检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 163-168页

作者：赵晓冬王翠娥吴小红李豫川曹军田严格李金凤军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的观察新疆出血热病毒感染乳鼠引起的病理学变化,建立病理学检测方法。方法分别经皮下与腹腔两种途径感染乳鼠,HE染色后观察引起的病理学变化,并分别应用免疫组化、RT-PCR以及透射电子显微镜对病毒抗原、核酸以及病毒粒子进行检测。... 详细信息

目的观察新疆出血热病毒感染乳鼠引起的病理学变化,建立病理学检测方法。方法分别经皮下与腹腔两种途径感染乳鼠,HE染色后观察引起的病理学变化,并分别应用免疫组化、RT-PCR以及透射电子显微镜对病毒抗原、核酸以及病毒粒子进行检测。结果乳鼠经两种不同途径接种病毒后均出现肝细胞的变性、坏死,并随时间延长逐渐加重。免疫组化可在肝细胞胞浆查见病毒抗原分布,透射电子显微镜下可在肝细胞胞浆内查见病毒粒子,RT-PCR可在心、肝、脾、肾以及脑组织内检测到病毒核酸。结论乳鼠对新疆出血热病毒敏感,经皮下与腹腔接种病毒均可致病;肝脏是新疆出血热病毒感染乳鼠的主要靶器官,主要病变为肝实质细胞的变性、坏死。结合免疫组化、透射电子显微镜与RT-PCR技术可对组织中的新疆出血热病毒进行检测与定位。

关键词：新疆出血热病毒乳鼠病理学

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抗炭疽保护性抗原人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第12期29卷 1069-1074页

作者：李冰李建民张军徐俊杰刘树玲任军张金龙付玲侯利华陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原（rPA）人-鼠嵌合抗体，并对其活性进行分析。方法RT—PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因，分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合... 详细信息

目的在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原（rPA）人-鼠嵌合抗体，并对其活性进行分析。方法RT—PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因，分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合抗体基因。将轻重链嵌合抗体基因克隆表达载体上，构建了嵌合抗体的双启动子表达载体pSecTag-5E1。将pSecTag-5E1转染CHO—dhfr（DG44）细胞，撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高氨甲蝶呤（MTX）的浓度，筛选表达量高的克隆，扩大培养，收集上清，并纯化，用纯化的嵌合抗体进行SDS—PAGE、Westernblot、抗原结合活性、体外细胞保护试验和动物试验。结果在MTX的浓度为5×10^-8mol／L时，获得稳定表达细胞株，表达量为18mg／L。结论成功在CHO—dhfr（DG44）细胞中表达了具有中和活性的抗rPA人-鼠嵌合抗体，为制备抗炭疽的被动免疫制剂奠定了良好的基础。

关键词：炭疽人-鼠嵌合抗体 CHO细胞

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两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒株的体外选择和鉴定

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药学学报 2010年第2期45卷 241-246页

作者：刘思扬庄道民董如华白丽李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并... 详细信息

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并鉴定了对这两种化合物耐药的HIV-1毒株。以HIV-1NL4.3作为亲代野生型病毒感染MT-2细胞,从两种化合物2倍的IC50开始,以细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,将病毒在含有浓度逐渐增加的药物的条件下连续传代,每代均在超过75%的MT-2细胞出现CPE后收集病毒培养上清液,然后取1mL接种新的MT-2细胞同时提高药物浓度为原来的2倍,共计传12代。JB25在第6代出现L100I(TTA→ATA)突变,在第12代又变成100M(ATA→ATG),L100M是不常见的突变形式,其对HIV NNRTIs耐药的影响未见报道,在第10代还同时出现了对NNRTIs高度耐药的Y188C(TAT→TGT)突变。JB26在第10代出现了L100I(TTA→ATA)突变。JB25和JB26在体外容易产生耐药性,而对JB26耐药比JB25要困难,导致耐药的主要基因突变发生在病毒逆转录酶基因的188和100位密码子。

关键词：人免疫缺陷病毒1型非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒突变

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结核分枝杆菌分泌蛋白EspB在RAW264.7细胞中的稳定表达

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微生物学报 2011年第7期51卷 984-990页

作者：李浩殷瑛董大勇张军付玲任军徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重... 详细信息

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blot方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。【结果】EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,成功获得了能够稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系。【结论】本试验利用脂质体介导的方法,将构建的重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1转染至Raw264.7细胞系中,获得了稳定表达EGFP-EspB融合蛋白的巨噬细胞系,为阐明EspB分泌蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用以及EspB与巨噬细胞蛋白之间的相互作用提供了研究平台。

关键词： EspB EGFP RAW264.7 稳定转染表达

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体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 431-437页

作者：焦丽燕鲍作义李韩平郭东星王铮庄道民李林耿庆茂刘永健刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体... 详细信息

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量〉1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.

关键词：原代HIV-1耐药毒株耐药突变复制动力学

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应用细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒药物

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中国药理学与毒理学杂志 2009年第5期23卷 411-416页

作者：庄道民刘思扬董如华李国跃李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨采用已建立的细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物的可靠性。方法以齐多夫定为阳性对照,使用HIV-1急性感染系统(MT-4/HIV-1ⅢB)、HIV-1耐药性毒株系统(MT-4/3TC耐药株)、HIV-1慢性感染系统(H9/HIV-1ⅢB)和HIV-1临床分离株感... 详细信息

目的探讨采用已建立的细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物的可靠性。方法以齐多夫定为阳性对照,使用HIV-1急性感染系统(MT-4/HIV-1ⅢB)、HIV-1耐药性毒株系统(MT-4/3TC耐药株)、HIV-1慢性感染系统(H9/HIV-1ⅢB)和HIV-1临床分离株感染系统(PBMC/HIV-1GX02),分别测定药物的细胞毒性和抗HIV-1活性,计算药物的半数细胞毒性浓度(TC50)、半抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)。同时对4种药物DPC961、牛膝多糖、艾乃吉1号和痰热清注射液进行了抗HIV活性检测。结果测定了齐多夫定在4种细胞-病毒系统的TC50,IC50和TI与文献报道相近。DPC961在4种细胞/病毒培养系统的TI分别为979,5348,3912和2745;牛膝多糖分别为323,223,2777和173;艾乃吉1号仅在MT-4/HIV-1ⅢB模型上T1为2.6。结论使用本细胞模型通过检测药物的TC50,IC50及TI进行药物初筛是可靠的。药物DPC961、牛膝多糖和艾乃吉Ⅰ号具有不同程度的体外抗HIV-1活性,痰热清注射液未检测到抗HIV-1活性。

关键词：模型细胞药物评价临床前 HIV-1 抗HIV药

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SARS_CoV中国株基因组全长cDNA的构建及其恢复病毒的生物学性质

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微生物学报 2006年第6期46卷 922-927页

作者：韩剑峰姜涛陈水平于曼秦鄂德赵卓李晓峰秦成峰邓永强赵慧赵海龙李晓萸军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

严重急性呼吸综合征是SARS-CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要。为了利用反向遗传学技术研究SARS-CoV的致病机制,将覆盖SARS-CoVBJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA... 详细信息

严重急性呼吸综合征是SARS-CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要。为了利用反向遗传学技术研究SARS-CoV的致病机制,将覆盖SARS-CoVBJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA分子,以其为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,获得病毒RNA。用电穿孔转染法将转录体RNA导入VeroE6细胞,可观察到典型的SARS-CoV致细胞病变作用。对收获的恢复病毒采用RT-PCR方法进行鉴定,结果表明获得的恢复病毒与SARS-CoVBJ01株原病毒序列一致。以针对SARS-CoV的抗体对感染细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有特异感染性的恢复病毒。同时用细胞病变法和空斑试验测定了恢复病毒及其亲本毒株的病毒滴度,结果表明二者在致病性上没有明显差异,恢复病毒具有与原型株相似的生物学特性。SARS-CoVBJ01株基因组全长cDNA的成功构建及对恢复病毒生物学性质的研究将为进一步探索SARS-CoV致病的分子机制及研制新型疫苗奠定良好的基础。

关键词： SARS-CoV BJ01株反向遗传学基因组全长cDNA 恢复病毒

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登革2型病毒中国株3′非编码区RNA元件对翻译的影响

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微生物学报 2008年第5期48卷 583-588页

作者：尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因... 详细信息

【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因(virus induced reporter gene,VIRG),在此基础上分别构建包含DEN2-433′UTR不同RNA元件的VIRG,并通过LUC检测、实时RT-PCR和Western blot方法分析含有不同元件VIRG对翻译效率的影响。【结果】发现完整的3′UTR缺失可显著抑制翻译,含有病毒VR元件VIRG的翻译水平与完整3′UTR的VIRG相似,RCS2或CS2元件可提高VIRG的翻译效率,CS1或SL元件可降低VIRG的翻译效率。【结论】DEN2-43病毒基因组3′UTR参与了报告基因的翻译,其不同元件具有可上调和下调报告基因翻译效率的作用。

关键词：登革病毒 3’UTR 翻译调控

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黄曲酶尿酸氧化酶突变体的构建、表达、纯化及生物学活性分析

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生物工程学报 2010年第8期26卷 1102-1107页

作者：张金龙任军李冰刘树玲侯利华付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的... 详细信息

采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的可溶性表达，目的蛋白占总蛋白含量的45％。疏水柱及阴离子柱纯化后，UOX-Ala^103蛋白纯度〉98％。Western blotting分析证实UOX—Ala加。能与抗UOX单抗特异结合。与天然型相比较，其体外生物学活性增加约60％，在高尿酸血症小鼠模型体内也有良好的降解尿酸的活性。

关键词：黄曲霉尿酸氧化酶突变体半胱氨酸表达纯化生物活性

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应用凝血反应检测杀鼠灵抗药性褐家鼠的可行性研究

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兽类学报 2006年第2期26卷 176-182页

作者：孙毅郭天宇董天义赵彤言 100071 北京军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室2004DAV00214 军事医学科学院微生物流行病研究所

为探讨凝血反应在鼠类抗药性检测中的应用前景,以褐家鼠为对象,在摄食实验基础上筛选抗药性褐家鼠,并在区分剂量12mg/kg作用下分析抗药性和敏感性褐家鼠的凝血能力的变化情况。结果显示,抗药性个体在区分剂量作用下,凝血酶活动度虽有所... 详细信息

为探讨凝血反应在鼠类抗药性检测中的应用前景,以褐家鼠为对象,在摄食实验基础上筛选抗药性褐家鼠,并在区分剂量12mg/kg作用下分析抗药性和敏感性褐家鼠的凝血能力的变化情况。结果显示,抗药性个体在区分剂量作用下,凝血酶活动度虽有所下降,下降幅度可达正常水平的17%,但在2～3d内可恢复到正常凝血水平;而敏感性褐家鼠的凝血酶下降到很低,且在随后不能恢复。另外,对褐家鼠凝血酶活动度的分布及其存活的关系研究也提示,区分剂量可促使凝血酶活动度的种群分布从单峰型向双峰型分化,其中敏感个体的凝血酶活动度在0～3.16之间,而抗药性个体则在17～100之间。并发现用药4d后的凝血酶活动度基本上可代表其未来的存活率,这提示了凝血反应与摄食实验结果的一致性。因此,以施药后4d凝血酶活动度PCA=17或INR=5.0作为阈值来区分抗药性和敏感性个体的凝血反应状况,进行家栖鼠抗药性测定是可行的。

关键词：凝血反应褐家鼠抗药性杀鼠灵检测

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