检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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同时产碳青霉烯酶IMP与NDM的肺炎克雷伯菌和霍氏肠杆菌的分离及耐药性研究

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中华医院感染学杂志 2018年第21期28卷 3201-3206页

作者：梁丽琪冯娇蒋晓圆曾利军周冬生梁权辉殷喆江凌晓南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 佛山市第一人民医院检验科广东佛山528000

目的对分别分离自我国两家医院的多药耐药菌株肺炎克雷伯菌10677和霍氏肠杆菌128379进行耐药机制研究。方法通过16SrDNA鉴定菌种,PCR筛查菌株携带的耐药基因,应用改良Carba NP法检测菌株产碳青霉烯酶的类型,接合转移和电转化试验验证携... 详细信息

目的对分别分离自我国两家医院的多药耐药菌株肺炎克雷伯菌10677和霍氏肠杆菌128379进行耐药机制研究。方法通过16SrDNA鉴定菌种,PCR筛查菌株携带的耐药基因,应用改良Carba NP法检测菌株产碳青霉烯酶的类型,接合转移和电转化试验验证携带IMP和NDM的质粒是否具有可转移性,全基因组测序获得细菌所携带的所有质粒序列,应用RAST、BLAST等对序列进行生物信息学分析。结果 10677和128379两株菌均产B类酶,且均携带碳青霉烯酶基因blaIMP和blaNDM。全基因测序结果显示10677和128379各包含两个分别携带blaIMP-4和blaNDM-1的质粒,分别为p10677-IMP、p10677-NDM、p128379-IMP和p128379-NDM。其中p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-NDM可通过接合转移得到相应的接合子,p128379-IMP仅可通过电转的方式得到其电转化子。p10677-IMP和p128379-IMP均为IncN1型质粒,有三个共有的外源插入区,分别为包含有携带blaIMP-4的整合子In823b,IS1插入区,携带qnrS1基因的转座子Tn6292,除此外,p10677-IMP还包括携带fosA5基因的转座子Tn6412区以及IS26插入区。p10677-NDM和p128379-NDM为IncX3型质粒,包含两个共有的外源插入区,分别为ISKox3和携带blaNDM-1的耐药区,此外,p10677-NDM还包含一个独有的插入区ISEhe3。结论质粒p10677-IMP、p10677-NDM和p128379-IMP、p128379-NDM分别介导10677和128379多药耐药且均具有转移性,是这两株耐药菌传播的重要载体。

关键词：肺炎克雷伯菌霍氏肠杆菌 blaIMP blaNDM 碳青霉烯酶质粒

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基于荚膜多糖基因wzc可变区序列的肺炎克雷伯菌荚膜分型

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军事医学 2018年第8期42卷 637-640页

作者：王灿李璞媛苑鑫童贻刚高明明刘慧莹秦艳红米志强柏长青安徽医科大学解放军307临床学院北京100071 解放军307医院呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行... 详细信息

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行测序,与已发表的荚膜型或NCBI数据库上比对测序结果,最终确定荚膜型别。结果在实验室保存的231株肺炎克雷伯菌中,有210株可用此法进行荚膜分型(分型率为90. 9%);在分出的40种不同的荚膜型中,K47为最常见的荚膜型别,占17. 1%(36/210);其次为K15型,占10. 5%(22/210),其他为K1和K2型,分别占5. 7%(12/210)和6. 6%(14/210)。结论基于荚膜多糖基因wzc可变区序列进行分型的方法操作简单,更有利于不同实验室之间的结果相互比较。另外,K47、K15、K1和K2型为临床肺炎克雷伯杆菌常见的荚膜型。

关键词：肺炎克雷伯菌荚膜分型聚合酶链反应

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B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定

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生物技术通讯 2018年第1期29卷 59-63页

作者：罗森陈芳红李涛王慧遵义医药高等专科学校贵州遵义563002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosett... 详细信息

目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。

关键词：肉毒毒素金属内肽酶原核表达

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宋内志贺氏菌1173质粒基因组及耐药基因转移机制

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微生物学报 2018年第3期58卷 467-475页

作者：张德福赵禹宗刘东冯娇张明曲道峰周冬生励建荣殷喆王丽渤海大学食品科学与工程学院辽宁省食品安全重点实验室生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心辽宁锦州121013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河南大学第一附属医院检验科河南开封475000 浙江工商大学食品与生物工程学院浙江杭州310018

【目的】研究质粒介导宋内志贺氏菌1173耐药基因bla_(CTX-M-64)转移的机制。【方法】用双纸片协同扩散法验证1173是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBL),用PCR扩增鉴定其携带的耐药基因,接合转移实验检验其耐药质粒是否可通过接合转移给其他细... 详细信息

【目的】研究质粒介导宋内志贺氏菌1173耐药基因bla_(CTX-M-64)转移的机制。【方法】用双纸片协同扩散法验证1173是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBL),用PCR扩增鉴定其携带的耐药基因,接合转移实验检验其耐药质粒是否可通过接合转移给其他细菌,并对接合子是否产ESBL和携带耐药基因进行检验,利用VITEK~?2检测1173和接合子的耐药谱,提取质粒进行高通量基因组测序,并对质粒序列进行生物信息学分析,以研究其耐药基因转移机制。【结果】1173是产ESBL的多药耐药宋内志贺氏菌,携带的耐药基因有bla _(CTX-M-64)和bla _(TEM),其中的bla _(CTX-M-64)可通过接合转移作用传递给受体菌EC600,并使接合子具有相应的耐药谱。经序列测定和生物信息学分析表明,介导bla _(CTX-M-64)水平转移的是ISEcp1-bla_(CTX-M-64)-Δorf477转座单元。【结论】质粒携带的bla_(CTX-M-64)介导1173对多类抗菌药物的耐药,ISEcp1-bla_(CTX-M-64)-Δorf477转座单元介导bla_(CTX-M-64)在细菌间的转移。

关键词：宋内志贺氏菌质粒多药耐药转座单元移动元件 blaCTX-M-64

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呼吸道防护装备佩戴密合度测定仪的研制

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中国医学装备 2018年第9期15卷 1-4页

作者：李劲松张柯何春雷胡凌飞王桐张友禄王洁李娜军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 青岛众瑞智能仪器有限公司山东青岛266101

目的:根据呼吸道防护装备佩戴的要求,研制可对多种呼吸道防护装备与佩戴者面部密合度进行测试的密合度测定仪。方法:人员呼吸道防护装备佩戴密合度测定仪的硬件采用粒子生长技术和激光粒子计数技术,建立微气压传感技术,设计仪器的机械... 详细信息

目的:根据呼吸道防护装备佩戴的要求,研制可对多种呼吸道防护装备与佩戴者面部密合度进行测试的密合度测定仪。方法:人员呼吸道防护装备佩戴密合度测定仪的硬件采用粒子生长技术和激光粒子计数技术,建立微气压传感技术,设计仪器的机械结构和控制系统结构;利用所研制的ZR-1220呼吸器密合度测定仪,测试300人次的防护口罩密合度,分析口罩的型号、佩戴方式、佩戴后人的面部表情及动作对口罩防护能力的影响。结果:经实验测试,该仪器设置的8个测试参数,即正常呼吸→深呼吸→左右摇头→上下摆头→朗读→做鬼脸→弯腰摸脚趾→正常呼吸,均满足密合度测试要求,且操作简便,系统界面友好。密合度测试软件针对人员在不同面部动作和面型下防护装备佩戴密合度的算法,解决检测信号与实际数值的对应关系,建立人机交互界面。结论:密合度测定仪性能达到国外同类仪器的性能指标,可以用作评价呼吸道防护装备面型密合度的测试仪器。

关键词：呼吸道防护装备密合度设计原理粒子

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五种出血热病毒重组酶聚合酶等温扩增方法的建立

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解放军医学杂志 2017年第6期42卷 526-531页

作者：曹雪锋康晓平李裕昌张森户义李靖吴晓燕杨银辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法。方法通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸... 详细信息

目的建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法。方法通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸片段作为检测靶基因,针对靶基因序列设计RPA检测的引物和探针;取系列稀释的模板基因进行RPA检测,确定其灵敏性;取出血热相关病毒核酸为模板进行RPA检测,确定其特异性;验证不同温度反应条件(37~42℃)对检测结果的影响。结果五种出血热病毒的RPA反应体系均可有效扩增靶基因,灵敏性为1.5×102~1.5×103copies/反应,与其他出血热相关病毒的核酸无交叉反应;RPA实验在37~42℃均可实现靶基因的有效扩增。结论建立了五种出血热病毒的RPA等温扩增体系,该体系反应快速,温度范围宽,适用于现场快速检测。

关键词：重组酶聚合酶检测等温扩增出血热病毒

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鼠疫耶尔森菌文献数据库的研建与开发

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军事医学 2017年第6期41卷 474-477页

作者：阎晓菲颜焱锋杨瑞馥崔玉军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立便捷的鼠疫菌文献数据库系统,从而提高文献利用效率。方法运用End Note X5文献管理软件进行文献收集整理,通过Perl及PHP等计算机语言规范数据格式、构建实体关系模型、搭建系统和开发网页;选择中小型网站开发中常用的Apache+PHP... 详细信息

目的建立便捷的鼠疫菌文献数据库系统,从而提高文献利用效率。方法运用End Note X5文献管理软件进行文献收集整理,通过Perl及PHP等计算机语言规范数据格式、构建实体关系模型、搭建系统和开发网页;选择中小型网站开发中常用的Apache+PHP+My SQL组合进行动态网站的开发。结果与结论构建了鼠疫菌文献数据库(访问地址:http://101.201.51.148/ypkd/)。该文献数据库可供用户快速检索、浏览并获取鼠疫菌相关文献和著作全文,并提供自动更新的鼠疫菌新闻资讯。该数据库具有前沿性和完整性,为鼠疫菌相关科研及鼠疫疫情的预防控制提供了知识保障,并为其他重要病原文献数据库的建立提供了参考模型。

关键词：鼠疫耶尔森菌鼠疫文献数据库信息整合论文库

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Q热性心内膜炎1例抗Ⅰ相和Ⅱ相抗原IgG抗体的跟踪监测报道

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军事医学 2017年第2期41卷 160-160,F0003页

作者：于永慧王涛罗声栋冯乐孙志会宋立华军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

Q热（query fever,Qfever,不明热）是由贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii,Cb）感染人导致的一种无特征性病症的发热疾病,临床上与流感等不易区分,常被误诊漏诊。Cb为人畜共患的专性胞内寄生菌,在我国分布广泛,禽、畜等动物足其主要宿主... 详细信息

Q热（query fever,Qfever,不明热）是由贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii,Cb）感染人导致的一种无特征性病症的发热疾病,临床上与流感等不易区分,常被误诊漏诊。Cb为人畜共患的专性胞内寄生菌,在我国分布广泛,禽、畜等动物足其主要宿主和传染源,Cb可引起孕畜流产,造成经济损失。人感染Cb后,除出现类似流感的不明发热症状以外,

关键词： Q热贝氏柯克斯体心内膜炎免疫球蛋白G

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磷酰胺吗啉代寡核苷酸关键中间产物的合成方法探索与工艺优化

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军事医学 2017年第8期41卷 662-666页

作者：陈晓睿郭永建宋亚彬张东娜徐力昆王保刚窦媛媛王洪权军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探索与优化磷酰胺吗啉代寡核苷酸(PMO)关键中间产物7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代核苷单体合成工艺路线和方法,使其合成更加高效与便捷,为以PMO为结构基础的反义寡核苷酸类药物研究奠定基础。方法以N4-苯甲酰基胞苷,鸟苷与5-甲基尿... 详细信息

目的探索与优化磷酰胺吗啉代寡核苷酸(PMO)关键中间产物7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代核苷单体合成工艺路线和方法,使其合成更加高效与便捷,为以PMO为结构基础的反义寡核苷酸类药物研究奠定基础。方法以N4-苯甲酰基胞苷,鸟苷与5-甲基尿苷作为起始原料,经过将核糖环结构改造为吗啉环并对关键化学基团保护等步骤合成7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代核苷单体。结果分别得到N4-苯甲酰基-7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代胞苷、N2-苯甲酰基-7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代鸟苷和7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代胸苷,并对三者合成的工艺方法进行了优化,对所合成的中间体和目标物进行了结构确证。结论优化后的7'-羟基-N-三苯甲基吗啉代核苷单体合成工艺高效、便捷且适合放大制备。

关键词：磷酰胺吗啉代寡核苷酸吗啉核苷单体 7’-羟基-N-三苯甲基吗啉代核苷工艺优化

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