检索结果-内蒙古大学图书馆

解放军医学杂志 2014年第6期39卷 429-432页

作者：曹文媛叶青李晓峰王洪江朱舜亚秦鄂德江振友秦成峰暨南大学医学院微生物学与免疫学系广州510632 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RN... 详细信息

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5%CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定。结果成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性。结论通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础。

关键词：微RNAs 脑炎病毒,日本感染性克隆疫苗

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基于上转换发光技术的尿液中吗啡及甲基苯丙胺快速定量检测方法研究

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刑事技术 2015年第1期40卷 28-34页

作者：刘晓林承喜张平平杨笑熳赵勇李春凤孙崇云邱景富杨瑞馥周蕾重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中海智(北京)科技有限公司北京100027 中国人民解放军总医院北京100853

目的利用上转换发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种尿液中吗啡（MOP）及甲基苯丙胺（MET）快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP... 详细信息

目的利用上转换发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种尿液中吗啡（MOP）及甲基苯丙胺（MET）快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP及MET进行定量检测的UPT-LF,即MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF。以MOP-UPT-LF为代表,评价UPT-LF对痕量毒品检测极限,通过系列浓度标准品测定,评价定量检测能力。根据常规检测阈值,调整MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF检测敏感性及线性范围,并评价其定量检测能力。以LC-MS、GC-MS分别作为MOP、MET检测的金标准,以胶体金免疫层析作为对照,对执法现场收集尿样进行检测,确定UPT-LF定性检测性能。对系列浓度MOP模拟阳性样本同时进行LC-MS及MOP-UPT-LF定量检测,对系列浓度MET模拟阳性样本同时进行GC-MS及MET-UPT-LF定量检测,评价UPT-LF定量检测性能。结果在痕量检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性可达1ng/m L,线性范围为1~5000ng/m L（r=-0.98172,P〈0.0005）。在常规检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性为50ng/m L,线性范围调整为50~3000ng/m L（r=-0.98464,P〈0.0005）;MET-UPT-LF敏感性为100ng/m L,线性范围为100~5000ng/m L（r=-0.99964,P〈0.0005）。就定性检测而言,MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF均较优,灵敏度及特异度均为100%,与胶体金结果一致。就定量检测而言MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF与定量确证方法LC-MS及GC-MS无显著差异。结论本研究建立MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF方法,在满足快筛试剂快速简便的基础上,进一步实现了现场快速定量检测,为尿液中毒品的现场快速定量检测提供了技术保障。

关键词：法医毒物学上转换发光技术免疫层析吗啡甲基苯丙胺快速定量检测尿液

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基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光技术特异定量检测金黄色葡萄球菌

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生物工程学报 2014年第8期30卷 1283-1290页

作者：李玉元米志强安小平周育森童贻刚广西医科大学广西南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量... 详细信息

基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量检测金黄色葡萄球菌并与平板计数对比。成功表达了重组溶葡球菌酶,并建立了特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法,与平板计数具有显著线性关系。本研究建立的将重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法相结合的检测方法操作快捷简单,具有良好的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌重组溶葡球菌酶 ATP生物发光特异和定量检测

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用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定

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中华肝脏病杂志 2014年第10期22卷 747-751页

作者：张伟代晓朋于虹王鲁燕孙世惠李军锋周育森解放军八八医院肝病中心二区军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303... 详细信息

目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303-TGFβl；以基因组DNA为模板，克隆COLlAl启动子，插入报告基因载体pGL4.29，构建含COLlAl启动子的报告基因载体pGL4.29-COLlAl promoter。上述重组载体鉴定使用酶切和序列测定。将pcDNA3.1-TGFβ1或pJW4303-TGFβ1与pGL4-COLlAl promoter、内参报告基因载体pRL-null共转染入肝星形细胞系LX-2中，构建转录激活的双报告基因系统。使用地塞米松鉴定该双报告基因系统评价抗肝纤维化药物的有效性。组间比较用Studant t检验分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果成功构建TGFβ1的两种真核表达载体和含COLlAl启动子的报告基因载体。通过双报告基因检测两种方式表达TGFβ1对COLlAl启动子活性的影响，结果表明：分泌表达的TGFβ1使cOLlAl启动子活性提高200倍以上（t=21.78，P=0.0001），非分泌表达的TGFβ1仅使cOLlAl启动子活性提高了不到2倍t=3.396，P=0.0274）。成功构建了转录激活的双报告基因系统。用COLlAl表达抑制剂地塞米松作为模式药物来鉴定该系统的有效性，结果显示地塞米松对COLlAl启动子有抑制作用，且呈有剂量依赖性。结论成功构建了用于筛选和评价抑制COLlAl表达的抗肝纤维化药物的双榀告基因系统并答定该系统的有效件．

关键词：肝硬化转化生长因子β1 I型胶原α1链基因

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蜱虫叮咬所致红肉过敏

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中华临床免疫和变态反应杂志 2015年第1期9卷 44-48页

作者：祝戎飞陈浩孙劲旅文利平江佳富华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科武汉430030 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院变态反应科北京100730 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治... 详细信息

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治疗及预后等方面综述蜱虫叮咬所致红肉过敏的研究进展,以期为临床提供参考。

关键词：蜱虫红肉过敏 α-半乳糖

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副溶血弧菌ToxR截短体蛋白的表达纯化及其DNA结合活性

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微生物学报 2014年第8期54卷 956-961页

作者：胡小许张义全黄倩王丽杨瑞馥黎晓敏周冬生钟青萍华南农业大学食品学院广东广州510642 北京军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 西南大学动物科技学院重庆400715

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片段,并将其直接克隆入pET28a中,获得重组质粒;将重组质粒导入大肠杆菌BL21λDE3中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出His-ToxR-N蛋白。利用限制级凝血酶切除His-ToxR-N中的His-标签,进而以VP的calR和VP1687为靶基因,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)验证ToxR-N蛋白的DNA结合活性。分别构建克隆有calR和VP1687上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入野生株(WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中靶基因启动子活性,以验证ToxR对calR和VP1687的调控关系。【结果】成功表达出有活性的ToxR-N蛋白,该蛋白对calR启动子区具有结合活性。LacZ结果显示ToxR对calR的转录具有激活作用,而对VP1687的转录具有抑制作用。【结论】所表达的ToxR-N可用于后续的转录调控机制研究;ToxR通过直接激活calR的转录表达,而间接抑制T3SS1相关基因的表达。

关键词：副溶血弧菌 ToxR DNA结合活性转录调控

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AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成

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微生物学报 2014年第5期54卷 525-531页

作者：黄倩张义全胡小许王丽杨瑞馥钟青萍周冬生黎晓敏西南大学动物科技学院重庆400715 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广东广州510642

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT... 详细信息

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。

关键词：副溶血弧菌生物膜形成 c—di—GMP AphA scrABC scrG

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利用高通量测序快速检测H7N9禽流感病毒及基因组序列分析

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1033-1038页

作者：裴广倩范航安小平王伟徐晓蒙史套兴童贻刚安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法。方法分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,cDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检... 详细信息

目的探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法。方法分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,cDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检测出禽流感病毒,拼接出的基因组序列可以进行生物信息学分析。结论利用高通量测序技术可以快速地检测H7N9禽流感病毒,并可用生物信息学软件拼接基因组序列及进行序列分析。

关键词：高通量测序 H7N9禽流感病毒生物信息学分析

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副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用

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南方医科大学学报 2014年第1期34卷 70-74页

作者：陈振鸿王丽张义全冯娇杨瑞馥常德安莉刘长庭周冬生解放军总医院南楼呼吸科北京100853 重庆医科大学检验医学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和a... 详细信息

目的建立以pBAD33质粒为载体的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)基因回补实验平台。方法 PCR扩增aphA和opaR的整个ORF区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建重组质粒。分别将重组质粒转入到ΔopaR和ΔaphA中(分别代表opaR和aphA的突变株),以构建出相应的回补株C-ΔaphA和C-ΔopaR。分别在aphA和opaR基因内设计特异性引物,采用RT-PCR方法,验证在相应的回补突变株中aphA和opaR是否转录。利用引物延伸实验研究野生株(WT)、ΔopaR、ΔaphA、C-ΔaphA和C-ΔopaR中mfpA(aphA负调控,opaR正调控其表达)的相对RNA水平。结果 aphA和opaR在相应的回补株中发生转录;且mRNA水平与野生株一致。结论成功建立了以pBAD33质粒为载体的VP基因回补方法,并得到应用。

关键词：副溶血弧菌基因回补 pBAD33 aphA opaR

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艰难梭菌鞭毛帽蛋白的功能研究

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安徽医科大学学报 2014年第11期49卷 1582-1586页

作者：王德慧谭林林王琴陈芳红李涛王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所微生物组学与生物信息学研究室合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性。方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21（DE3）中,... 详细信息

目的验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性。方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21（DE3）中,诱导表达,Ni2＋亲和层析纯化,进行N端测序验证。蛋白3次皮下免疫大耳白兔后间接ELISA法检测其血清特异IgG水平并鉴定抗原性。间接免疫荧光染色后流式细胞术检测黏附Vero细胞能力。结果 VPI10463的fliD基因钓取成功,与GenBank公布的其他9株艰难梭菌的fliD基因相似度在89%～100%。pET-22b-fliD表达质粒构建成功,表达蛋白大小为56 ku,N端测序序列为MSSIS,与预期一致。一步纯化得到的蛋白纯度为99%以上。ELISA检测3次免疫后效价达到105。用流式细胞术检测其可以黏附在Vero细胞表面。结论构建的pET-22bfliD表达质粒成功表达FliD,具有黏附细胞活性,在艰难梭菌感染过程中起黏附因子作用,其具有较高的抗原性可以作为预防艰难梭菌感染的候选抗原之一。

关键词：艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD 重组表达流式细胞术黏附因子

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