检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2012年第9期36卷 658-661,672页

作者：韩伟谭亚芳杨慧盈郭兆彪杨瑞馥伏小平杜宗敏甘肃农业大学动物医学院兰州730070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报... 详细信息

目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报告基因载体。把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达。将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2 h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果。结果与结论应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能。本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础。

关键词：鼠疫耶尔森菌 T3SS β-内酰胺酶报告基因质粒聚合酶链反应

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虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展

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军事医学 2012年第1期36卷 70-72页

作者：周希珍赵慧高岚秦成峰兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5... 详细信息

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应。NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注。本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展。

关键词：虫媒黄病毒 NS5 RNA依赖的RNA聚合酶甲基转移酶干扰素反应

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一种多因子组合型空气净化器对微生物气溶胶净化效果的测试

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中国消毒学杂志 2012年第5期29卷 367-369页

作者：温占波王洁李劲松胡凌飞杨文慧李娜董晓凯鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心北京100071

目的评价一种多因子组合型空气净化器对实验产生的细菌、真菌气溶胶的净化效果。方法通过在气溶胶密闭测试柜内人工发生细菌、真菌气溶胶,采用安德森微生物采样器采样和检测方法,评价该组合型空气净化器对空气中细菌、真菌净化效果。结... 详细信息

目的评价一种多因子组合型空气净化器对实验产生的细菌、真菌气溶胶的净化效果。方法通过在气溶胶密闭测试柜内人工发生细菌、真菌气溶胶,采用安德森微生物采样器采样和检测方法,评价该组合型空气净化器对空气中细菌、真菌净化效果。结果在本实验条件下,产生的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等3种微生物气溶胶发生量为(220～228)μl/min;此3种微生物气溶胶粒子数量中值直径分别为1.79μm、1.94μm和1.60μm。本试验多因子组合型空气净化器对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌气溶胶的净化效率(除菌率)分别为99.23%、99.69%和99.70%。结论本实验室人工产生的细菌、真菌气溶胶符合试验要求,所检测的多因子组合型空气净化器对3种试验菌气溶胶净化效果均达到99%以上。

关键词：空气净化器微生物气溶胶净化效果

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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272的表达、纯化及生物活性分析

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中国人兽共患病学报 2012年第5期28卷 457-460页

作者：陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇任志强王涛姜永强吕淑霞沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行... 详细信息

目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行纯化。实时定量PCR方法检测纯化后的SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后其细胞因子的转录水平变化。结果制备的SSU05_0272蛋白具有较高的纯度,RT-PCR结果显示,SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后能上调IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β的表达,下调IL-12P40的表达。结论 SSU05_0272蛋白能够调控促炎症细胞因子和趋化因子转录水平变化,提示其在猪链球菌致炎症反应中起重要作用。

关键词：猪链球菌 SSU05_0272 细胞因子

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甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白质组学参考图谱的建立

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军事医学 2012年第9期36卷 652-657页

作者：王斌朱力李娜梁昊宇王恒樑陈薇曾明军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007

目的建立甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱。方法甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973培养至对数生长末期,收集菌体并破碎提取细菌的外膜蛋白,然后利用双向电泳(2-DE)将蛋白分离。分离后取蛋白点做MALDI-TOF-MS鉴定,根据质谱得到... 详细信息

目的建立甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱。方法甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973培养至对数生长末期,收集菌体并破碎提取细菌的外膜蛋白,然后利用双向电泳(2-DE)将蛋白分离。分离后取蛋白点做MALDI-TOF-MS鉴定,根据质谱得到的肽指纹图谱在Mascot数据库中查询出匹配的蛋白。结果在2-DE考马斯亮蓝染色凝胶上取77个蛋白点,鉴定成功了54个点,对应29种蛋白。29种蛋白中定位于外膜为13种,定位未知的有11种,胞质中有5种。结论成功建立了甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱,为进一步筛选疫苗抗原打下了基础。

关键词：沙门菌,甲型副伤寒细菌外膜蛋白质类双向电泳蛋白质组学

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从大容量噬菌体抗体库中筛选抗Acr蛋白人源单链抗体

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中国生物工程杂志 2012年第9期32卷 22-27页

作者：王晓娜米志强安小平李建彬范华昊张文慧张博黄勇周丽君童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军海军总医院中心研究室北京100037

目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白(alpha-crystallin Acr)的人源抗体。方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的过程从大容量抗体库中筛选特... 详细信息

目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白(alpha-crystallin Acr)的人源抗体。方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的过程从大容量抗体库中筛选特异性抗结核分枝杆菌Acr蛋白的抗体,并对可变区序列进行了测序分析。将特异性的噬菌体抗体感染HB2151菌,经IPTG诱导表达,制备了抗结核分枝杆菌Acr蛋白的可溶性单链抗体;对其序列和抗原结合活性进行分析鉴定。结果:经过4轮筛选,获得了43个与结核分枝杆菌Acr蛋白结合的阳性克隆,其中29个特异结合的克隆;测序分析有26不同的可变区片段;通过可溶性单链抗体(scFv)表达筛选到14株特异性结合Acr蛋白的可溶性单链抗体克隆;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。成功制备了可溶性单链抗体。Westren blotting分析证实筛选的人源单链抗体能与天然蛋白结合。结论:利用单链大容量抗体库获得抗结核分枝杆菌Acr蛋白的噬菌体抗体并且成功制备抗结核分枝杆菌Acr天然蛋白的可溶性单链抗体,为今后的研究和应用奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Acr 蛋白噬菌体抗体库单链抗体

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河南蚋属一新种(双翅目:蚋科)(英文)

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第3期 178-180页

作者：郭晓霞严格安继尧军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物学生物安全国家重点实验室

本文记述河南省蚋属Simulium蚋亚属subgenus Simulium一新种,南阳蚋S.(Simulium)nangyangense ***.该蚋与S.(S.)jacuticum Rubtsov 1940,S.(S.)hirtipannus Puri,1932,S.(S.)spiculus Chen,Huang et Yang,2010蚋相似,但是,该新种的爪无基齿,茧无孔窗,腹部腹面第七节无分叉毛,与其他种有明显不同。模式标本保存在北京军事医学科学院医学昆虫标本馆。

关键词：双翅目蚋科蚋属蚋亚属新种

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基于随机聚合酶链反应的病原菌基因芯片检测技术

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军事医学 2012年第4期36卷 304-308页

作者：高兴曲险峰孙伟李华宇辛文文李箐王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军63850部队防疫检验及环境监测所吉林白城137001

目的建立一种基于随机聚合酶链反应的病原细菌基因芯片筛查检测技术。方法用生物学软件分析7种病原菌特异性基因序列的保守性区域,利用Oligo 6.0软件设计针对靶细菌的一系列探针,制备检测用基因芯片。细菌基因组DNA在随机引物扩增中掺... 详细信息

目的建立一种基于随机聚合酶链反应的病原细菌基因芯片筛查检测技术。方法用生物学软件分析7种病原菌特异性基因序列的保守性区域,利用Oligo 6.0软件设计针对靶细菌的一系列探针,制备检测用基因芯片。细菌基因组DNA在随机引物扩增中掺入氨基丙烯-dUTP,产物偶联荧光染料后与芯片上探针杂交,通过芯片扫描仪和图像分析软件对结果进行判断。选取19种病原菌基因组DNA进行芯片特异性验证和灵敏度评价,使用问号钩端螺旋体对应靶探针进行基因芯片检测方法重复性验证,并制备问号钩端螺旋体模拟水污染样本进行芯片检测。结果在均一的杂交条件下4种靶细菌均能得到相应特异性杂交图谱,其他非目的细菌均为阴性结果,3种靶细菌基因组DNA最低检测浓度为14.43～363.4 pg/μl,芯片重复性变异系数CV值<15%,最低可检测含问号钩端螺旋体7×105条/ml模拟水污染样本。结论初步建立的随机聚合酶链反应结合芯片技术的检测方法可用于多种病原菌筛查检测,为细菌高通量筛查与鉴定技术提供了新的思路和实验依据。

关键词：细菌基因芯片特异基因随机聚合酶链反应

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猪链球菌胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第5期28卷 500-502页

作者：陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇姜永强吕淑霞沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的:研究猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。方法:采用免疫荧光、实时定量PCR、Western blot等方法从基因转录和表达水平研究SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。结果:实时定量PCR结... 详细信息

目的:研究猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。方法:采用免疫荧光、实时定量PCR、Western blot等方法从基因转录和表达水平研究SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控。结果:实时定量PCR结果显示SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的表达;免疫荧光和免疫印迹结果也显示,SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的含量。结论:SSU05_0272调控人脑微血管内皮细胞β-catenin的表达。

关键词：猪链球菌人脑微血管内皮细胞 SSU05_0272 β-catenin

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重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的表达

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郑州大学学报（医学版） 2012年第4期47卷 450-453页

作者：张红飞李军锋户义张慧娜鲍春旸王凯娟周育森郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型。方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经... 详细信息

目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型。方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况。RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达。根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率。将病毒感染人肝癌HepG2细胞,48h后收集裂解细胞,Westernblot检测HBx蛋白的表达。结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功。将pAd-HBx转染到QBI-293A细胞,荧光检测提示病毒获得成功包装,RT-PCR检测到细胞中HBx基因的表达。重组病毒感染人肝癌HepG2细胞,Westernblot检测到HBx蛋白表达。结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒,感染肝癌HepG2细胞后检测到了HBx蛋白的表达,提示建立了HBx高表达的细胞模型,为后续的HBx的功能研究奠定了基础。

关键词：腺病毒载体 HBx基因肝癌细胞

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