检索结果-内蒙古大学图书馆

中国媒介生物学及控制杂志 2011年第2期22卷 107-109页

作者：张映梅姜淑芳郭晓霞董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军总医院

目的研究我国埃及伊蚊传播西尼罗病毒的潜在能力。方法人工配制病毒血餐感染埃及伊蚊并进行传播实验,应用反转录聚合酶链反应(RT?PCR)、病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)检测蚊虫和来亨鸡体内病毒。结果动物实验结果表明敏感动物来亨鸡感... 详细信息

目的研究我国埃及伊蚊传播西尼罗病毒的潜在能力。方法人工配制病毒血餐感染埃及伊蚊并进行传播实验,应用反转录聚合酶链反应(RT?PCR)、病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)检测蚊虫和来亨鸡体内病毒。结果动物实验结果表明敏感动物来亨鸡感染西尼罗病毒后,第2天其体内病毒量达到最高,说明进行传播实验后的第2天是检测传播是否成功的最佳时间。感染与传播实验结果表明埃及伊蚊对西尼罗病毒的感染率达到了63.3%,而且通过刺叮敏感动物(来亨鸡)能够传播该病毒,其传播率为30.0%。结论在未来我国可能的西尼罗热暴发中,埃及伊蚊可能成为其在海南等地的潜在传播媒介。

关键词：埃及伊蚊西尼罗病毒易感性传播

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甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2011年第6期27卷 470-474页

作者：高啸潘玉竹陈中伟邢丽刘坤王文娟杨鹏辉王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 重庆大学A区生物工程学院 400044

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot... 详细信息

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。

关键词：甲型H1N1 病毒样颗粒疫苗

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HIV-1N348I耐药突变流行状况及突变模式的研究

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中华流行病学杂志 2011年第9期32卷 908-912页

作者：李韩平韩扬朱新鹏路新利郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京协和医院感染科河南省疾病预防控制中心河北省疾病预防控制中心

目的阐明HIV-1耐药相关突变N348I在中国艾滋病患者中的流行率及突变模式。方法用RT-PCR从血浆标本中扩增614例治疗失败和619例未治疗的艾滋病患者的HIV-1po1基因蛋白酶（PR）反转录酶（RT）全长基因（2100bp）。将获得的1233条序列提交... 详细信息

目的阐明HIV-1耐药相关突变N348I在中国艾滋病患者中的流行率及突变模式。方法用RT-PCR从血浆标本中扩增614例治疗失败和619例未治疗的艾滋病患者的HIV-1po1基因蛋白酶（PR）反转录酶（RT）全长基因（2100bp）。将获得的1233条序列提交斯坦福大学HIV-1耐药数据库，根据数据库比对结果，分析N348I出现的频率及模式。结果N348I突变在抗病毒治疗失败患者中的流行率为6．5％，在未治疗患者中的流行率为0．8％。使用含齐多夫定（AZT）方案治疗的患者，N348I突变的流行率显著高于使用不含AZT方案治疗的患者（14．1％vs4．7％，x2=10．21，P〈0．01）；在出现N348I突变的接受治疗的患者中，N348I均以与其他突变联合的形式出现，与胸苷类似物耐药突变（TAMs）共同发生占85．0％（34／40）、与M184V／I共同出现占52．5％。结论使用一线方案治疗失败的艾滋病患者中，N348I突变有一定流行，该突变的发生以特有突变模式出现。

关键词：艾滋病毒1型耐药 N348I

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利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平

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中国生物工程杂志 2011年第8期31卷 92-96页

作者：陈斌李建彬米志强安小平李存刘大斌姜焕焕王娟黄芬张宝中范华昊何后军童贻刚江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广州510642

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后... 详细信息

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。

关键词：慢病毒载体报告基因基因表达定点突变

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黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第1期18卷 28-33页

作者：孟艳芬段长松王锡乐熊小路温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的... 详细信息

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特异性结果显示,4个重组蛋白免疫血清,其特异性抗体效价均≥1：5 120,与斑点热群立氏立克次体有相对明显的血清学交叉反应（≥1：40）,而和斑疹伤寒群立克次体仅有轻度交叉反应（≤1：40）.结果表明,重组OmpB蛋白能有效诱导机体产生特异性体液免疫应答,并能与黑龙江立克次体抗体产生特异反应,显示其具有良好的抗原性.

关键词：黑龙江立克次体外膜蛋白抗原性

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医学媒介生物学纵论

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中华卫生杀虫药械 2011年第1期17卷 2-9页

作者：虞以新军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

1媒介生物的自然属性媒介生物这词显现着生物功能及行为,充溢着生态学的内涵。因为媒介行为必然至少涉及三方,而且需要有相宜的时机和条件方可。按黑克儿（Haeckel）早在1869年所述＂生态学是研究生物有机体与其周围环境（包括生物环境... 详细信息

1媒介生物的自然属性媒介生物这词显现着生物功能及行为,充溢着生态学的内涵。因为媒介行为必然至少涉及三方,而且需要有相宜的时机和条件方可。按黑克儿（Haeckel）早在1869年所述＂生态学是研究生物有机体与其周围环境（包括生物环境和非生物环境）

关键词：媒介生物学医学周围环境媒介行为自然属性生物功能生态学有机体

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抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 893-897页

作者：赵晶孙恩成刘霓红杨涛杨银辉耿宏伟秦永丽王凌凤徐青元吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室北京100071

为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a... 详细信息

为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以Bac-to-Bac真核表达系统表达EEEV E2蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以原核表达载体pET-30a表达并纯化的EEEV E2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,获得4株稳定分泌抗EEEV E2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的4株MAbs均与EEEV呈阳性反应,而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应。利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E-33(321EGLEYTWGNHPPKRVW336),而MAb 6F3无短肽与其反应,推测可能为构象表位。本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础。

关键词：东方马脑炎病毒 E2蛋白原核表达真核表达单克隆抗体抗原表位

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重组蓖麻、相思子毒素A链嵌合突变体的制备与分析

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生物技术通讯 2011年第4期22卷 453-457页

作者：韩艳辉张弢康琳高姗辛文文王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及抗原性分析。方法:采用柔性linker连接RIC A链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mA... 详细信息

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及抗原性分析。方法:采用柔性linker连接RIC A链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mABRA,将该嵌合体基因亚克隆至原核载体pQE80L构建表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA,再转化至大肠杆菌M15获得表达工程菌株M15/pQE80L-mRICA/mABRA,工程菌在18℃经0.1 mmol/L的IPTG诱导14 h,表达的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,通过ELISA和Western印迹检测嵌合体蛋白的抗原性。结果:所获得的mRICA/mABRA嵌合体基因经一致性比对分析,与预计嵌合基因的序列一致性为100%,其开放读框全长1572 bp,编码524个氨基酸残基;重组表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,嵌合体蛋白相对分子质量约为62×103,与预测相符,可溶性的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯度可达99%;间接ELISA和Western印迹结果表明,嵌合体蛋白能同时与抗RIC多克隆抗体和抗ABR多克隆抗体发生特异的抗原抗体反应。结论:得到的mRICA/mABRA嵌合体蛋白具有良好的抗原性,为研制新型RIC和ABR双价疫苗奠定了重要基础。

关键词：蓖麻毒素相思子毒素突变体嵌合体抗原性

来源：评论

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虚拟表型方法在HIV-1耐药检测中的应用

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中国艾滋病性病 2011年第2期17卷 188-190页

作者：郭伟李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性检测,已成为抗病毒治疗中进行合理用药的重要依据。基因型和表型耐药检测是最常用的HIV耐药检测方法,这两种方法的局限性在于:基因型方法不能直接提供药物耐受信息,表型方法比较耗时。根据上述两种方法之间... 详细信息

艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)耐药性检测,已成为抗病毒治疗中进行合理用药的重要依据。基因型和表型耐药检测是最常用的HIV耐药检测方法,这两种方法的局限性在于:基因型方法不能直接提供药物耐受信息,表型方法比较耗时。根据上述两种方法之间的良好相关性提出的虚拟表型耐药检测方法,尽管也存在不足,但是提供了另外一种方便的得到耐药信息的方法,从而更好地指导抗病毒治疗。

关键词：耐药 cut-off值虚拟表型

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贝氏柯克斯体血清学反应蛋白芯片的研制

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第2期18卷 90-94页

作者：熊小路王锡乐孟艳芬齐永温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

贝氏柯克斯体为Q热的病原菌。本研究对19个贝氏柯克斯体血清学反应阳性蛋白基因进行PCR扩增，将扩得的基因片段与表达载体连接，将重组质粒转化大肠杆菌并表达目的蛋白，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化... 详细信息

贝氏柯克斯体为Q热的病原菌。本研究对19个贝氏柯克斯体血清学反应阳性蛋白基因进行PCR扩增，将扩得的基因片段与表达载体连接，将重组质粒转化大肠杆菌并表达目的蛋白，采用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。将贝氏柯克斯体新桥株实验感染小鼠血清分别对蛋白芯片进行血清学分析，结果显示能与贝氏柯克斯体感染1、2、3、4周小鼠血清反应的蛋白数分别是0、16、19和18个。结果说明该芯片上的重组蛋白具有贝氏柯克斯体感染血清反应特异性，该芯片分析有望用于Q热的血清学诊断。

关键词：贝氏柯克斯体 Q热血清反应阳性蛋白蛋白芯片

来源：评论

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