检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2014年第2期21卷 104-109页

作者：阎婷李海滔赵明慧苏建新董言德李春晓赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本文克隆白蚊伊蚊气味受体基因OR21a分析其是否与搜寻宿主或吸血行为相关。通过设计简并引物，PCR扩增得到白纹伊蚊气味受体基因OR21a段，采用SYBR荧光定量PCR方法，以自纹伊蚊β-肌动蛋白基因作为内参，比较了OR21a因在未吸血雌蚊、雄... 详细信息

本文克隆白蚊伊蚊气味受体基因OR21a分析其是否与搜寻宿主或吸血行为相关。通过设计简并引物，PCR扩增得到白纹伊蚊气味受体基因OR21a段，采用SYBR荧光定量PCR方法，以自纹伊蚊β-肌动蛋白基因作为内参，比较了OR21a因在未吸血雌蚊、雄蚊、打断吸血雌蚊和饱血雌蚊头部表达量的差异。结果显示，白纹伊蚊OR21a因在未吸血雌蚊头部表达量最高，饱血雌蚊头部表达量最低，而在雄蚊头部的表达量介于打断吸血雌蚊和饱血雌蚊之间。本研究发现白蚊伊蚊会依据不同的生理需求改变OR21a因的表达量，推测可能与白纹伊蚊搜寻宿主及吸血行为有一定的相关性。

关键词：白纹伊蚊气味受体基因OR21α 定量PCR 吸血行为

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具备中和中东呼吸综合征冠状病毒活性的单克隆抗体的制备

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解放军预防医学杂志 2014年第5期32卷 388-390页

作者：于虹邱洪杰潘婷李琳唐健郭彦孙世惠寇志华赵光宇周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BAL... 详细信息

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-CoV假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。结果获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类均为IgG1;其中7株单抗抗体ELISA效价达到10 000以上,并有1株单抗对MERS-CoV具有良好的中和活性。结论本研究获得了1株对MERSCoV具有良好中和活性的单克隆抗体。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒单克隆抗体中和活性受体结合区

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毒素战剂的生防疫苗

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生物技术通讯 2014年第1期25卷 107-111页

作者：张弢王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

毒素战剂是重要的生物战剂之一,其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的防治手段。在毒素战剂中,肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素等属于致死性生物战剂,葡萄球菌肠毒素B属于失能性生物战剂。生防疫苗作为毒素战剂的一种重要... 详细信息

毒素战剂是重要的生物战剂之一,其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的防治手段。在毒素战剂中,肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素等属于致死性生物战剂,葡萄球菌肠毒素B属于失能性生物战剂。生防疫苗作为毒素战剂的一种重要的有效预防手段,一直备受关注,但目前绝大部分毒素战剂的疫苗都还在研制中,随着分子生物学技术的快速发展,几种重要毒素战剂的重组疫苗研究已获得重要突破。我们重点介绍肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素、葡萄球菌肠毒素B等毒素战剂生防疫苗的研究与发展。

关键词：毒素生物战剂疫苗

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血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS-1细胞中的转染

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军事医学 2014年第12期38卷 927-931,935页

作者：李晓静刘敏王妍户义尹士男母义明解放军总医院第一附属医院内分泌科北京100048 解放军总医院内分泌科北京100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-C... 详细信息

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-CMV-EGFP,并测定病毒滴度。在INS-1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP的滴度分别为9×109和8×109pfu/ml。在INS-1细胞中转染Ad-GAT2R-EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值(P<0.05),同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad-CMV-EGFP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS-1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

关键词：受体,血管紧张素,2型腺病毒科人胚胎肾293A细胞大鼠胰岛素瘤INS-1细胞

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基于上转发光免疫层析技术快速检测单核细胞增生李斯特菌

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军事医学 2014年第9期38卷 729-732页

作者：刘旭李春凤王晓英冯娜杨瑞馥王成彬周蕾军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京热景生物技术有限公司北京102600 解放军总医院临床检验科北京100853 海军总医院内分泌科北京100048

目的建立可快速检测单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）的上转发光免疫层析技术（up-converting phosphor technology based lateral flow assay,UPT-LF）,即LM-UPT-LF。方法针对LM特异的p60蛋白制备单克隆抗体,并与上转发光纳米颗粒（up-converting phosphor nanoparticles,UCP-NPs）共价偶联作为结合物,采用双抗体夹心免疫层析模式建立LM-UPT-LF,并对其敏感性与特异性进行评价。结果建立了可快速检测LM的LM-UPT-LF平台,在样本〈10 cfu、10~99 cfu、100~1000 cfu绝对LM污染量条件下可分别在培养20、18、16 h检出阳性。其他13种食源性致病菌在高浓度（109cfu/ml）时无非特异性交叉。结论所建立的LM-UPT-LF操作简便快速,具有良好的敏感性和特异性,适用于一线病原调查与检测。

关键词：上转发光纳米颗粒上转发光免疫层析技术单核细胞增生李斯特菌

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甲型H7N9流感裂解疫苗制备及免疫保护效果的评价

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免疫学杂志 2014年第7期30卷 608-611页

作者：陈锐段跃强赵忠鹏张良艳邢丽刘娜张立周娅王希良杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学和免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院医疗部北京100039 总参警卫局卫生保健处北京100071

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8... 详细信息

目的构建、拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株并制备甲型H7N9流感裂解疫苗,动物实验评价甲型H7N9流感裂解疫苗的免疫原性及免疫保护性效果。方法采用反向遗传学技术将A/Anhui/1/2013(H7N9)疫苗株的HA、NA基因和A/Puerto Rico/8/34(PR8)毒株的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因进行重配,转染细胞后筛选拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株,制备rgPR8-H7N9流感裂解疫苗抗原。腹腔注射免疫Balb/c小鼠,检测血清IgG、IgG1、IgG2a、HI效价,进一步用野生株攻毒,评价rgPR8-H7N9流感裂解疫苗的免疫保护效果。结果成功拯救甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9。制备的重配甲型H7N9流感裂解疫苗对小鼠产生较高的HI抗体效价。IgG1/IgG2a亚型检测结果表明小鼠体内以诱导体液免疫为主。攻毒实验显示甲型H7N9流感裂解疫苗能够有效降低肺部的病毒载量,肺组织病变显著减轻、体质量下降后趋于稳定,疫苗剂量达到15μg即可全部存活。A/Anhui/1/2013(H7N9)野生株流感病毒攻毒,甲型H7N9流感裂解疫苗能够达到保护小鼠效果。结论成功拯救重配甲型H7N9流感病毒疫苗候选株rgPR8-H7N9,制备的甲型H7N9流感裂解疫苗具有较好的免疫原性及免疫保护性,为H7N9流感裂解疫苗的研发及进入临床研究提供了实验依据。

关键词：反向遗传学 H7N9流感病毒裂解疫苗免疫保护性

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新型免疫实验动物人MHC转基因小鼠模型研究

新型免疫实验动物人MHC转基因小鼠模型研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

人MHC转基因小鼠模型作为新型实验动物模型能有效反映人体细胞免疫反应特征;针对人群MHC优势基因型的转基因小鼠模型不仅对新型疫苗研究具有极大推动作用,而且对免疫基础研究和疾病模型建立、临床免疫治疗和评价等具有重要的意义。本文... 详细信息

人MHC转基因小鼠模型作为新型实验动物模型能有效反映人体细胞免疫反应特征;针对人群MHC优势基因型的转基因小鼠模型不仅对新型疫苗研究具有极大推动作用,而且对免疫基础研究和疾病模型建立、临床免疫治疗和评价等具有重要的意义。本文对人MHC转基因小鼠模型的研究状况及进展进行了分析和简要综述。同时报告了针对我国人群MHC限制性特征研发的2种人MHC转基因小鼠(HLA-A2/DP4转基因小鼠和HLA-A11/DR1转基因小鼠)的研究结果。我们课题组构建

关键词：小鼠模型免疫实验 MHC

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钌红染色观察猪链球菌荚膜超微结构研究

钌红染色观察猪链球菌荚膜超微结构研究

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第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议、第八届全军定量病理学学术会议

作者：吴小红郝淮杰李豫川严格田光姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

荚膜是某些细菌的特殊结构,具有黏附、抗吞噬作用,与细菌的致病性有关,在细菌的鉴定中有重要意义。猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的重要致病菌,可以引起脑膜炎、败血症、心内膜炎、关节炎、肺炎等疾病,也可导致生猪从业人员感染... 详细信息

荚膜是某些细菌的特殊结构,具有黏附、抗吞噬作用,与细菌的致病性有关,在细菌的鉴定中有重要意义。猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的重要致病菌,可以引起脑膜炎、败血症、心内膜炎、关节炎、肺炎等疾病,也可导致生猪从业人员感染和死亡。根据其荚膜抗原的不同,猪链球菌分为33个血清型。钌红可作为电镜组织学用着色剂,与戊二醛一同使

关键词：猪链球菌微结构

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人肠道病毒71型VP1蛋白特异中和抗体的制备与鉴定

人肠道病毒71型VP1蛋白特异中和抗体的制备与鉴定

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：邓永强马洁徐莉娟李月香赵慧韩剑锋姜涛李晓峰朱舜亚田雪秦鄂德秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的制备和鉴定人肠道病毒71型(EV71)特异的中和抗体。方法首先,采用常规方法制备获得分泌EV71特异单抗的杂交瘤细胞系。然后,采用IFA、间接ELISA、Western Blot和Dot Blot分别鉴定抗体的生物学特征;采用微量中和法和乳鼠保护实验观察... 详细信息

目的制备和鉴定人肠道病毒71型(EV71)特异的中和抗体。方法首先,采用常规方法制备获得分泌EV71特异单抗的杂交瘤细胞系。然后,采用IFA、间接ELISA、Western Blot和Dot Blot分别鉴定抗体的生物学特征;采用微量中和法和乳鼠保护实验观察抗体的体内外中和活性。最后,采用丙氨酸扫描突变法和反向遗传学构建的突变病毒确认与抗体结合和中和密切相关的氨基酸位点。

关键词：中和抗体人肠道病毒 VP1 制备与鉴定

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嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株构建及免疫效果研究

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免疫学杂志 2014年第5期30卷 375-381页

作者：刘娜卞成蓉陈锐段跃强邢丽周娅王希良杨鹏辉宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室银川750004 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军第302医院医疗科北京100039 解放军第302医院临床检验中心北京100039

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组... 详细信息

目的构建、拯救以PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的疫苗候选株,对其免疫原性及免疫保护性进行评价。方法应用反向遗传学技术,以流感病毒PR8为载体,将HAdV六邻体蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非结构蛋白NS基因,构建重组质粒NS1-Hexon,将重组质粒与PR8流感病毒其他7个基因组质粒共转染COS-1/MDCK共培养细胞,成功拯救嵌合HAdV六邻体抗原表位重组疫苗候选株,命名为rFLU/HAdV/Hexon,通过HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和电镜等方法对rFLU/HAdV/Hexon进行鉴定。rFLU/HAdV/Hexon经鸡胚培养、浓缩纯化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价小鼠机体产生的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,进一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻击小鼠评价其免疫保护性。结果成功拯救出基于PR8流感病毒为载体嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候选株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形态符合流感病毒典型特征,能够诱导小鼠机体产生高效价的针对PR8和HAdV-3的特异性抗体,肺鼻灌洗液可检测到高效价的sIgA抗体;攻毒实验结果显示,rFLU/HAdV/Hexon疫苗株免疫小鼠可明显减轻感染症状、有效降低肺鼻的病毒载量、显著改善肺组织的病理病变情况。结论研制的嵌合HAdV六邻体蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗株是有发展前景的腺病毒候选疫苗株,为腺病毒疫苗的研究提供了新思路。

关键词：腺病毒 PR8流感病毒载体六邻体蛋白抗原表位免疫应答免疫保护

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