检索结果-内蒙古大学图书馆

鼠疫菌、副溶血性弧菌及肺炎克雷伯菌CRP蛋白的表达及其DNA结合活性分析

中国媒介生物学及控制杂志 2011年第3期22卷 251-256页

作者：杨琳高鹤张义全刘霞谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白(CRP)并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧... 详细信息

目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白(CRP)并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧菌5421株以及肺炎克雷伯菌tw518株的CRP蛋白;应用生物信息学对3种CRP蛋白进行同源性比较,并对CRP与靶DNA的结合基序(CRP consensus)进行分析预测;通过体外凝胶阻滞实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His?CRP与DNA的结合活性。结果成功表达出3种菌有活性的His?CRP融合蛋白,3种CRP蛋白对鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因均有结合活性。结论 3种CRP蛋白都能直接结合到鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因的启动子区,说明上述3种CRP蛋白对3种病原菌的重要毒力基因的转录可能具有交互调控作用。

关键词：鼠疫菌副溶血性弧菌肺炎克雷伯菌 cAMP受体蛋白交互调控

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以HIV-1 5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型的构建

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微生物学杂志 2011年第6期31卷 96-100页

作者：李建彬陈斌米志强安小平李存刘大斌王晓娜范华昊方祥童贻刚华南农业大学食品学院广东广州510642 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

构建以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,用于体外筛选潜在的对HIV-1启动子具有抑制作用的药物,或用于筛选与HIV-1复制相关的宿主因子。通过PCR扩增HIV-1 5'LTR片段和胸苷激酶基因(thymidine kinase gene... 详细信息

构建以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,用于体外筛选潜在的对HIV-1启动子具有抑制作用的药物,或用于筛选与HIV-1复制相关的宿主因子。通过PCR扩增HIV-1 5'LTR片段和胸苷激酶基因(thymidine kinase gene,TK基因),以这2片段为模板进行重叠PCR将两者连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系;加入药物更昔洛韦(GCV)检测TK基因的表达。成功构建了HIV-1 5'LTR调控TK基因表达的稳定细胞系,在其培养过程中加入药物更昔洛韦时,细胞逐渐死亡。构建了以HIV-1 5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,该模型利用TK基因作为报告基因方便灵敏,可用于筛选针对HIV-1 5'LTR的潜在抗HIV药物。

关键词： HIV LTR TK自杀基因药物筛选

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副溶血性弧菌基因敲除方法的建立及应用

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中国实验动物学报 2011年第3期19卷 188-192,276页

作者：刘霞高鹤杨琳张义全谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学医学技术学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义。方法通过融合PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合... 详细信息

目的摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义。方法通过融合PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合转移到副溶血性弧菌菌株内,经pDS132质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株。结果成功构建了副溶血性弧菌RIMD2210633菌株ΔopaR,ΔtoxR和ΔaphA三个基因突变株。结论通过自杀载体同源重组成功获得精确敲除的无痕突变株更有利于基因功能的研究,使后续副溶血性弧菌突变株与野生株的对比研究成为可能。

关键词：自杀载体同源重组无痕突变

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高效液相色谱法测定注射用福莫司汀有关物质和含量

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解放军药学学报 2011年第6期27卷 535-536,539页

作者：杨玉敏窦媛媛王洪权吴海燕北京军区总医院药剂科北京100700 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立注射用福莫司汀含量测定及有关物质检查的高效液相色谱测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸二氢铵(2∶1.5,V/V);流速:1 ml/min;紫外检测波长:230 nm。结果... 详细信息

目的建立注射用福莫司汀含量测定及有关物质检查的高效液相色谱测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸二氢铵(2∶1.5,V/V);流速:1 ml/min;紫外检测波长:230 nm。结果进样量在0.05～10.00μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);福莫司汀平均回收率为99.72%,RSD为0.16%;所检测的有关物质含量约为0.5%。结论该法简便、快速,结果准确、可靠,重复性好,可用于注射用福莫司汀含量测定及有关物质检查。

关键词：福莫司汀有关物质含量测定高效液相色谱法

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负压救护车排风净化装置病毒气溶胶过滤效率测试评价方法的研究

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中国消毒学杂志 2011年第3期28卷 291-294页

作者：温占波于龙李劲松胡凌飞杨文慧祁建城赵明军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 国家生物防护装备工程技术中心军事医学科学院卫生装备研究所

目的研究并建立负压救护车排风净化装置病毒气溶胶泄露检测方法,对该排风净化装置的病毒气溶胶过滤效率进行测试评价。方法采用人工气溶胶和空气微生物采样器采样方法,对负压救护车排风净化装置过滤粘质沙雷菌噬菌体SM702气溶胶的效率... 详细信息

目的研究并建立负压救护车排风净化装置病毒气溶胶泄露检测方法,对该排风净化装置的病毒气溶胶过滤效率进行测试评价。方法采用人工气溶胶和空气微生物采样器采样方法,对负压救护车排风净化装置过滤粘质沙雷菌噬菌体SM702气溶胶的效率进行了评价。结果用DV40气溶胶发生器发生噬菌体病毒气溶胶,发生器流量为10 L/m in,噬菌体SM702气溶胶空气动力学数量中值直径为0.744μm。在该排风净化装置过滤前噬菌体气溶胶的浓度>107pfu/m3,过滤后测试该排风净化装置对病毒气溶胶过滤效率>99.99%。结论利用建立的负压救护车排风净化装置病毒气溶胶过滤效率测试方法,可以对排风净化装置对病毒气溶胶的过滤效率进行测试评价。

关键词：微生物气溶胶排风净化装置过滤效率负压救护车

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不同地区不同生境按蚊种群的分子鉴定及rDNA-ITS2序列分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2011年第2期18卷 84-89页

作者：谭伟龙赵彤言董言德汪中明李春晓军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 南京军区疾病预防控制中心南京210002

对采自安徽、江苏、湖南、广西、云南及海南等地区的人房、牛棚、稻田、山区等不同生境的按蚊，按照文献合成引物，用PCR方法进行分子鉴定；并对各种群的ITS2序列测序后，与GenBank所得赫坎按蚊复合体近缘种群按蚊的ITS2序列进行比对分... 详细信息

对采自安徽、江苏、湖南、广西、云南及海南等地区的人房、牛棚、稻田、山区等不同生境的按蚊，按照文献合成引物，用PCR方法进行分子鉴定；并对各种群的ITS2序列测序后，与GenBank所得赫坎按蚊复合体近缘种群按蚊的ITS2序列进行比对分析。结果显示，采集的不同地区不同生境的按蚊均为中华按蚊，此次采集没有采到嗜人按蚊；现场的中华按蚊与凉山按蚊、贵阳按蚊和昆明按蚊的同源性为80．6％～83．1％．与嗜人按蚊和雷氏按蚊的同源性为75．2％～76．2％，与最黑按蚊和带足按蚊的同源性稍低，为63．2％～64．6％。系统发育树显示：所有的序列样本形成了两个分支，来自现场的按蚊处在同一分支且差异小。

关键词：按蚊分子鉴定 rDNA-ITS2 序列分析同源性

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壳聚糖黏膜佐剂促进黏膜免疫的研究进展

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广东畜牧兽医科技 2011年第2期36卷 9-10,14页

作者：师秀敏赵忠鹏闫芳王希良山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

近年来通过黏膜部位释放抗原物质的新型免疫方法受到了越来越多的关注,其中鼻腔免疫被认为是最有前景的给药途径,佐剂可以提高或优化对通过黏膜或系统途径接种抗原的免疫应答,新的黏膜佐剂和传递系统是疫苗领域的研究热点。本文就纳米载... 详细信息

近年来通过黏膜部位释放抗原物质的新型免疫方法受到了越来越多的关注,其中鼻腔免疫被认为是最有前景的给药途径,佐剂可以提高或优化对通过黏膜或系统途径接种抗原的免疫应答,新的黏膜佐剂和传递系统是疫苗领域的研究热点。本文就纳米载体-壳聚糖作为特殊的黏膜免疫佐剂和PEG交联壳聚糖季铵盐智能水凝胶体系作为新型的鼻腔免疫传递系统作一综述。

关键词：黏膜佐剂免疫

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基于Ontology的流行病学调查表定制的设计与实现

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中国病原生物学杂志 2011年第2期6卷 81-84页

作者：李亚品方立群史套兴高素青李艳丽李秀君杨红张文义钱全卫兰王真曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军理工大学指挥自动化学院

目的建立流行病学调查表ontology库,实现基于ontology流行病学调查表定制。方法使用protégév3.1建立流行病学调查表ontology库,通过计算机网络技术实现B/S(服务器/浏览器)架构的流行病学调查表定制。结果通过建立ontology流... 详细信息

目的建立流行病学调查表ontology库,实现基于ontology流行病学调查表定制。方法使用protégév3.1建立流行病学调查表ontology库,通过计算机网络技术实现B/S(服务器/浏览器)架构的流行病学调查表定制。结果通过建立ontology流行病调查表本体库可以实现流行病学调查表定制功能。结论建立流行病学调查表ontology库是实现流行病学调查表定制的基础,应用现代计算机技术和通信技术可以实现流行病学调查表的定制功能,流行病学调查表定制可以增强现场流行病学调查的工作效率,增强调查信息的可处理性。

关键词： ontology 流行病学调查表定制

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蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定

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生物技术通讯 2011年第5期22卷 636-639,666页

作者：王丹康晓平郝淮杰郑玉玲姜永强杨银辉陈福生华中农业大学食品科技学院湖北武汉430070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5... 详细信息

目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。

关键词：蜱传脑炎病毒 TBE-E-D3抗原原核表达纯化特异性

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甲型H1N1流感城镇间公路交通传播研究

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科学通报 2011年第22期56卷 1812-1819页

作者：肖洪田怀玉赵暕张锡兴李亚品刘毅刘如春陈田木湖南师范大学资源与环境科学学院长沙410081 北京大学医学部北京大学第三医院北京100191 长沙市疾病控制预防中心长沙410001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国矿业大学机电与信息工程学院北京100083

2009年甲型H1N1流感通过公路交通在我国城镇间广泛传播并造成巨大损失,掌握其传播规律对城市化建设和减轻疫情造成的损失具有重要意义.本文以长沙市为研究区,分析了甲型H1N1流感沿公路交通传播的规律及风险因子,构建了结合扩散速度和人... 详细信息

2009年甲型H1N1流感通过公路交通在我国城镇间广泛传播并造成巨大损失,掌握其传播规律对城市化建设和减轻疫情造成的损失具有重要意义.本文以长沙市为研究区,分析了甲型H1N1流感沿公路交通传播的规律及风险因子,构建了结合扩散速度和人群流动的疫情扩散模型,模拟甲型H1N1流感在长沙市城镇间的传播过程.结果表明,公路沿线及道路交叉区域发病率较其他区域高,高速公路和县道分别在疫情快速发展期和顶峰期对疫病的传播扩散产生重要影响,长途汽车站在城镇间疫病的传播过程中是重要的风险因子.模型结合了疫情传播强度预测与流行区域预测,较其他模型更完整地还原了疫病的时空传播过程.

关键词：甲型H1N1流感公路交通时空传播发病率风险因子

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