检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2017年第30期97卷 2379-2383页

作者：黄艳飞常峥白婕朱敏张明新王玫张桂李修远童贻刚王景林鲁辛辛首都医科大学附属北京同仁医院检验科 100730 北京市海淀医院检验科解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的建立并评价实验室自行研发的丝状真菌质谱鉴定前处理方法的可行性.方法复苏2014年1月至2016年12月北京同仁医院菌库中380株丝状真菌菌株,沙保弱葡萄糖琼脂平板（SDA）28 ℃培养至成熟状态,同时使用Bruker仪器推荐的垂直旋转法培养... 详细信息

目的建立并评价实验室自行研发的丝状真菌质谱鉴定前处理方法的可行性.方法复苏2014年1月至2016年12月北京同仁医院菌库中380株丝状真菌菌株,沙保弱葡萄糖琼脂平板（SDA）28 ℃培养至成熟状态,同时使用Bruker仪器推荐的垂直旋转法培养和本实验室研发的＂水平震荡法＂培养至足量菌落.3种方法培养菌株均采用＂改良磁珠提取法＂提取蛋白行质谱鉴定.结果380株真菌菌株,使用SDA培养时间需要3~10 d,鉴定到种和属的比率分别是47%和81%;使用Bruker仪器推荐方法培养时间需要5~7 d,鉴定到种和属的比率分别是76%和94%;＂水平震荡法＂培养时间只需1~2 d,鉴定到种和属的比率分别是96%和99%.＂水平震荡法＂和SDA培养法比较,差异有统计学意义（χ2=39.026,P〈0.01）,和仪器推荐的方法比较,差异有统计学意义（χ2=11.310,P〈0.01）.结论本实验室研发的＂水平震荡法＂和＂改良磁珠提取法＂优于仪器推荐的方法和SDA培养鉴定方法,可以应用到临床.

关键词：真菌水平震荡法改良磁珠提取法

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携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定

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军事医学 2017年第3期41卷 194-198页

作者：张娜娜邓永强年庆功康晓平杨银辉秦成峰广西医科大学南宁530000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达... 详细信息

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。

关键词：圣路易斯脑炎病毒假病毒阳性质控品

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鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建

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军事医学 2017年第10期41卷 800-804页

作者：高肖芳刘子中李文亮王红朵杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测... 详细信息

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。

关键词：鼠疫菌小RNA λ-Red同源重组过表达

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副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展

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食品工业科技 2018年第9期39卷 311-317,324页

作者：张德福安慧张健赵禹宗张明郭佳佳冯娇刘雪飞李春白凤翎李钰金殷喆励建荣渤海大学食品科学与工程学院辽宁省高等学校生鲜食品产业技术研究院生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心辽宁锦州121013 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 渤海大学数理学院辽宁锦州121013 荣成泰祥食品股份有限公司山东荣成264309

副溶血弧菌是引起食源性疾病的主要致病菌之一,也给水产品养殖业造成重大经济损失。临床和养殖业者一般使用抗菌药物治疗副溶血弧菌引起的感染,但由于抗菌药物的不规范使用,导致耐药性副溶血弧菌的大量出现。耐药性副溶血弧菌可以通过... 详细信息

副溶血弧菌是引起食源性疾病的主要致病菌之一,也给水产品养殖业造成重大经济损失。临床和养殖业者一般使用抗菌药物治疗副溶血弧菌引起的感染,但由于抗菌药物的不规范使用,导致耐药性副溶血弧菌的大量出现。耐药性副溶血弧菌可以通过食物链传播给人类,严重威胁人民群众的食品安全和身体健康。目前,文献报道关于副溶血弧菌耐药谱分析的较多,但关于耐药基因和相关移动元件、耐药机理的研究较少。本文综述了世界上多个国家副溶血弧菌耐药性的情况及其耐药机理的研究现状,并对发展前景进行了分析。

关键词：副溶血弧菌耐药质粒移动元件

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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法

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军事医学 2017年第8期41卷 689-693页

作者：吴灿军律清宇郝淮杰赵成娜郑玉玲姜永强安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素... 详细信息

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。

关键词：降钙素原时间分辨荧光法铕离子荧光微球磁珠均相检测

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小RNA对细菌生物膜形成的调控研究进展

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军事医学 2017年第6期41卷 530-533,542页

作者：高肖芳刘子中李文亮杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即... 详细信息

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即生物膜,其主要由蛋白质、多糖和DNA组成。最新研究表明,小RNA在调控细菌生物膜形成的系统中发挥着重要的作用。小RNA通过与靶标mRNA碱基配对或与调节蛋白相互作用,在细菌生物膜形成中发挥调控作用。该文综述了小RNA对细菌生物膜形成的调控机制和途径,阐述了3种经典的小RNA调控细菌生物膜形成的模型,以及小RNA调控对细菌生物膜形成的研究现状和发展方向。

关键词：小RNA 生物膜 c-di-GMP

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全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱经卵传播新塔拉塞维奇立克次体的检测研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第1期24卷 19-24页

作者：魏然江佳富蒋宝贵常巧呈刘洪波付雪曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔... 详细信息

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔拉塞维奇立克次体的感染情况，从而研究新塔拉塞维奇立克次体在蜱生活周期中的传递规律。共采集牛寄生饱血雌蜱91只，其中全沟硬蜱14只，森林革蜱55只，嗜群血蜱24只。新塔拉塞维奇立克次体感染率为85．71％，5．45％，12．50％。卵的最低感染率分别为全沟硬蜱（2％）、森林革蜱（1．3％）、嗜群血蜱（1．1％），幼蜱的最低感染率分别为全沟硬蜱（5％）、森林革蜱（1．7％）、嗜群血蜱（2．2％）。且3种蜱雌蜱、卵、幼虫均检测到的新塔拉塞维奇立克次体，序列比对一致。感染的幼蜱均可通过叮咬使小鼠感染，三种蜱都能经卵传播新塔拉塞维奇立克次体。全沟硬蜱感染率高可能是东北林区新塔拉塞维奇立克次体的主要媒介蜱。

关键词：新塔拉塞维奇立克次体实验经卵传播全沟硬蜱森林革蜱嗜群血蜱

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衣原体致病机制研究进展

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中华医院感染学杂志 2017年第5期27卷 1193-1196页

作者：李鹏张琪苗晋华宋立华解放军264医院检验科山西太原030001 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

衣原体是一种专性胞内寄生的病原微生物,种间组织嗜性有差异,有些还是人兽共患病病原菌;其感染部位广泛、途径多,临床以沙眼、肺炎和泌尿生殖道感染多见;鹦鹉热衣原体还曾作为经典的生物战剂;衣原体由于胞内寄生,致病机制复杂,本文从三... 详细信息

衣原体是一种专性胞内寄生的病原微生物,种间组织嗜性有差异,有些还是人兽共患病病原菌;其感染部位广泛、途径多,临床以沙眼、肺炎和泌尿生殖道感染多见;鹦鹉热衣原体还曾作为经典的生物战剂;衣原体由于胞内寄生,致病机制复杂,本文从三型分泌系统、衣原体质粒、脂多糖、新发现毒力因子CT135和CPAF蛋白这五个方面简要综述了衣原体的致病机制,提出以鹦鹉热衣原体为模型研究衣原体属致病机制的优越性,为进一步深入分析衣原体的致病机制提供参考。

关键词：衣原体致病机制质粒三型分泌系统 CT135基因

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云南省贡山地区小型兽类几种细菌性病原体携带现况调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2018年第1期25卷 12-17页

作者：李伶俐左曙青杜春红彭红红赵秋敏代科张久松安徽医科大学安徽合肥230022 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 云南省地方病防治所云南大理671000

为掌握云南贡山地区野生小型兽类的种类和主要细菌性病原体的携带情况,于2014—2015年在该地区诱捕野生小型兽类,进行种类鉴定,解剖取肺、脾等组织。采用巢式PCR对无形体Anaplasmataceae、恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi、斑点热... 详细信息

为掌握云南贡山地区野生小型兽类的种类和主要细菌性病原体的携带情况,于2014—2015年在该地区诱捕野生小型兽类,进行种类鉴定,解剖取肺、脾等组织。采用巢式PCR对无形体Anaplasmataceae、恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi、斑点热群立克次体(Spotted fever group rickettsiae,SFGR)以及莱姆病螺旋体Lyme disease spirochete等4类病原体进行检测。结果共捕获小兽759只,涉及14属35种,优势属为姬鼠属(29.1%)和绒鼠属(17.4%)。对其中541份标本进行无形体PCR检测,结果显示:12份新埃立克体(Candidatus Neoehrlichia mikurensis)阳性,来自姬鼠、绒鼠、鼩鼱和白腹鼠;2份沃尔巴克氏体Wolbachia阳性,来源于鼩鼱和灰腹鼠;3份巴尔通体Bartonella阳性,来源于绒鼠和大足鼠。采用56 k Da基因片段引物对恙虫病东方体进行检测,发现4份阳性标本。其中2份与Boryong血清型菌株同源性最高,均为97.0%;1份与Karp血清型同源性最高,为86.0%;另一份与Kato-related血清型同源性最高,为86.0%,系统发生树显示,其与Kato-related位于同一分支。提示这两份标本可能是恙虫病东方体Karp血清型和Kato-related血清型菌株的变异株。

关键词：贡山小型兽类细菌性病原体 PCR

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以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架的重组嵌合登革4病毒的构建与鉴定

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寄生虫与医学昆虫学报 2018年第2期25卷 80-86页

作者：解东洋祝琴刘忠钰赵慧邓永强叶青李晓峰秦成峰安徽医科大学安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 广州医科大学附属广州市第八人民医院广东广州510182

登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全。本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、生长曲... 详细信息

登革4型病毒近年来在我国东南沿海地区时有流行,威胁人民健康与公共卫生安全。本研究以乙脑减毒活疫苗SA14-14-2为骨架,通过反向遗传学技术构建了携带登革4型病毒主要结构蛋白prM/E基因重组嵌合病毒(ChinDENV4);进一步通过蚀斑、生长曲线、动物实验等对其生物学特征进行了鉴定。结果显示,重组嵌合病毒Chin DENV4可高效表达登革4型病毒的结构蛋白,蚀斑大小与亲本株类似;ChinDENV4并能够在BHK-21、C6/36等细胞中高效复制,滴度分别达到1. 26×10~5和1. 58×10~6PFU/m L。更重要的是,嵌合病毒ChinDENV4在乳鼠模型中的神经毒力显著弱于亲本株。本研究成功构建了乙脑/登革4型嵌合病毒,为下一步四价嵌合登革减毒活疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：乙脑病毒登革4型病毒反向遗传学减毒活疫苗嵌合病毒

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