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2016年中国微生物学会学术年会暨中国微生物学会第十一次全国会员代表大会

作者：罗声栋王涛孙志会于永慧冯乐何泽民端青宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

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徐州地区三带喙库蚊胃血来源分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第3期23卷 143-147页

作者：朱长强吴婷艾乐乐杨露吕恒李春晓谭伟龙赵彤言南京军区疾病预防控制中心南京210002 中国人民解放军第八一医院南京210002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系... 详细信息

应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系鉴定三带喙库蚊胃血来源。同时，用该方法检测猪血、人血、牛血、羊血、鼠血、鸡血中提取的DNA，验证其特异性；对吸饲人血后不同时间（1、12、24、36、48、60h）的中华按蚊进行检测，测试该方法的敏感性。该方法可从已知动物血样提取的DNA中分别扩增得到689（人）、561（牛）、453（猪）、225（羊）、485（鼠）、266bp（鸡）大小的特异性条带；吸人血36h内的中华按蚊均能扩增出特异性条带，在吸人血后48、60h的中华按蚊中，均未扩出特异性条带。共检测24只现场三带喙库蚊，血源来自猪、人、鸡、牛、鼠、羊分别为7、6、3，2、2、1只，其中5只蚊虫兼吸吸血。建立的PCR检测方法可鉴定三带喙库蚊蚊胃血来源，结果稳定可靠；徐州地区三带喙库蚊不仅嗜吸猪血和人血，也可兼吸其他动物血。

关键词：三带喙库蚊蚊胃血 PCR 吸血习性

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生物安全三级实验室废弃物处置的环境风险评价检测

生物安全三级实验室废弃物处置的环境风险评价检测

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2016中国环境科学学会学术年会

作者：李劲松张柯李娜王洁胡凌飞曹杰温占波殷喆军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:通过对生物安全三级实验室的感染性"三废"无害化处置设备的生物学检测评价,确保生物安全三级实验室外环境生物安全. 方法:建立微生物评价高压灭菌器和高效粒子空气隔离器对微生物灭菌和净化处置性能的检测方法,并在... 详细信息

目的:通过对生物安全三级实验室的感染性"三废"无害化处置设备的生物学检测评价,确保生物安全三级实验室外环境生物安全. 方法:建立微生物评价高压灭菌器和高效粒子空气隔离器对微生物灭菌和净化处置性能的检测方法,并在生物安全三级实验室现场进行检测应用. 结果:生物安全三级实验室环保设施设备总合格率为78.26％,生物安全三级实验室排风HEPA合格率为93％,二级生物安全柜排风口HEPA合格率为90.21％,IVC HEPA合格率为62.5％,高压蒸汽灭菌器灭菌合格率为95.83％,污水灭菌处理设备合格率为92.86％.可见在"三废"中,废气处置设备的风险最大.表明建立和制定生物安全三级实验室环境保护设备的生物学检测方法的必要性.

关键词：生物安全实验室废弃物处置环境风险评价

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检测5种呼吸道病毒的PCR-array方法评价

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中国卫生检验杂志 2016年第6期26卷 765-767,771页

作者：刘可可郑新李艳袁媛郑玉玲姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院附属医院重症医学科北京100071

目的建立同时检测甲型流感病毒（INF-A）、乙型流感病毒（INF-B）、呼吸道合胞病毒A型（RSV-A）、呼吸道合胞病毒B型（RSV-B）、鼻病毒（HRV）5种常见呼吸道病毒的PCR-array方法,为快速检测呼吸道感染提供准确、有效的技术手段。方法构... 详细信息

目的建立同时检测甲型流感病毒（INF-A）、乙型流感病毒（INF-B）、呼吸道合胞病毒A型（RSV-A）、呼吸道合胞病毒B型（RSV-B）、鼻病毒（HRV）5种常见呼吸道病毒的PCR-array方法,为快速检测呼吸道感染提供准确、有效的技术手段。方法构建阳性标准品评价PCR-array方法的扩增效率和最低检出限（LOD）,应用189份鼻咽拭子样本,与金标准比较,评价PCR-array方法的灵敏度和特异度。结果 PCR-array方法有较高的特异度,LOD可以达到10 copy/μl。PCR-array方法灵敏度为94.2%,特异度为96.0%,Kappa值为0.705-1.000。结论 PCR-array方法能够在2 h内同时检测INF-A、INF-B、RSV-A、RSV-B、HRV,且具有较高的灵敏度和特异度。

关键词：呼吸道病毒多重检测实时荧光定量PCR

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难提取细菌基因组DNA提取方法的比较与优化

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生物技术通讯 2016年第3期27卷 412-415页

作者：程实刘文丽舒鹏米志强安小平童贻刚安徽医科大学安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:比较并优化2种试剂盒提取以巨型球菌为代表的难提取细菌基因组DNA的方法,以获得高质量的DNA用于高通量测序,探索高通量测序样品的前期处理方法。方法:用Life Technologies公司的Charge Switchg DNA Mini Bacteria Kit和Roche公司的... 详细信息

目的:比较并优化2种试剂盒提取以巨型球菌为代表的难提取细菌基因组DNA的方法,以获得高质量的DNA用于高通量测序,探索高通量测序样品的前期处理方法。方法:用Life Technologies公司的Charge Switchg DNA Mini Bacteria Kit和Roche公司的High Pure PCR Template Preparation Kit提取制备困难的巨型球菌基因组DNA,然后通过添加溶葡球菌酶和增加溶菌酶、RNase A、Protein K的投入量及延长消化时间优化2个试剂盒,对4种方法提取的细菌基因组DNA进行浓度、纯度和基因组完整性测定,选取质量良好的基因组进行高通量测序。结果:改良后的2个试剂盒提取的巨型球菌DNA浓度较高,分别达到78.4和67.8 ng/μL,可满足高通量测序的需求,并获得基因组全序列。结论:改良后的2种方法是提取制备困难的巨型球菌基因组DNA更好的方法。

关键词：高通量测序细菌基因组 DNA提取方法

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病原体感染及其免疫逃逸机制研究进展

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生物技术通讯 2016年第4期27卷 582-585页

作者：苏莉王慧安徽医科大学安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

病原体进入宿主后,可通过多种致病机制损伤机体。与此同时,病原体为维持其在宿主体内的生存繁殖,可通过各种方式逃避宿主免疫系统的攻击。简要介绍了病毒、细菌及寄生虫主要的感染及免疫逃逸机制。

关键词：病原体宿主免疫逃逸

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2.3.2.1c家系H5N1禽流感病毒在我国的持续传播与进化

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中国病原生物学杂志 2016年第2期11卷 97-102,115页

作者：王海明陈占强张振杰吕强韦庆娟童贻刚安小平孙淑红史卫峰山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 泰山医学院病原生物学研究所山东泰安271000 东营市林木植物保护站山东东营257091 泰山医学院公共卫生学院山东泰安271016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究我国流行的H5N1高致病性禽流感病毒的进化与传播。方法从山东一养鸭场采集鸭粪标本,进行甲型流感PCR检测和分型,对阳性标本进行全基因组序列测定。对获取的全基因组序列进行系统发育分析,并研究其基因组的分子特征。结果 PCR检... 详细信息

目的研究我国流行的H5N1高致病性禽流感病毒的进化与传播。方法从山东一养鸭场采集鸭粪标本,进行甲型流感PCR检测和分型,对阳性标本进行全基因组序列测定。对获取的全基因组序列进行系统发育分析,并研究其基因组的分子特征。结果 PCR检测有4份标本甲型流感病毒阳性,均为H5亚型,命名为A/Duck/Shandong/1-14/2014(H5N1)。病毒HA基因系统发育分析表明该病毒属于2.3.2.1c家系。测序分析表明,该病毒除了PB2基因来自H9N2亚型外,其余7个基因均来自H5N1。该毒株与北美首例人感染H5N1和造成2015年1月河南三门峡野鸟疫情的毒株属于同一个基因型。尚未发现该基因型毒株在关键氨基酸位点发生变异。结论 2014年山东分离株HA属于2.3.2.1c家系,为一新近报道的基因型。该基因型病毒于不同时间在我国的北京、山东和河南等地家禽和野鸟中出现,表明其已具备了一定的适应性并在持续传播。因此,应对该病毒的传播进行持续监测。

关键词： H5N1 高致病性禽流感 2.3.2.1c家系病毒进化

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埃博拉病毒病治疗策略和新技术研究进展

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国际药学研究杂志 2015年第1期42卷 69-75,95页

作者：李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

埃博拉病毒(EBOV)能够引起人类高致死性埃博拉出血热,目前尚无安全有效的治疗策略和药物,但已经提出了一些对EBOV感染有显著疗效的候选治疗方法,包括混合单克隆抗体鸡尾酒疗法、多酶抑制剂和脂质纳米颗粒/小干扰RNA等。本文总结了在非... 详细信息

埃博拉病毒(EBOV)能够引起人类高致死性埃博拉出血热,目前尚无安全有效的治疗策略和药物,但已经提出了一些对EBOV感染有显著疗效的候选治疗方法,包括混合单克隆抗体鸡尾酒疗法、多酶抑制剂和脂质纳米颗粒/小干扰RNA等。本文总结了在非人灵长类等动物模型上针对EBOV感染的治疗新策略和技术研究进展。

关键词：埃博拉病毒单克隆抗体鸡尾酒疗法抗病毒疗法治疗策略

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鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码包涵体膜蛋白

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生物技术通讯 2016年第1期27卷 17-20页

作者：李鹏何君朱虹李岩伟于永慧端青宋立华病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 解放军第264医院山西太原030001

目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯... 详细信息

目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯化鹦鹉热衣原体的B598_0590蛋白,免疫小鼠制备抗血清;共聚焦免疫荧光观察鹦鹉衣原体在正常培养条件和使用Lpx C抑制剂时B598_0590基因的表达和定位。结果:衣原体属内12个种的基因组均含有CT135同源基因,它们编码的蛋白质有相似的疏水特征;B598_0590与CT135的氨基酸同源性为21%;B598_0590的免疫荧光染色特征与包涵体膜蛋白Inc A相似,浓染包涵体膜;Lpx C抑制剂可抑制网状体的分裂、包涵体的生长及网状体向原体转化,包涵体膜蛋白的染色呈现典型的空泡结构。结论:Lpx C抑制剂可用于鉴定未知的鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白;鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码此前尚未鉴定的包涵体膜蛋白。

关键词：鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白蛋白定位 CT135 B598_0590

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四例咽拭子检测阳性发热伴血小板减少综合征重症患者的临床特征分析？

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第1期23卷 21-27页

作者：胡建功彭伟孙毅崔宁郭辰涛卢庆彬杨振东王黎源张小爱刘玮军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第一五四医院河南信阳464000 北京大学公共卫生学院北京100191 安徽医科大学合肥230032 商城人民医院河南商城465350

通过疑似发热伴血小板减少综合征（ Severe fever with thrombocytopenia syndrome， SFTS）病例咽拭子的新型布尼亚病毒（SFTSV）检出情况，探讨SFTSV通过呼吸道传播的可能性。按照国家卫生部颁发的《发热伴血小板减少综合征防治指南（... 详细信息

通过疑似发热伴血小板减少综合征（ Severe fever with thrombocytopenia syndrome， SFTS）病例咽拭子的新型布尼亚病毒（SFTSV）检出情况，探讨SFTSV通过呼吸道传播的可能性。按照国家卫生部颁发的《发热伴血小板减少综合征防治指南（2010版）》中疑似病例的纳入标准，于2013年5～9月在SFTS高发区河南信阳的监测哨点医院收集72例疑似 SFTS 病例的血清和咽拭子标本，采用实时 RT-PCR 方法和ELISA方法检测SFTSV。结果显示，在72例疑似SFTS病例中，52（72.2％）例检测是SFTSV阳性，其中46例核酸RT-PCR检测阳性，6例血清ELISA检测阳性。在52例SFTSV阳性病例中，4（7.7％）例咽拭子核酸检测SFTSV阳性；在20例SFTSV阴性病例中，咽拭子核酸均未检测到SFTSV。4例咽拭子SFTSV阳性病例均为重症，同时都伴有咳嗽症状，其病毒载量最高可达108 copies／mL。 SFTSV在患者的咽拭子中可以检测到，咽拭子核酸检测SFTSV阳性检出率远低于血清标本，其作为检测SFTSV的可行性值得商榷。咽拭子检测SFTSV阳性患者体内病毒载量高且伴有咳嗽症状，加大了SFTSV通过呼吸道传播的风险。

关键词：发热伴血小板减少综合征 RT-PCR 传播途径咽拭子

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