检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2008年第4期32卷 323-327页

作者：刘然韩剑峰陈水平于曼姜涛邓永强秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建本室新分离的登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,为深入研究登革病毒致病机制奠定基础。方法:根据登革1型病毒广州06株基因组全序列中单一酶切位点设计特异引物,分别扩增并克隆5个病毒亚基因组cDNA片段,将其逐一拼... 详细信息

目的:构建本室新分离的登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,为深入研究登革病毒致病机制奠定基础。方法:根据登革1型病毒广州06株基因组全序列中单一酶切位点设计特异引物,分别扩增并克隆5个病毒亚基因组cDNA片段,将其逐一拼接连入pW SK 29低拷贝质粒载体,获得病毒全长cDNA克隆,并将其体外转录为RNA,再转染细胞获得恢复病毒。进一步通过RT-PCR扩增病毒5′和3′非编码区序列和特异性间接免疫荧光对其恢复病毒进行鉴定。结果和结论:构建获得登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,其恢复病毒与野生型病毒具有相似的生物学特性。

关键词：登革热病毒全长cDNA克隆恢复病毒

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实时RT-PCR法检测感染小鼠不同组织标本中的委内瑞拉马脑炎病毒

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1035-1038页

作者：邓永强姜涛于曼陈水平秦成峰刘伯华祝庆余秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持。方法建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测。结果本研究... 详细信息

目的为委内瑞拉马脑炎病毒所致疾病的早期诊断和流行病学研究提供技术支持。方法建立了委内瑞拉马脑炎病毒特异、敏感和快速的实时RT-PCR法,并对委内瑞拉马脑炎病毒感染昆明小鼠的不同组织标本中的病毒载量进行了定量检测。结果本研究建立的实时RT-PCR法敏感(10TCID50/ml)、特异(对其它甲病毒成员,如东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒检测为阴性)。该方法可从委内瑞拉马脑炎病毒感染小鼠后第1d的血液、脾脏、脑组织中检测到不同含量的病毒核酸,而在感染后第3d仅从脾脏和脑组织中检测到病毒核酸。结论实时RT-PCR法不仅是一种敏感、准确的检测方法,可用来了解病毒感染量与疾病严重程度的关系和评价病毒病疫苗的免疫效果,而且也为VEEV疾病的临床诊断和流行病学监测提供工具。

关键词：委内瑞拉马脑炎病毒实时RT—PCR

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重要蚊媒黄病毒对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用

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军事医学科学院院刊 2008年第3期32卷 207-210页

作者：赵慧邓永强陈水平姜涛韩剑峰秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:比较并探讨日本脑炎病毒Beijing-1株和登革2型病毒43株对宿主细胞内IFN-α介导的信号转导通路抑制作用的机制。方法:采用含萤火虫荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,通过检测IFN刺激应答元件(IFN-stimulated re... 详细信息

目的:比较并探讨日本脑炎病毒Beijing-1株和登革2型病毒43株对宿主细胞内IFN-α介导的信号转导通路抑制作用的机制。方法:采用含萤火虫荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,通过检测IFN刺激应答元件(IFN-stimulated response element,ISRE)活性对病毒感染细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的抑制作用进行定量分析。利用间接免疫荧光法观察在IFN-α作用下病毒感染细胞内STAT1分子的分布情况。进一步采用Western印迹分别检测在这两种病毒感染状态下宿主细胞内STAT1、JAK1和TYK2的磷酸化水平。结果:感染日本脑炎病毒和登革病毒的细胞在IFN-α作用下,ISRE活性与对照组相比均显著下降,而且日本脑炎病毒对宿主细胞内ISRE活性的抑制程度明显强于登革病毒;进一步研究发现,日本脑炎病毒可通过抑制JAK1和TYK2两种激酶的活性,降低STAT1的磷酸化水平,阻碍STAT1的核转运;而登革病毒则只抑制TYK2激酶的活化,降低STAT1的磷酸化及核转运水平。结论:日本脑炎病毒和登革病毒可通过不同的作用机制抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路。

关键词： Ⅰ型干扰素 JAK-STAT信号转导通路日本脑炎病毒登革病毒

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HIV-1 B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列的测定及全基因组克隆的构建

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军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 512-515页

作者：王铮李韩平李林董华凰鲍作义刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将... 详细信息

目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将其克隆入低拷贝载体pLG338。结果与结论:完成CNHN24毒株5′LTR和3′LTR的测序并提交至GenBank,其登录号分别为AY860947和AY894352,使CNHN24株成为具有完整全序列的H IV毒株;获得可以稳定传代的全基因组克隆质粒pCN24,利用此克隆转染293T细胞后可以产生恢复病毒。

关键词：人免疫缺陷病毒长末端重复序列全基因组克隆

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从定性到定量的转变是 POCT 发展历程中的重要挑战

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中华检验医学杂志 2014年第11期37卷 801-803页

作者：周蕾杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

POCT以“现场非专门训练人员”的操作模式与“微型、便携、智能”的检测技术为基础，以“事发现场快速获得检验结果进而指导科学处置”为目标，日益受到临床、疾控、质检、环保、法医、海关等广义检验领域的关注。在此，对POCT的定义、... 详细信息

POCT以“现场非专门训练人员”的操作模式与“微型、便携、智能”的检测技术为基础，以“事发现场快速获得检验结果进而指导科学处置”为目标，日益受到临床、疾控、质检、环保、法医、海关等广义检验领域的关注。在此，对POCT的定义、简史以及从定性到定量转变过程中面临的挑战进行阐述。

关键词：床旁诊断化验信息系统质量保证,卫生保健质量控制

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日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用

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解放军医学杂志 2008年第7期33卷 811-815页

作者：赵慧邓永强陈水平姜涛韩剑峰李晓峰于学东秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,N... 详细信息

目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。

关键词：干扰素Ⅰ型 JAK-STAT信号转导通路脑炎病毒,日本病毒非结构蛋白质类

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痘苗病毒检测方法的建立

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军事医学科学院院刊 2005年第3期29卷 272-274页

作者：段鸿元邓永强赵慧于曼李豫川严格秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立痘苗病毒的检测方法。方法:采用细胞病变法观察痘苗病毒感染的HeLa细胞,通过电镜直接观察病毒颗粒的形态特征,观察鸡胚绒毛尿囊膜上形成的痘斑并用分子生物学方法分析痘苗病毒HA基因片段。结果与结论:痘苗病毒感染HeLa细胞34h... 详细信息

目的:建立痘苗病毒的检测方法。方法:采用细胞病变法观察痘苗病毒感染的HeLa细胞,通过电镜直接观察病毒颗粒的形态特征,观察鸡胚绒毛尿囊膜上形成的痘斑并用分子生物学方法分析痘苗病毒HA基因片段。结果与结论:痘苗病毒感染HeLa细胞34h后出现典型细胞病变。在病毒感染细胞47h后的培养上清和胞浆中均可通过电镜观察到病毒颗粒。感染的鸡胚绒毛尿囊膜上出现痘斑。进一步采用PCR法扩增病毒的HA基因,RFLP限制性内切酶片段多态性分析和序列测定证明该序列与已知序列一致。所建立的痘苗病毒系列检测方法,为天花相关病毒的实验室诊断奠定了基础。

关键词：痘苗病毒诊断天花病毒

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半乳糖凝集素-1的表达纯化与生物活性分析

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军事医学科学院院刊 2009年第3期33卷 231-233页

作者：易绍琼任声权于婷张晓艳刘树玲陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:获得重组人半乳糖凝集素-1(galectin-1)蛋白,并分析其生物学活性。方法:PCR方法扩增目的基因,将其克隆到原核表达载体pET21a(+),获得重组质粒pET-galectin;将其转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导,获得目的蛋白的表达;采... 详细信息

目的:获得重组人半乳糖凝集素-1(galectin-1)蛋白,并分析其生物学活性。方法:PCR方法扩增目的基因,将其克隆到原核表达载体pET21a(+),获得重组质粒pET-galectin;将其转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导,获得目的蛋白的表达;采用Ni-NTA亲和层析柱对目的蛋白进行纯化,用红细胞凝集试验分析其生物学活性。结果与结论:成功构建重组原核表达质粒pET-galectin,目的蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化后,得到的蛋白纯度可达80%以上。红细胞凝集试验结果表明获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,可进一步用于半乳糖凝集素-1功能研究。

关键词：半乳糖凝集素原核表达蛋白纯化红细胞凝集试验

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两种HIV-1耐药准种分析方法的比较

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军事医学科学院院刊 2010年第3期34卷 261-264页

作者：焦丽燕刘永健郭东星王铮耿庆茂李林庄道民鲍作义刘思扬李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的比较两种HIV-1耐药准种分析方法 ---克隆PCR产物测序法和单基因扩增法(单基因组测序法,single-genome sequencing,SGS)。方法以本室贮存的某接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviraltherapy,HAART)的艾滋病患者的外... 详细信息

目的比较两种HIV-1耐药准种分析方法 ---克隆PCR产物测序法和单基因扩增法(单基因组测序法,single-genome sequencing,SGS)。方法以本室贮存的某接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviraltherapy,HAART)的艾滋病患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)为样本,分别用克隆PCR产物序列测定法和SGS方法得到HIV-1pol区准种序列,对准种序列进行离散率、耐药相关突变组合构成比等分析。结果克隆方法得到19条pol区序列,SGS方法得到18条pol区序列。对两种方法的核苷酸和蛋白质序列的平均离散率进行成对样本均值分析,采用t检验,P值(单尾)为0.311,差异没有显著性意义;两种方法检测出各种突变组合构成比的2检验结果 ,P>0.25,差异也没有显著性意义。但是,准种中占较少比例的突变模式在两种方法检测的结果不一致,如T215Y/K103N/Y181C/H221Y以及M41L/F116L/T215Y/K103N/Y181C/H221Y两种突变组合模式只在克隆方法中检测到,而携带M41L/A62V/T69Si/T215Y/A98G/K103N/Y181C以及K103N突变的两种毒株仅在SGS方法中出现。结论两种分析HIV-1耐药突变准种方法检测该例样本的核苷酸序列和蛋白质准种序列无显著性差异,检出的主要突变组合的构成比也无显著性差异,对优势准种的检测中两种方法差异不大,但在劣势准种的检测中两种方法有一定差异。

关键词： HIV-1准种克隆测序单基因扩增法聚合酶链反应

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溴氰菊酯泡腾片浸泡蚊帐对淡色库蚊和致倦库蚊的灭效观察

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中国媒介生物学及控制杂志 2008年第3期19卷 180-181页

作者：汪中明董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的在实验室内观察溴氰菊酯泡腾片及乳油浸泡蚊帐对淡色库蚊和致倦库蚊的灭效。方法强迫接触法。结果当药剂浓度为2mg·ai/m2时,溴氰菊酯2种剂型浸帐对淡色库蚊的杀灭效果均达到100%,当药剂浓度达到10mg·ai/m2时,其对致倦库... 详细信息

目的在实验室内观察溴氰菊酯泡腾片及乳油浸泡蚊帐对淡色库蚊和致倦库蚊的灭效。方法强迫接触法。结果当药剂浓度为2mg·ai/m2时,溴氰菊酯2种剂型浸帐对淡色库蚊的杀灭效果均达到100%,当药剂浓度达到10mg·ai/m2时,其对致倦库蚊杀灭效果不足100%。溴氰菊酯泡腾片浸泡蚊帐杀灭淡色库蚊的LC50为0.23mg·ai/ml,而乳油浸帐的LC50为0.31mg·ai/ml,方差分析结果表明,二者差异有统计学意义(t=3.04,P=0.023);溴氰菊酯2种剂型浸帐对致倦库蚊的LC50分别为1.16和1.33mg·ai/ml,差异无统计学意义(t=1.65,P=0.470)。溴氰菊酯的2种剂型均采用5、10和20mg·ai/m23种浓度浸泡蚊帐,对淡色库蚊和致倦库蚊的毒杀效果随着药物浓度的增高,LT50值明显缩短;溴氰菊酯泡腾片浸泡蚊帐对2种蚊虫的灭效均稍强于乳油浸泡蚊帐,且泡腾片浸泡蚊帐对2种蚊虫的击倒死亡时间均短于乳油浸帐。结论溴氰菊酯泡腾片作为一种新剂型浸泡蚊帐具有良好的灭蚊效果。

关键词：溴氰菊酯泡腾片乳油浸泡蚊帐致倦库蚊淡色库蚊

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