检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2010年第6期26卷 498-501,506页

作者：张伟刘坤姜德玉赵莉群李君丽于三科王希良西北农林科技大学动物医学学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选... 详细信息

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。

关键词： 2C7表位淋球菌脂寡糖(LOS) 乙型肝炎病毒核心抗原(HBc) 原核表达

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分枝杆菌噬菌体D29气溶胶的喷雾和采样介质的初步研究

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军事医学科学院院刊 2010年第4期34卷 347-350页

作者：刘克洋杜茜温占波杨文慧李娜董晓凯胡凌飞王洁李劲松鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071 北京军区总医院北京100700

目的评价PBS、SM液、营养肉汤3种不同的采样液对分枝杆菌噬菌体D29的收集能力;D29在3种不同喷雾介质(生理盐水、去离子水和PBS)中的耐雾化性能;PBS作为采样液时,收集到的D29浓度随时间变化趋势。方法用全玻璃液体冲击式采样器AGI-30收集... 详细信息

目的评价PBS、SM液、营养肉汤3种不同的采样液对分枝杆菌噬菌体D29的收集能力;D29在3种不同喷雾介质(生理盐水、去离子水和PBS)中的耐雾化性能;PBS作为采样液时,收集到的D29浓度随时间变化趋势。方法用全玻璃液体冲击式采样器AGI-30收集D29气溶胶并进行判定。结果与结论噬菌体D29在含有微量Tween80的PBS中耐冲击性能最强,将其用于采样能够准确反映气溶胶的浓度,而去离子水作为喷雾介质时,D29气溶胶具有最大的产出量。在D29气溶胶的动物暴露实验中,选择去离子水为喷雾液用于产生气溶胶,采样液为含微量Tween80的PBS。

关键词：分枝杆菌噬菌体 D29气溶胶采样液喷雾液

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重庆地区2009年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征

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第三军医大学学报 2010年第15期32卷 1589-1593页

作者：蔡丽君王均许红梅常国辉重庆医科大学附属儿童医院感染消化科重庆400014 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对2009年重庆市手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)患儿粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源。方法将47例手足口病患儿... 详细信息

目的对2009年重庆市手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)患儿粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源。方法将47例手足口病患儿临床标本接种人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)进行分离培养,采用EV、EV71、Cox A16特异性引物对出现细胞病变的细胞上清进行PCR鉴定,同时电镜观察病毒颗粒形态,将鉴定的病毒基因组分为4个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序。通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树。结果在47例HFMD患儿临床标本接种RD细胞培养中,有7份观察到明显的细胞病变,通过RT-PCR检测有3份呈EV特异性引物及EV71特异性引物阳性,而所有标本Cox A16特异性引物检测为阴性,EV71特异性引物的PCR产物测序结果证实为EV71病毒,同时用电镜观察形态病毒感染的RD细胞,为圆形无包膜病毒颗粒,证实所分离病毒为EV71。测序获得的3株EV71病毒基因组全长分别为7 409、7 406 nt和7 404 nt,其VP1氨基酸序列同源性达99%以上。Blast分析表明重庆毒株Chongqing-2-09-China(GQ994990.1)、Chongqing-3-09-China(GQ994991.1)均与安徽阜阳2008年分离的3株EV71毒株同源性较高,重庆毒株Chongqing1-09-China(GQ994989.1)与2005年台湾分离984 polyprotein、1235 polyprotein序列毒株同源性最高,进化分析表明属于C4基因亚型。结论新分离的重庆EV71毒株基因组序列符合肠道病毒特征,与国内2008年安徽阜阳及台湾2005年分离的EV71病毒可能具有相同来源。

关键词：手足口病 EV71病毒基因组序列测定进化分析

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乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

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军事医学科学院院刊 2010年第3期34卷 255-257页

作者：宗静周希珍赵慧李晓峰秦鄂德高岚秦成峰解放军总医院北京100853 兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的表达纯化乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5,并制备其多克隆抗体。方法通过PCR法扩增编码NS5蛋白的全长基因,将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并通过Ni柱亲和层析纯化重组蛋白。用纯化后的重组蛋白免疫B... 详细信息

目的表达纯化乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5,并制备其多克隆抗体。方法通过PCR法扩增编码NS5蛋白的全长基因,将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并通过Ni柱亲和层析纯化重组蛋白。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体。采用间接免疫荧光法检测抗体效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果与结论成功获得了可溶性表达的NS5蛋白,制备了多克隆抗体,效价为1∶1000,能够特异性识别乙型脑炎病毒感染细胞中表达的NS5蛋白,为进一步研究NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5 病毒非结构蛋白质类原核表达多克隆抗体

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应用仿真模型模拟甲型H1N1流感的街道社区传播

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中华流行病学杂志 2010年第6期31卷 696-699页

作者：肖洪田怀玉赵暕李亚品中南大学信息物理工程学院长沙410083 湖南师范大学资源与环境科学学院北京大学医学部军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

采用可视化仿真模型对甲型H1N1流感在不同人口密度街道、社区的传播进行模拟仿真,探寻传播规律和特点,为采取合理防控措施提供科学依据.将全部人群按易感-感染-移出（SIR）模型划分为易感人群、感染人群和免疫人群,人群的年龄构成根据... 详细信息

采用可视化仿真模型对甲型H1N1流感在不同人口密度街道、社区的传播进行模拟仿真,探寻传播规律和特点,为采取合理防控措施提供科学依据.将全部人群按易感-感染-移出（SIR）模型划分为易感人群、感染人群和免疫人群,人群的年龄构成根据第五次人口普查基本情况设置,个体依据网络随机接触模型进行接触与运动,致死率与感染方式按照甲型H1N1流感医学描述进行设定.实例分析结果表明,感染率与社区街道人口密度有密切关系,疫情前期人口感染率增长速度较快,人口密度在50人/hm2以上的社区持续传播甲型H1N1流感的概率较大;对照组试验表明,在社区内接种疫苗可以有效地抑制甲型H1N1流感的传播.结论：人口密度、是否接种疫苗是甲型H1N1流感流行的危险因素.

关键词：甲型H1N1流感仿真模型易感-感染-移出模型传播模拟

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人源靶向补体抑制物CR2-CD59在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

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第三军医大学学报 2010年第9期32卷 887-890页

作者：郭彦寇志华孙世惠张传福赵光宇于虹宋宏彬乔飞陈万荣周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院疾病控制与预防研究所北京100071 美国南卡医科大学微生物学和免疫学系美国查里斯顿SC29425

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用... 详细信息

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P<0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞 CR2-CD59 补体

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Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达

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动物医学进展 2010年第6期31卷 58-61页

作者：姜德玉刘坤赵晓燕张伟李君丽王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化***5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫... 详细信息

以Ⅱ亚单纯疱疹毒-2333株(HSV-2)的基因组DNA为模板扩增编码HSV-2糖蛋白D(glyco-protein D)基因,与载体pFastBacⅠ连接,转化***5α感受态细胞,经PCR及测序鉴定正确。将pFastBacⅠ-gD重组质粒转座至DH10Bac获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白,经对表达条件进行优化,SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功表达HSV-2 gD蛋白,为下一步的工作奠定了基础。

关键词： Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D Bac-to-bac表达系统

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2009年重庆地区手足口病病毒分离鉴定

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重庆医科大学学报 2010年第4期35卷 594-597页

作者：蔡丽君王均常国辉许红梅重庆医科大学附属儿童医院感染消化科重庆400014 军事医学科学院病原微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：对2009年2-4月重庆地区流行的手足口病（Hand-food-and-mouth disease,HFMD）病原进行分离鉴定,以调查本地区HFMD流行病原学情况。方法：采集47例手足口患儿脑脊液、疱疹液、粪便、咽拭子、肛拭子共100份标本,分别接种于人横纹肌... 详细信息

目的：对2009年2-4月重庆地区流行的手足口病（Hand-food-and-mouth disease,HFMD）病原进行分离鉴定,以调查本地区HFMD流行病原学情况。方法：采集47例手足口患儿脑脊液、疱疹液、粪便、咽拭子、肛拭子共100份标本,分别接种于人横纹肌肉瘤细胞（Human rhabdomyosarcoma,RD）中进行病毒分离培养,对出现细胞病变（Cytopathic effect,CPE）的细胞上清,分别用肠道病毒通用引物、EV71属特异性引物和柯萨奇A16属特异性引物进行RT-PCR检测,并对PCR产物进行回收克隆测序鉴定,以确定本次疫情中肠道病毒（Enteroviruses,EV）的病原,将测序结果用生物学软件Bioedit同国际代表BrCr株进行序列比对及同源性相关分析,以鉴定此毒株遗传变异情况。结果：在处理后的100份HFMD患儿临床标本的细胞培养中,有份观察到明显的细胞病变,通过RT-PCR检测有7份呈肠道通用引物阳性,EV71特异性引物检测有3份呈阳性结果,而CA1特异性引物检测结果均为阴性,这3份EV71阳性临床标本来自2例门诊患儿和1例临床诊断疑似病例患儿,其PCR产物测序结果也证实为EV71病毒。结论：重庆地区2-4月发生的HFMD疫情主要是由EV71型引起的。

关键词：手足口病肠道病毒71型分离鉴定

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1株对小鼠呈高致病性H5N1亚型禽流感病毒的遴选

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免疫学杂志 2010年第2期26卷 132-135,143页

作者：董梅顾敏曹军平彭大新王希良刘秀梵军事医学科学院微生物流行病研究所免疫研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学畜牧兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室 225009

目的观察从死禽体内分离的禽流感H5N1病毒株对小鼠的致病情况,筛选一株可用于小鼠攻毒实验的H5N1毒株。方法将17株禽源H5N1病毒分别滴鼻感染6～8周龄Balb/c小鼠,观察其对小鼠的致病和致死情况。通过测定其中毒力较强一株的EID_(50)、TCI... 详细信息

目的观察从死禽体内分离的禽流感H5N1病毒株对小鼠的致病情况,筛选一株可用于小鼠攻毒实验的H5N1毒株。方法将17株禽源H5N1病毒分别滴鼻感染6～8周龄Balb/c小鼠,观察其对小鼠的致病和致死情况。通过测定其中毒力较强一株的EID_(50)、TCID_(50)、小鼠LD_(50)及濒死小鼠不同组织中病毒载量,判定其致病力;采用遗传进化分析绘制HA基因进化树,了解其进化特征。结果动物实验表明,17株高致病性禽源H5N1毒株中,仅有一株对小鼠为高致病性。该毒株TCID_(50)/100μl=7.2,EID_(50)/100μl=8.325,小鼠1 LD_(50)/100μl=6.318≈10~2EID_(50)。鼻粘膜感染4～6 d小鼠发病,表现为精神萎靡、食欲减退、竖毛、弓背等临床症状,体重明显减轻。小鼠死亡集中在发病后的2～5 d,耐过死亡者12 d完全恢复正常。从濒死感染小鼠脾、肺、鼻及脑组织中皆可检出流感病毒NS片段,病毒数载量以脑组织中最多,达3.56×10^(10)拷贝/5μl。结论筛选到一株对小鼠呈强致病性H5N1亚型禽流感毒株,可以用于禽流感疫苗交叉保护效果评价的小鼠攻击实验,也可以作为感染模型用于H5N1禽流感病毒致病机制的研究。

关键词：禽 H5N1病毒株致病性小鼠

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抗人整合素αvβ3-组织因子融合蛋白基因的构建和表达

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生物技术通讯 2010年第4期21卷 488-493页

作者：刘大斌张昕安小平张宝中王盛周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用基因工程技术构建和表达抗人整合素αvβ3单链抗体(scFv)与人可溶性组织因子(sTF)的融合蛋白scFv-sTF。方法:用重叠延伸PCR技术扩增scFv基因,同时用组装PCR方法人工合成sTF基因,然后以酶切连接方式融合2个基因,并克隆至原核表... 详细信息

目的:利用基因工程技术构建和表达抗人整合素αvβ3单链抗体(scFv)与人可溶性组织因子(sTF)的融合蛋白scFv-sTF。方法:用重叠延伸PCR技术扩增scFv基因,同时用组装PCR方法人工合成sTF基因,然后以酶切连接方式融合2个基因,并克隆至原核表达载体pQE80L中,构建表达质粒pQE80L-scFv-sTF,以重组子转化大肠杆菌M15诱导目的基因表达。结果:SDS-PAGE分析显示工程菌可以表达相对分子质量约55×103的融合蛋白scFv-sTF,Western印迹分析证实表达的目的蛋白具有6×His标签;经低剂量IPTG诱导和较低温度培养,scFv-sTF获得了可溶性表达;纯化回收目的蛋白,ELISA试验证实,该重组抗体分子具有良好的抗原结合活性。结论:构建并表达了抗人整合素αvβ3的单链抗体融合蛋白scFv-sTF,并验证了其抗原结合活性,初步证明它可以与抗原特异性结合,为进一步研究其抗肿瘤作用打下了基础。

关键词：整合素αvβ3 单链抗体组织因子融合蛋白

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