制中心湖南长沙410005

1-辛烯-3-醇对蚊虫等吸血昆虫具有广谱引诱作用。本研究通过调配引诱剂中1-辛烯-3-醇的含量,测试不同1-辛烯-3-醇浓度下引诱剂对我国稻田区主要媒介蚊种三带喙库蚊和中华按蚊的现场引诱效果。目的在于提高现有捕蚊装置对三带喙库蚊和中... 详细信息

1-辛烯-3-醇对蚊虫等吸血昆虫具有广谱引诱作用。本研究通过调配引诱剂中1-辛烯-3-醇的含量,测试不同1-辛烯-3-醇浓度下引诱剂对我国稻田区主要媒介蚊种三带喙库蚊和中华按蚊的现场引诱效果。目的在于提高现有捕蚊装置对三带喙库蚊和中华按蚊的引诱能力。结果显示,6.3%~20%1-辛烯-3-醇粉剂均可显著提高捕获器对两种蚊虫的捕获效率,其中15%的浓度可提高三带喙库蚊和中华按蚊的捕获效果达3倍以上,引诱效果明显,具有良好应用前景。

关键词： 1-辛烯-3-醇三带喙库蚊中华按蚊引诱剂

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腺病毒41型感染致儿童腹泻一例临床表现及病毒基因组学特征分析

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中国病原生物学杂志 2018年第11期13卷 1236-1242页

作者：王媛媛裴广倩赵飞扬范航张湘莉兰何鮦鮦王云飞米志强安小平黄勇陈名武童贻刚安徽医科大学安徽合肥230000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院

目的针对消化道疑似感染病例,采用高通量测序技术筛查病原体,并测定其全基因组序列,阐明其基因组及进化特征。方法通过对原因不明腹泻患儿的粪便进行病原体高通量基因测序,然后拼接其全基因组序列,采用最大似然法(选择bootstrap为1000)... 详细信息

目的针对消化道疑似感染病例,采用高通量测序技术筛查病原体,并测定其全基因组序列,阐明其基因组及进化特征。方法通过对原因不明腹泻患儿的粪便进行病原体高通量基因测序,然后拼接其全基因组序列,采用最大似然法(选择bootstrap为1000)绘制主要抗原蛋白六邻体(hexon)、五邻体(penton)和纤维突蛋白(fiber)的进化树,分析进化特征;运用Recombination Detection Program version 4(RDP4)软件进行序列重组分析;使用软件CLC Genomics Workbench 9.0分析突变位点。结果患儿临床表现主要为发热、呕吐、腹泻伴抽搐,通过对腹泻患儿的粪便样品高通量测序,使用本实验室高通量测序数据分析程序检出41型腺病毒(HAdV-41)。进一步测序和拼接获得该病毒全基因组序列,其基因组全长34 138bp。序列比对显示该病毒核苷酸序列与已报道序列的最高同源性为99%(Human adenovirus 41isolate NIVD103),属于腺病毒F亚属。对该病毒六邻体、五邻体和纤维突蛋白进行进化分析,其六邻体与HAdV-41isolate NIVD103,HAdV-41isolate SH/2015/D16亲缘关系较近,五邻体与HAdV-41isolate NIVD103,HAdV-41isolate SH/2015/D16,HAdV41isolate SH/2015/D240,HAdV-41isolate SH/2015/D381亲缘关系较近,纤维突蛋白与五邻体相似;对全基因组序列进行重组分析,未发现明显的重组迹象,但突变分析显示引起此例腹泻的病毒株基因组有多处突变。结论从一例腹泻患儿粪便中检出的病原体为新的41型腺病毒,该病毒基因组与以往发现的41型腺病毒有较大差异,其流行态势、致病性及免疫原性值得关注。

关键词：高通量测序腺病毒41型六邻体五邻体纤维突

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大肠杆菌小RNASgrS单分子原位成像方法的建立

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科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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同时产碳青霉烯酶IMP与NDM的肺炎克雷伯菌和霍氏肠杆菌的分离及耐药性研究

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中华医院感染学杂志 2018年第21期28卷 3201-3206页

作者：梁丽琪冯娇蒋晓圆曾利军周冬生梁权辉殷喆江凌晓南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 佛山市第一人民医院检验科广东佛山528000

目的对分别分离自我国两家医院的多药耐药菌株肺炎克雷伯菌10677和霍氏肠杆菌128379进行耐药机制研究。方法通过16SrDNA鉴定菌种,PCR筛查菌株携带的耐药基因,应用改良Carba NP法检测菌株产碳青霉烯酶的类型,接合转移和电转化试验验证携... 详细信息

目的对分别分离自我国两家医院的多药耐药菌株肺炎克雷伯菌10677和霍氏肠杆菌128379进行耐药机制研究。方法通过16SrDNA鉴定菌种,PCR筛查菌株携带的耐药基因,应用改良Carba NP法检测菌株产碳青霉烯酶的类型,接合转移和电转化试验验证携带IMP和NDM的质粒是否具有可转移性,全基因组测序获得细菌所携带的所有质粒序列,应用RAST、BLAST等对序列进行生物信息学分析。结果 10677和128379两株菌均产B类酶,且均携带碳青霉烯酶基因blaIMP和blaNDM。全基因测序结果显示10677和128379各包含两个分别携带blaIMP-4和blaNDM-1的质粒,分别为p10677-IMP、p10677-NDM、p128379-IMP和p128379-NDM。其中p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-NDM可通过接合转移得到相应的接合子,p128379-IMP仅可通过电转的方式得到其电转化子。p10677-IMP和p128379-IMP均为IncN1型质粒,有三个共有的外源插入区,分别为包含有携带blaIMP-4的整合子In823b,IS1插入区,携带qnrS1基因的转座子Tn6292,除此外,p10677-IMP还包括携带fosA5基因的转座子Tn6412区以及IS26插入区。p10677-NDM和p128379-NDM为IncX3型质粒,包含两个共有的外源插入区,分别为ISKox3和携带blaNDM-1的耐药区,此外,p10677-NDM还包含一个独有的插入区ISEhe3。结论质粒p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-IMP、p128379-NDM分别介导10677和128379多药耐药且均具有转移性,是这两株耐药菌传播的重要载体。

关键词：肺炎克雷伯菌霍氏肠杆菌 blaIMP blaNDM 碳青霉烯酶质粒

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lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 412-420页

作者：樊红霞程思杰赵玲娜王科宇严锦刘思齐牛燕张绍庚任明姬杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 中国人民解放军第三0二医院肝胆外科中心北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-... 详细信息

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。

关键词：肝癌长链非编码RNA 增殖迁移侵袭

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基于荚膜多糖基因wzc可变区序列的肺炎克雷伯菌荚膜分型

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军事医学 2018年第8期42卷 637-640页

作者：王灿李璞媛苑鑫童贻刚高明明刘慧莹秦艳红米志强柏长青安徽医科大学解放军307临床学院北京100071 解放军307医院呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行... 详细信息

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行测序,与已发表的荚膜型或NCBI数据库上比对测序结果,最终确定荚膜型别。结果在实验室保存的231株肺炎克雷伯菌中,有210株可用此法进行荚膜分型(分型率为90. 9%);在分出的40种不同的荚膜型中,K47为最常见的荚膜型别,占17. 1%(36/210);其次为K15型,占10. 5%(22/210),其他为K1和K2型,分别占5. 7%(12/210)和6. 6%(14/210)。结论基于荚膜多糖基因wzc可变区序列进行分型的方法操作简单,更有利于不同实验室之间的结果相互比较。另外,K47、K15、K1和K2型为临床肺炎克雷伯杆菌常见的荚膜型。

关键词：肺炎克雷伯菌荚膜分型聚合酶链反应

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金黄色葡萄球菌肠毒素B精制免疫球蛋白对小鼠中毒模型的免疫救治效果研究

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生物技术通讯 2019年第6期30卷 756-761页

作者：韩慧李敏杨晓岚段跃强谷宏婧范铁炯李鑫杨鹏辉刘媛闫芳郑源强石艳春赵忠鹏内蒙古自治区分子生物学重点实验室内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特010058 病原微生物生物安全国家重点实验室军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 上海赛伦生物技术股份有限公司上海201707 解放军总医院第五医学中心北京100039 山西农业大学动物科技学院山西太谷030800

目的:研制金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)精制免疫球蛋白,即马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品,为SEB中毒的救治提供候选药。方法:利用传统的发酵和纯化工艺制备天然SEB纯品,并建立小鼠实验动物模型;利用分子克隆和蛋白质纯化技术,克隆、表达... 详细信息

目的:研制金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)精制免疫球蛋白,即马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品,为SEB中毒的救治提供候选药。方法:利用传统的发酵和纯化工艺制备天然SEB纯品,并建立小鼠实验动物模型;利用分子克隆和蛋白质纯化技术,克隆、表达、纯化重组SEB,加入适量弗氏佐剂充分乳化,免疫马匹,测定免疫马匹血清中和抗体效价后采血,分离血清,按照成熟的生产工艺制备治疗性抗体成品;对成品进行安全性检测及免疫救治效果评价。结果:纯化的天然SEB经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90%,对小鼠腹腔注射的半数致死量为0.5μg/kg;纯化的重组SEB表达量超过2 mg/mL,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90%,对小鼠腹腔注射的半数致死量为50μg/kg;免疫马匹血清中和抗体效价达2000 U/mL以上时,采血并制备F(ab′)2成品,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度在80%以上,中和抗体效价超过2500 U/mL;安全性符合现行《中国药典》要求;对SEB中毒动物模型有很好的免疫救治效果。结论:建立了SEB精制免疫球蛋白制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为SEB中毒的救治提供了候选药。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B 免疫球蛋白动物模型

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驻西非3例华人特殊疟疾病例诊疗体会

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传染病信息 2019年第5期32卷 466-471页

作者：涂波储芳许彪田园左曙青赵光宇郑俊杰陈威巍中国人民解放军总医院第五医学中心感染性疾病诊疗与研究中心北京100039 中国人民解放军总医院青少年肝病诊疗与研究中心北京100039 中国人民解放军总医院重症医学中心北京100039 中国人民解放军总医院卫勤部北京100039 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病学与病原微生物研究室长春130122 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

疟疾是对全球健康影响最大的传染病,西非是疟疾的高流行地区。本文通过报道我国援塞拉利昂军事医学专家组在塞拉利昂诊治的3例疟疾患者的经验和体会,以期为临床医生在诊治类似疾病时提供参考、借鉴。

关键词：疟疾疟原虫西非诊疗体会

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