检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2009年第12期25卷 1139-1142,1161页

作者：宋立华何君李岩伟赵海段鸿元朱虹端青病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

针对鹦鹉热嗜衣原体(Cps)的主要外膜蛋白(MOMP)基因和多形态膜蛋白(PMP)基因分别设计引物,建立荧光定量PCR方法,比较两对引物的灵敏度和特异性。试验结果表明,两对引物均可用于Cps检测,在样本中靶标浓度高时,PMP引物的检测灵敏度优于MOM... 详细信息

针对鹦鹉热嗜衣原体(Cps)的主要外膜蛋白(MOMP)基因和多形态膜蛋白(PMP)基因分别设计引物,建立荧光定量PCR方法,比较两对引物的灵敏度和特异性。试验结果表明,两对引物均可用于Cps检测,在样本中靶标浓度高时,PMP引物的检测灵敏度优于MOMP引物;但前者的扩增效率低于后者,后者更适合用于Cps的实时定量PCR检测。相对定量研究表明国内不同Cps流行株的PMP基因在基因组上的拷贝数可能存在较大差异。

关键词：鹦鹉热嗜衣原体荧光定量PCR 主要外膜蛋白多形态膜蛋白

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喹啉类抗疟药抗性机制研究进展

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军事医学科学院院刊 2009年第1期33卷 71-73页

作者：王红王京燕军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目前对喹啉类药物抗性机制的研究引起了人们的普遍重视。本文综述了与抗药性有关的基因pfcrt,pfmdr1和cg2与喹啉类抗疟药抗性关系的研究进展。

关键词：氯喹喹啉抗性机制 pfcrt pfmdrl cg2

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氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗的免疫保护性评价

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中国人兽共患病学报 2009年第3期25卷 207-209,213页

作者：王锡乐邢洪光熊小路陈梅玲吴德平王世斌王颖温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免... 详细信息

目的动物实验评价采用国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗(CMRV)的免疫保护性。方法将三批小量制备的CMRV和灭活贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)分别用1μg、10μg、100μg三个剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,4周后用初次免疫的一半剂量腹腔注射加强免疫1次,2周后用107的贝氏柯克斯体强毒株腹腔注射感染免疫小鼠,感染第7d活杀小鼠、摘取小鼠脾脏,用荧光定量PCR检测小鼠脾脏组织的贝氏柯克斯体。结果所有Q热疫苗免疫组的小鼠脾脏荷菌量均显著少于非免疫组,100μg免疫组的荷菌量显著低于10μg免疫组,10μg疫苗组显著低于1μg免疫组。每批CMRV免疫组与相同剂量WCV免疫组之间的贝氏柯克斯体含量无显著差异。结论国内分离株研制的氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体组分Q热疫苗具有与灭活Q热疫苗一样良好的抗贝氏柯克斯体感染的免疫保护性。

关键词： Q热疫苗贝氏柯克斯体免疫保护性

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HIV-1耐药性突变位点研究进展

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军事医学科学院院刊 2009年第5期33卷 473-475页

作者：李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

HIV耐药性的产生是抗病毒治疗的瓶颈,而耐药性的发生主要是因为HIV基因组中部分密码子位点发生突变所致。随着HIV耐药性研究的逐步深入,导致HIV耐药的突变位点也逐渐明晰化,尤其是针对高效抗病毒治疗中经常使用的抑制剂的耐药突变位点... 详细信息

HIV耐药性的产生是抗病毒治疗的瓶颈,而耐药性的发生主要是因为HIV基因组中部分密码子位点发生突变所致。随着HIV耐药性研究的逐步深入,导致HIV耐药的突变位点也逐渐明晰化,尤其是针对高效抗病毒治疗中经常使用的抑制剂的耐药突变位点的研究取得了明显进展。明确HIV耐药突变位点单独存在或与其他位点联合作用下对病毒抑制剂的影响,将使得抗病毒治疗更有针对性。

关键词： HIV-1 耐药突变位点

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用DREAM技术进行全长质粒快速定点突变

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生物工程学报 2009年第2期25卷 306-312页

作者：张宝中冉多良张昕安小平单云竹周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

利用"设计限制酶辅助突变"(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)进行全长质粒快速定点突变。根据突变位点附近氨基酸靶序列,以简并密码子进行逆向推导,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大... 详细信息

利用"设计限制酶辅助突变"(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)进行全长质粒快速定点突变。根据突变位点附近氨基酸靶序列,以简并密码子进行逆向推导,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变体(Silent mutants),这些突变体中包含大量的限制性酶切位点,选择合适的酶切位点设计引物,用Phusion超保真DNA聚合酶扩增全长质粒的DNA序列,得到的PCR产物用T4多聚核苷酸激酶添加5′磷酸基团后进行平末端连接,转化大肠杆菌受体菌后用设计的酶切位点进行快速筛选。本研究用该方法成功地纠正了长约8 kb的质粒pcDNA3.1-pIgR中的突变碱基,从而获得了多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的野生型氨基酸序列。以上结果表明:利用DREAM技术将限制性酶切位点引入目的基因而不改变目的蛋白质的氨基酸序列,使突变体的筛选简单化;配合使用高保真和高效率的Phusion DNA聚合酶可以进行长达8 kb的全长质粒的快速突变;该方法无需使用定点突变试剂盒和特殊的受体菌,同时避免了核酸杂交以及同位素的使用。

关键词：定点突变聚合酶链反应设计限制酶辅助突变

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抗H5N1病毒嵌合IgA抗体基因的构建及其在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2009年第5期25卷 714-719页

作者：张宝中张昕陈万荣刘大斌王盛安小平冉多良赵光宇周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表... 详细信息

为了表达具有中和活性的抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,采用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗禽流感H5N1-HA鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因及相应的信号肽编码序列,分别与人免疫球蛋白IgA2重链恒定区、Kappa恒定区基因拼接,构建表达质粒pEF-IGHA9和pEF-IGK9,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO(CHO-dhfr-)细胞,用ELISA检测培养上清中嵌合IgA抗体的表达,对纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western blotting印迹分析。结果成功地在CHO细胞中表达了抗禽流感H5N1病毒人-鼠嵌合IgA抗体,为制备抗H5N1重组分泌型IgA预防性抗体制剂奠定了良好的基础。

关键词： H5N1病毒免疫球蛋白基因嵌合IgA抗体 CHO细胞

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流感病毒免疫防御机制研究进展

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国际免疫学杂志 2009年第4期32卷 267-272页

作者：吕进王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答，在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用。尽管流感病毒经常发生变异，但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用。这一系列免疫... 详细信息

流感病毒感染引起免疫损伤的同时可以激发机体产生免疫应答，在病毒的清除与疾病的恢复及再次感染过程中发挥着有效的防御作用。尽管流感病毒经常发生变异，但自然感染诱导的免疫防御机制仍可提供一定程度的交叉保护作用。这一系列免疫应答的激发及形成包括多种分子及细胞的参与，其发生、发展及转归直接决定着疾病的严重程度及免疫预防的有效性。了解天然免疫应答、粘膜免疫应答及获得性免疫应答的激发与维持可为流感病毒的防治及疫苗的研制提供思路。

关键词：免疫防御天然免疫应答粘膜免疫获得性免疫应答

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冷适应减毒B型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定(英文)

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生物化学与生物物理进展 2009年第3期36卷 358-363页

作者：杨鹏辉安文琪石辛甫段跃强罗德炎张鹏飞唐冲邢丽张玉静刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 吉林大学畜牧兽医学院长春130000 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB1... 详细信息

以冷适应、温度敏感、减毒的B/Ann Arbor/1/66流感病毒株作为重配病毒骨架,对其6个内部基因片段进行了全基因合成,同时人工引入9个氨基酸突变.构建了8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒,命名为:pAB121-PB1,pAB122-PB2,pAB123-PA,pAB124-HA,pAB125-NP,pAB126-NA,pAB127-M和pAB128-NS.在成功拯救冷适应A型流感病毒的基础上,利用反向遗传学技术成功获救了具有感染性的重配B型流感病毒株,命名为rMDV-B.该重配病毒株以B/Ann Arbor/1/66为病毒骨架,其中HA和NA来源于2006～2007年当年流行株B/Malaysia/2506/***-B在鸡胚尿囊液和MDCK细胞中的HA效价可达1∶64～1∶512.实验结果暗示:从单一供体病毒株可以产生有效的减毒活B型流感病毒疫苗候选株,能够为将来人用流感疫苗的设计提供可借鉴的模型.

关键词： B型流感病毒反向遗传学 8质粒拯救系统重组流感病毒

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禽流感病毒感染小鼠模型病理损伤及抗原定位研究

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1033-1036页

作者：孙世惠赵光宇于虹郭彦吴小红范薇曾林周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院实验动物中心

目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 ... 详细信息

目的通过建立高致病性禽流感H5N1病毒感染小鼠模型,研究病毒感染致小鼠组织病理损伤、病毒抗原在体内分布及复制特点,为禽流感病毒传播途径及致病机理研究提供实验依据。方法采用A/vietnam/1194/2004(H5N1)病毒株,滴鼻感染BALB/c小鼠,5 d后取小鼠肺、脑、脾、肠、心、肝、肾等组织,制备石蜡切片并进行组织病理损伤和抗原定位研究。结果小鼠肺组织表现为弥漫性肺损伤,脑组织出现轻度炎症反应,脾组织结构完整但脾小体可见凋亡细胞,其它脏器组织结构未查见组织病理损伤;利用M2、NS1单抗,采用免疫组织化学方法检测发现小鼠肺、脑、肠等均有M2、NS1抗原分布。结论高致病性H5N1病毒感染可在小鼠肺、脑、肠等多种组织中复制,引起严重的肺组织病理损伤及轻度的脑组织及脾组织病理损伤。

关键词：禽流感病毒(H5N1) 病理损伤病毒复制

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鼠疫耶尔森菌F1抗原的纯化方法改进及其免疫原性的评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第7期29卷 602-606页

作者：祁芝珍赵海红代瑞霞张青雯任玲玲杨永海李存香吴海莲何建魏荣杰王虎杨瑞馥王祖郧王效义青海省地方病预防控制所西宁811602 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法，评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法，结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25％氢氧... 详细信息

目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法，评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法，结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25％氢氧化铝佐剂中，肌肉注射免疫BALB／c小鼠，于初次免疫后第18周皮下攻毒10^4 CFU活鼠疫菌141强毒株。结果一次免疫的两个剂量组之间产生的抗体滴度差异无统计学意义，而加强免疫的两个剂量组中，F1-40μg剂量组产生的抗体滴度明显高于F1-20μg剂量组。F1抗原免疫的小鼠全部存活，而且健康状况良好，对照组小鼠全部死亡。结论本研究提供了一种简单、有效和便于大规模提取F1抗原的方法。提取的F1抗原具有较高的免疫原性，可作为鼠疫亚单位疫苗的重要抗原组分用于鼠疫亚单位疫苗的研制。

关键词：鼠疫耶尔森菌 F1抗原免疫保护

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