检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2011年第9期27卷 1390-1396页

作者：李浩殷瑛董大勇张军付玲蔡晨光王猛徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为研究结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis分泌蛋白ESAT-6(Early secreted antigenic target of 6 kDa)对巨噬细胞相关功能的影响,将正确构建的重组质粒pEGFP-C1-ESAT-6和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-ESAT6融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blotting方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。结果证实EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,为后续的ESAT-6调控巨噬细胞机理研究提供了平台。

关键词： ESAT-6 RAW264.7 稳定转染表达

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LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第10期26卷 929-932页

作者：于少洋易绍琼徐俊杰葛猛付玲于长明李冠霖陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原(PSCA)融合蛋白的生物活性。方法分别扩增炭疽毒素致死因子LF(lethal factor)N端254个氨基酸(LFn)的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌... 详细信息

目的研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原(PSCA)融合蛋白的生物活性。方法分别扩增炭疽毒素致死因子LF(lethal factor)N端254个氨基酸(LFn)的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测。结果实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达。纯化后纯度可达90％以上。体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性。结论在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础。

关键词：致死因子前列腺干细胞抗原融合蛋白

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分枝杆菌噬菌体D29气溶胶特性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 123-126页

作者：温占波王洁赵建军杨文惠于龙李娜鹿建春李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的为了研究噬菌体D29气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌的可行性，测试了噬菌体D29耐雾化能力、喷雾量、气溶胶粒径等气溶胶特性参数。方法负压实验室气雾柜内发生噬菌体D29气溶胶，TSI3321气溶胶粒径分析仪测试了气溶胶空气动力学直径。And... 详细信息

目的为了研究噬菌体D29气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌的可行性，测试了噬菌体D29耐雾化能力、喷雾量、气溶胶粒径等气溶胶特性参数。方法负压实验室气雾柜内发生噬菌体D29气溶胶，TSI3321气溶胶粒径分析仪测试了气溶胶空气动力学直径。Anderson六级空气微生物采样器测试了生物粒子气溶胶中值直径。据雾化前后噬菌体D29的浓度变化及体积变化得到噬菌体D29的雾化时间存活率和雾化量。结果噬菌体D29气溶胶空气动力学直径为0．872μm，生物粒子气溶胶中值直径为2．21μm。噬菌体D29在雾化5、15、30、45、60min后的存活率分别为89．78％、77．19％、48．86％、33．99％、30．12％。气溶胶的雾化量为232μl／min。结论噬菌体D29气溶胶粒径、耐雾化能力及喷雾量等气溶胶参数可以进一步进行动物气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌感染方面的研究。

关键词：结核分枝杆菌噬菌体D29 气溶胶

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扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立

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国际药学研究杂志 2015年第1期42卷 80-84页

作者：贾佳康晓平李裕昌吴晓燕张雨张雪松霍耐凡冉鑫杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区... 详细信息

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较。结果所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性。结论建立了ZEBOV及SEBOV Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测。

关键词：埃博拉病毒,扎伊尔型埃博拉病毒,苏丹型 TaqMan探针实时定量PCR 核酸检测

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我国HIV-1 B'亚型流行株vif基因序列特征及变异分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第8期26卷 743-746页

作者：李林刘永健鲍作义李韩平庄道民刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩... 详细信息

目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩增阳性的29例PCR产物进行vif区基因的测序及分析。结果29条vif基因的平均离散率是0．0328,突变主要集中于90～120、270 -302、372～405、450～470四个区域。Vif多肽链的90～93位和157～160位存在两个富含R和K带有强烈正电荷的亲水区,带正电荷的R或K交替出现,几乎没有其他的氨基酸残基。29个Vif多肽链有21条在90～93位存在R90 RKR93基序;有26条在157-160位存在K157 RRK160基序,29条序列在114位和133位存在两个在HIV-1和HIV-2以及SIV内保守的半胱氨酸(A)。结论vif在HIV-1基因组内具有相对保守性,其特征性区域和氨基酸基序对于保持Vif蛋白的功能是十分重要的。

关键词：人免疫缺陷病毒 vif基因

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艾滋病病毒长期不进展者、缓慢进展者、高危暴露者以及正常人群APOBEC3G mRNA水平的差异

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中华流行病学杂志 2008年第4期29卷 356-359页

作者：刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外... 详细信息

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外逆转录为eDNA，应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测不同人群血标本APOBEC3GmRNA的水平。结果HIV长期不进展者标本13份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（716±169）个／弘1，平均感染时间为（12．5±2．3）年；HIV缓慢进展者标本48份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（233±144）个／μ1，平均感染时间为（10．7±2．2）年。HIV长期不进展者APOBEc3GmRNA水平高于正常人群的水平；HIV缓慢进展者APOBEC3GmRNA水平高于高危人群和正常人群的水平。HIV长期不进展者和缓慢进展者的CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。结论我国中部地区HIV流行区4类不同人群APOBEC3GmRNA水平存在差异，并且HIV长期不进展者和缓慢进展者CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。

关键词：艾滋病病毒 APOBEC蛋白 mRNA水平

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人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第5期23卷 450-452页

作者：蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌***2566,IPT... 详细信息

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌***2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。

关键词：抗狂犬病毒二硫键稳定抗体 MBP融合蛋白原核表达

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重症手足口病免疫球蛋白治疗的机理探讨

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生物工程学报 2011年第5期27卷 712-716页

作者：曹瑞源韩剑峰秦鄂德秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

手足口病是由多种肠道病毒感染导致的一种急性儿科传染病。近年来,我国肠道病毒71型(EV71)手足口病发病率急剧上升,重症病例时有报道,严重威胁儿童健康。临床上对于重症手足口病的治疗缺乏有效手段,主要以对症治疗和支持疗法为主。静脉... 详细信息

手足口病是由多种肠道病毒感染导致的一种急性儿科传染病。近年来,我国肠道病毒71型(EV71)手足口病发病率急剧上升,重症病例时有报道,严重威胁儿童健康。临床上对于重症手足口病的治疗缺乏有效手段,主要以对症治疗和支持疗法为主。静脉注射人免疫球蛋白由健康献血员血浆提取纯化而来,含有包括EV71在内的多种肠道病毒的中和抗体,可作为重症手足口病被动免疫和免疫调节的重要手段,值得关注。

关键词：肠道病毒71型手足口病免疫球蛋白中和抗体

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西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第11期27卷 1037-1040页

作者：刘志国朱晓光杨保安刘伯华祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达... 详细信息

目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M，进行融合表达和纯化。将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验，观察其保护作用。结果分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M，表达和纯化了融合蛋白Nus-M，该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击。结论构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达，表达产物有较弱的免疫保护反应，为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料，但需要进一步改进。

关键词：西尼罗病毒多表位基因免疫保护

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以表位模拟肽为亲和靶标的肉毒毒素受体结合抑制剂的筛选及鉴定

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微生物学报 2006年第1期46卷 136-138页

作者：史晶王慧荫俊侯晓军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以设计合成的A型肉毒毒素表位模拟肽为亲和靶标,对噬菌体随机肽库进行筛选,寻找能与A型肉毒毒素表位模拟肽特异结合并能拮抗毒素毒性效应的分子,通过ELISA鉴定阳性克隆,并对鉴定的阳性克隆进行特异性分析及DNA测序。氨基酸序列同源性分... 详细信息

以设计合成的A型肉毒毒素表位模拟肽为亲和靶标,对噬菌体随机肽库进行筛选,寻找能与A型肉毒毒素表位模拟肽特异结合并能拮抗毒素毒性效应的分子,通过ELISA鉴定阳性克隆,并对鉴定的阳性克隆进行特异性分析及DNA测序。氨基酸序列同源性分析发现,针对P4、P5表位模拟肽获得了两条特异的结合序列,并通过动物保护实验在噬菌体展示肽水平对特异结合分子的毒素毒性拮抗效应进行了初步研究,初步证明结合肽对A型肉毒毒素有一定的保护作用。

关键词： A型肉毒毒素表位噬菌体肽文库

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