检索结果-内蒙古大学图书馆

寄生虫与医学昆虫学报 2012年第3期19卷 176-178页

作者：张晓龙孙毅刘宇夫赵文王静中国检验检疫科学研究院北京100123 勐腊出入境检验检疫局云南勐腊666300 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

本文记述了我国麻虻属毛股麻虻组Haematopota pilosifemura group一新纪录一突缘麻虻Haematopota procyon Stone et Philip，1974。标本保存于军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

关键词：突缘麻虻毛股麻虻组新纪录

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猪链球菌2型与宿主细胞体外相互作用研究进展

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现代生物医学进展 2012年第36期12卷 7196-7200页

作者：付忠琳马世良袁媛纪颖霍春月沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学燕京医学院北京101300

猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,SS2)是一种世界范围内的引起猪链球菌病的重要的人兽共患病原菌,人感染SS2后多呈现败血症型和脑膜炎型。2005年猪链球菌在我国四川省的感染暴发和近年来不断出现的零散病例给我国的公共卫生... 详细信息

猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,SS2)是一种世界范围内的引起猪链球菌病的重要的人兽共患病原菌,人感染SS2后多呈现败血症型和脑膜炎型。2005年猪链球菌在我国四川省的感染暴发和近年来不断出现的零散病例给我国的公共卫生和食品安全带来了威胁,但迄今为止,对SS2致病机制研究尚不够深入。SS2的致病过程和宿主细胞相互作用密切相关,SS2-体外宿主细胞相互作用模型的建立对于揭示SS2致病分子机理具有重要的意义。目前的研究报道主要是从猪链球菌黏附与侵袭上皮细胞或内皮细胞、猪链球菌抗吞噬细胞的吞噬和猪链球菌激活免疫细胞炎症反应方面研究猪链球菌与宿主细胞的相互作用,但与其他常致病性链球菌如化脓性链球菌和肺炎链球菌相比,有些SS2-体外宿主细胞相互作用模型还缺乏统一的标准,由于感染模型的实验参数不尽相同得到结果也有所不同。本文对近年来猪链球菌2型与宿主细胞体外相互作用及其致病机理研究进展作一综述。

关键词：猪链球菌2型(SS2) 病原菌-宿主相互作用黏附与侵袭炎症

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葡萄球菌肠毒素B突变体的构建及其抗肿瘤活性分析

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生物技术通讯 2012年第6期23卷 772-776页

作者：郑欣郑玉玲王君谷丽维吴应良江华沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 沈阳药科大学中药学院辽宁沈阳110016

目的:通过对葡萄球菌肠毒素B(SEB)32位His进行定点突变,获得抑瘤效果显著增强的SEB突变体。方法:利用基因定点突变的方法,将SEB的32位His替换为Asn,将重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,用CM弱阳离子层析柱纯化获得重组蛋白,用SDS-PAGE和W... 详细信息

目的:通过对葡萄球菌肠毒素B(SEB)32位His进行定点突变,获得抑瘤效果显著增强的SEB突变体。方法:利用基因定点突变的方法,将SEB的32位His替换为Asn,将重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,用CM弱阳离子层析柱纯化获得重组蛋白,用SDS-PAGE和Western印迹对其进行鉴定,并用增殖实验检测其丝裂原活性,通过MTS法检测其体外抗肿瘤活性。结果:构建并高效表达了突变体蛋白SEB(H32N),纯化获得了足够纯度的突变体蛋白;体外实验表明,在相同浓度下,SEB(H32N)的丝裂原活性及体外抗肿瘤活性明显优于野生型SEB。结论:同野生型SEB相比,突变体蛋白SEB(H32N)对肿瘤生长的抑制作用得到了提高。

关键词：葡糖球菌肠毒素B 突变体表达纯化抗肿瘤

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葡萄球菌肠毒素C2突变体的构建及其体外抗肿瘤活性分析

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生物技术通讯 2012年第5期23卷 631-634页

作者：王君郑玉玲郑欣谷丽维陈思维江华军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 沈阳药科大学中药学院辽宁沈阳110016

目的：利用基因定点突变的方法将葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）的31位定点突变,以获得抑瘤效果增强的肠毒素。方法：利用基因定点突变的方法,将SEC2中31位的His用Asn替代,转入大肠杆菌中诱导表达,采用CM弱阳离子层析柱纯化蛋白,并用SDS-PAGE... 详细信息

目的：利用基因定点突变的方法将葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）的31位定点突变,以获得抑瘤效果增强的肠毒素。方法：利用基因定点突变的方法,将SEC2中31位的His用Asn替代,转入大肠杆菌中诱导表达,采用CM弱阳离子层析柱纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western印迹对其进行鉴定,通过MTS法检测其体外抗肿瘤活性。结果：构建了突变体蛋白SEC2（H31N）,并在大肠杆菌中实现了高效表达。体外实验表明,在相同浓度下,SEC2（H31N）对多种肿瘤细胞的抑制作用明显优于野生型SEC2,尤其在低浓度下此现象更为明显。对于5个受试细胞株,SEC2（H31N）的IC50均低于SEC2;SEC2（H31N）浓度分别为0.01~10、0.01和0.1 ng/mL时,对肿瘤细胞SMMC-7721、HepG2、A549的生长抑制率与SEC2相比均显著提高。结论：同野生型SEC2相比,突变体蛋白SEC2（H31N）对肿瘤生长的抑制作用得到了提高。

关键词：葡糖球菌肠毒素C2 超抗原突变体抗肿瘤

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抗禽流感病毒H5N1分泌型IgA在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

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生物工程学报 2011年第2期27卷 219-225页

作者：李存张宝中安小平米志强刘大斌姜焕焕潘博王盛陈斌黄芬王娟王晓娜童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转... 详细信息

分泌型IgA(SIgA)在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系为基础,共转染分泌片和J链表达质粒,然后用抗生素Zeocin选择阳性克隆细胞,利用倍比稀释的方法筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过Western blotting分析培养上清中SIgA的表达情况。结果表明,在CHO细胞中成功表达了SIgA抗体,上述研究为研制分泌型IgA抗体制剂奠定了良好的基础。

关键词：禽流感病毒H5N1 Western blotting SIgA抗体

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昆津病毒复制子——一种新型病毒载体

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生物工程学报 2011年第2期27卷 141-146页

作者：李世华李晓峰秦鄂德秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

病毒复制子(Replicon)是指来源于病毒基因组的能够自主复制的RNA分子,保留了病毒非结构蛋白基因,而结构蛋白基因缺失或由外源基因替代。昆津病毒(Kunjun virus)为黄病毒科黄病毒属成员,其复制子具有表达效率高、细胞毒性低、遗传稳定等... 详细信息

病毒复制子(Replicon)是指来源于病毒基因组的能够自主复制的RNA分子,保留了病毒非结构蛋白基因,而结构蛋白基因缺失或由外源基因替代。昆津病毒(Kunjun virus)为黄病毒科黄病毒属成员,其复制子具有表达效率高、细胞毒性低、遗传稳定等特点,在病毒基因组复制调控机制、外源蛋白表达、新型疫苗和基因治疗等领域得到了广泛应用。以下就昆津病毒复制子系统的构建、特性及应用方面的研究进展作一综述。

关键词：昆津病毒复制子 RNA病毒病毒载体

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构象稳定的破伤风毒素Hc片段突变体(HcM)的制备及其免疫原性分析

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生物工程学报 2011年第2期27卷 226-232页

作者：于蕊侯利华刘树玲于长明张晓艳刘颖陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工... 详细信息

破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工程破伤风亚单位疫苗以替换传统的甲醛灭活类毒素疫苗。由于野生型Hc蛋白(HcW)易形成分子间及分子内二硫键,且各构象分子之间易发生不稳定的转换,为疫苗的生产工艺带来困难,因此,通过将破伤风HcW蛋白的869位半胱氨酸突变为丙氨酸,构建构象稳定的破伤风亚单位疫苗突变体HcM,对HcM进行表达、发酵和纯化,研究其在不同条件下的稳定性,比较其与受体GT1b亲和力的变化及免疫原性。实验结果表明HcM在大肠杆菌中获得了高效可溶性表达,通过QXL柱、phenyl-Hs柱和source30Q柱三步纯化,可获得纯度95%以上的HcM蛋白。纯化后的HcM蛋白在不同保存条件下构象稳定且保持了与破伤风毒素受体GT1b结合的活性。免疫小鼠后,HcM能够诱导小鼠产生高滴度抗体并能够保护小鼠抵御1×103 LD50剂量的破伤风毒素攻击。以上结果表明构象稳定的HcM有望成为新的破伤风重组亚单位疫苗候选者,其生产工艺简单、稳定且保持了与野生型相似的免疫原性,不论是针对日常破伤风治疗还是对于国家应对突发事件(战争、地震等灾害)的药品储备均具有重大意义。

关键词：破伤风 HcM 构象稳定亚单位疫苗

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结核分枝杆菌分泌蛋白EspB在RAW264.7细胞中的稳定表达

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微生物学报 2011年第7期51卷 984-990页

作者：李浩殷瑛董大勇张军付玲任军徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重... 详细信息

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blot方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。【结果】EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,成功获得了能够稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系。【结论】本试验利用脂质体介导的方法,将构建的重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1转染至Raw264.7细胞系中,获得了稳定表达EGFP-EspB融合蛋白的巨噬细胞系,为阐明EspB分泌蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用以及EspB与巨噬细胞蛋白之间的相互作用提供了研究平台。

关键词： EspB EGFP RAW264.7 稳定转染表达

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从厩真厉螨中检出与猫立克次体近缘的立克次体核酸片段

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寄生虫与医学昆虫学报 2012年第3期19卷 136-140页

作者：姚李四刘勇先邵丽筠张晓龙杨宇王静徐宝梁王宝麟赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国检验检疫科学研究院北京100123 长白出入境检疫检疫局吉林长白134400 吉林出入境检验检疫局吉林长春130062

本研究用立克次体属特异的gltA和ompB基因扩增引物，从吉林长白县捕获鼠中分拣的534只厩真厉螨中扩得gltA和ompB基因片段。通过基因片段的序列测定、BLAST比对和系统发育分析，显示两个扩增基因与猫立克次体Rickettsia fells同源性最高... 详细信息

本研究用立克次体属特异的gltA和ompB基因扩增引物，从吉林长白县捕获鼠中分拣的534只厩真厉螨中扩得gltA和ompB基因片段。通过基因片段的序列测定、BLAST比对和系统发育分析，显示两个扩增基因与猫立克次体Rickettsia fells同源性最高（99％），证明该地区厩真厉螨携带与猫立克次体近缘的立克次体。

关键词： Rickettsia falis 厩真厉螨 gltA基因 ompB基因

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稳定表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的RAW264.7细胞系的建立

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生物工程学报 2011年第9期27卷 1390-1396页

作者：李浩殷瑛董大勇张军付玲蔡晨光王猛徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为研究结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis分泌蛋白ESAT-6(Early secreted antigenic target of 6 kDa)对巨噬细胞相关功能的影响,将正确构建的重组质粒pEGFP-C1-ESAT-6和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-ESAT6融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blotting方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。结果证实EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,为后续的ESAT-6调控巨噬细胞机理研究提供了平台。

关键词： ESAT-6 RAW264.7 稳定转染表达

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