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应用巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP对山东肾综合征出血热病人血清中HV基因检测和分型研究

中国人兽共患病学报 2006年第7期22卷 624-628页

作者：刘运喜赵仲堂许晓群李健高媛江佳富张景兰杨占清曹务春病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 济南军区联勤部疾病预防控制中心山东大学公共卫生学院流行病学与卫生统计学研究所山东省医学科学院基础医学研究所

目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中... 详细信息

目的探讨山东肾综合征出血热重疫区病人血清中HV分子生物学特征,同时寻找准确、简便、迅速的HV检测与分型方法,从而为制定防治决策提供科学根据。方法从山东肾综合征出血热重疫区临沂市费县收集病人早期血清,应用巢式RT-PCR对病人血清中的HV进行基因扩增,采用RFLP、SSCP分型,并进行序列测定与分析。结果48份临床和ELISA检测确诊的HFRS病人血清经巢式RT-PCR扩增后,41份阳性,阳性率85.42%。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经HindIII、HinfI酶切后,呈现2种不同的RFLP图谱:33份显示与R22株相似的酶切图谱,应属SEOV型;另外8份显示出与HTN76-118株相似的图谱,属HTNV型,这8份HTNV型标本均为10-12月间收集的病人血清。41份阳性标本巢式RT-PCR产物经SSCP分析,亦呈现2种不同的图谱:33份具有与R22株相似的SSCP图谱,应属SEOV型;而另8份则与HTN76-118株具有相似的SSCP图谱,属HTNV型。对部分扩增产物序列采用系统进化树分析也得出类似的结果:sdp1、sdp2、sdp3与HTN型76-118株亲缘关系相近,属同一簇,而sdp22、sdp37与SEOV型Z37、R22株亲缘关系相近,属另外一簇,这与RFLP和SSCP获得的结果相一致。结论山东肾综合征出血热重疫区病人基因型以SEOV型为主,但在秋冬季节也存在HTNV型。巢式RT-PCR结合RFLP、SSCP法可对HV准确分型,而且简便、迅速,适合于大规模流行病学调查。

关键词： HV 巢式RT-PCR RFLP SSCP 序列分析基因型

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部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的检测

部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的检测

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：黄海楠丁壮曹务春何静吴晓明蒋宝贵高燕赵秋敏吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的了解我国部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的自然感染情况,比较南北地区不同鼠种带菌率的差异．方法在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州5省(自治区)共捕获鼠473只,用聚合醇链反应检测鼠脾脏中的斑点热群立克次体DNA序列片段．... 详细信息

目的了解我国部分省区啮齿动物中斑点热群立克次体的自然感染情况,比较南北地区不同鼠种带菌率的差异．方法在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州5省(自治区)共捕获鼠473只,用聚合醇链反应检测鼠脾脏中的斑点热群立克次体DNA序列片段．结果共检测鼠473只,69只阳性,阳性率为14．6％, 在黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)都检测出阳性标本,阳性率分别为3．1％、21．6％、30．0%、 10．8％和21．4％．结论我国黑龙江、内蒙古、新疆、浙江和贵州省(自治区)的鼠中都存在斑点热群立克次体的感染,南北地区鼠的带菌率差异无统计学意义(P>0．05)．

关键词：啮齿动物斑点热群立克次体聚合酶链反应

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我国部分地区蜱中莱姆病螺旋体的检测与基因分型研究

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中国病原生物学杂志 2006年第2期1卷 81-85页

作者：王宏伟何静褚宸一张泮河吴晓明黄海楠高燕蒋宝贵曹务春军事医学科学院微生物流行病学研究所病原微生物和生物安全国家重点实验室北京100071

目的对我国部分地区的多种蜱类进行莱姆病螺旋体的检测和基因分型。方法选择我国黑龙江、吉林和浙江省部分林区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析和单链构象多态性(SSCP)分析,确... 详细信息

目的对我国部分地区的多种蜱类进行莱姆病螺旋体的检测和基因分型。方法选择我国黑龙江、吉林和浙江省部分林区为调查点,采集当地蜱类,用巢式PCR法进行检测,阳性产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析和单链构象多态性(SSCP)分析,确定莱姆病螺旋体的基因型。结果共检测蜱512只,阳性126只,阳性率24.61%。其中吉林全沟硬蜱带菌率为37.00%,黑龙江全沟硬蜱带菌率为20.87%,浙江长角血蜱带菌率为28.07%。RFLP分析表明,蜱中莱姆病螺旋体包括***和***两种基因型。SSCP分析显示为7种亚型,其中***分为5个亚型,***分为2个亚型。发现有3只蜱同时感染不同基因(亚)型莱姆病螺旋体。结论证实***和***基因型为我国莱姆病螺旋体的优势基因型,并在我国蜱中发现莱姆病螺旋体不同基因(亚)型的混合感染。

关键词：莱姆病螺旋体基因型限制性片段长度多态性单链构象多态性蜱

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吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染调查研究

吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染调查...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况．方法运用聚合酶链反应(PCR)方法对吉林珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S-23S rRNA间隔区基因与斑点热辟立克次体外膜蛋白A(ompA)基因的检测．测序并用PHY... 详细信息

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况．方法运用聚合酶链反应(PCR)方法对吉林珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S-23S rRNA间隔区基因与斑点热辟立克次体外膜蛋白A(ompA)基因的检测．测序并用PHYLIP软件进行序列分析．结果全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体感染率为36％,在全沟硬蜱中检测到了斑点热群立克次体的感染,其感染率为2％．二者的复合感染率为2％;森林革蜱中伯氏疏螺旋体感染率30．9％,斑点热群立克次体感染率29．1％,二者的复合感染率 16．8％．伯氏疏螺旋体的序列分析显示吉林地区的伯氏疏螺旋体都属于***基因型,同源性较高．对斑点热阳性片段序列分析表明新测序列与斯洛伐克新发现的IRS3株和IRS4株核苷酸序列同源性为97％．结论吉林省珲春地区蜱中存在伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染．特异片段的序列测定证实在我国吉林省存在斑点热新种群IRS3株和IRS4株的近缘种立克次体．

关键词：复合感染斑点热群立克次体伯氏疏螺旋体 5S-23S rRNA基因间隔区 rompA基因序列分析

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炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂的研制

炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂的研制

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：左庭婷何君檀华端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的:利用胶体金免疫层析技术研制的各种快速检测试剂已广泛应用于病原微生物的检测和血清学诊断中。近年来,由于炭疽杆菌出现在恐怖袭击中而越来越受到人们的关注,为适应生物危害突发现场快速准确的侦检要求,我们研制了炭疽杆菌胶体金... 详细信息

目的:利用胶体金免疫层析技术研制的各种快速检测试剂已广泛应用于病原微生物的检测和血清学诊断中。近年来,由于炭疽杆菌出现在恐怖袭击中而越来越受到人们的关注,为适应生物危害突发现场快速准确的侦检要求,我们研制了炭疽杆菌胶体金(免疫层析)法快速检测试剂。方法:柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,直径约25nm。用炭疽杆菌单克隆抗体标记金颗粒,经浸膜干燥后制备成胶体金探针垫。以硝酸纤维素(NC)膜为层析固相载体,包被炭疽杆菌特异性抗体。将胶体金垫、致敏的NC膜与样品垫、吸水垫及被板组装切割后制成免疫层析检测试纸条。结果:将不同株炭疽杆菌进行梯度稀释,用我们研制的炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂检测,敏感性均可达1×10～6cfu/ml;对芽孢杆菌属其它细菌以及常见细菌进行检测,显示1×10～8cfu/ml比浊浓度的枯草杆菌、腊样杆菌、苏云金杆菌、矮小杆菌和地衣芽孢杆菌以及大肠杆菌、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌的检测结果均为阴性。结论:用生物战剂进行恐怖袭击的可能性日益增长,炭疽杆菌的快速检测具有重要的现实意义。炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂能检测不同来源和株型的菌体,敏感性与国外报道水平相当。同时,该试剂特异性强,不与芽孢杆菌属其它细菌以及常见细菌发生交叉发应。检测试剂操作简便,不需要专业设备和人员培训,非专业人员按照说明书即可操作,结果快速易辨,2～15分钟肉眼观察可见。因此,炭疽杆菌胶体金法快速检测试剂适合在生物危害突发事件中使用,以进行现场快速准确的侦检。

关键词：炭疽杆菌胶体金免疫层析

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我国部分地区新发蜱媒传染病复合感染状况调查

我国部分地区新发蜱媒传染病复合感染状况调查

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：孙毅许荣满军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

为了了解我国新发蜱媒传染病的复合感染情况,以莱姆病、人埃立克体病和人巴贝西原虫病为代表,采用分子流行病学调查方法 ,对我国部分地区的蜱类和啮齿动物进行了采集和分析。结果发现,我国的蜱类和啮齿动物均发现了这些病原体的复合感... 详细信息

为了了解我国新发蜱媒传染病的复合感染情况,以莱姆病、人埃立克体病和人巴贝西原虫病为代表,采用分子流行病学调查方法 ,对我国部分地区的蜱类和啮齿动物进行了采集和分析。结果发现,我国的蜱类和啮齿动物均发现了这些病原体的复合感染现象,其中蜱类以全沟硬蜱和中华硬蜱为主,啮齿动物以鼠平属、、姬鼠属种类为主。蜱媒传染病的这种复合感染情况应引起公共卫生部门的高度重视。

关键词：新发蜱媒传染病复合感染蜱啮齿动物

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鼠疫耶尔森氏菌比较与进化基因组学研究

鼠疫耶尔森氏菌比较与进化基因组学研究

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：宋亚军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

鼠疫是曾经严重危害人类的烈性传染病之一,目前学术界公认有三次世界范围鼠疫大流行:公元6世纪的“查士丁尼瘟疫”,公元14-16世纪的“黑死病”以及开始于19世纪末并持续至今的现代鼠疫。仅此三次大流行就造成了至少一亿六千万人死于非命... 详细信息

鼠疫是曾经严重危害人类的烈性传染病之一,目前学术界公认有三次世界范围鼠疫大流行:公元6世纪的“查士丁尼瘟疫”,公元14-16世纪的“黑死病”以及开始于19世纪末并持续至今的现代鼠疫。仅此三次大流行就造成了至少一亿六千万人死于非命,远远超过历史上所有战争死亡人数总和。随着现代医疗水平的提高和公共卫生条件的改善,鼠疫发病率大大下降;但是鼠疫近年来有死灰复燃的趋势,世界卫生组织已经将鼠疫列为重新抬头的传染病

关键词：鼠疫菌株鼠疫耶尔森氏菌疫源地 DFR 鼠疫活疫苗基因组型假结核菌基因组分型

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布鲁氏菌病新型疫苗的初步研究

布鲁氏菌病新型疫苗的初步研究

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全国人畜共患病学术研讨会

作者：王希良罗德炎曾政周丽丽张松乐军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的研制布鲁氏菌病新型疫苗,为安全、有效的防治布鲁氏菌病提供保证。方法采用基因重组技术扩增牛、羊、猪布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于原核表达载体pQ... 详细信息

目的研制布鲁氏菌病新型疫苗,为安全、有效的防治布鲁氏菌病提供保证。方法采用基因重组技术扩增牛、羊、猪布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于原核表达载体pQE上,在IPTG作用下诱导重组蛋白的表达,用层析拄纯化BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L7/L、BLS-L/L、OMP-L/LL和BCSP-L/L重组蛋白抗原;扩增布氏菌保护性抗原BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L融合基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA上,转染Hela细胞,在G的作用于下诱导外原蛋白的表达,经狭缝杂交证实BCSP、BLS、OMP、P和L/L基因片段,及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L蛋白抗原的表达;制备布氏菌病BCSP/pcDN、BLS/pcDNA、OMP/pcDNA、P/pcDNA和/pcDNAL/L基因片段,及BCSP-L/L/pcDNA、BLS-L/L/pcDNA、OMP-L/L/pcDNA双价基因疫苗,及BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-LL和BCSP-L/L单价、双价基因重组蛋白疫苗,分别免疫Balb/c鼠三次,及重组蛋白疫苗、基因疫苗联合免疫,再分别用牛、羊和猪布鲁氏菌毒株攻击观察免疫保护效果。结果构建的布鲁氏菌重要保护性抗原基因重组质粒测序结果与设计的序列完全一致;获得了在原核细胞和真核细胞中表达的BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/L、BLS-L/L、OMP-L/L和BCSP-L/L重组蛋白,及具有免疫学活性的BCSP、BLS、OMP、P和L/L及BCSP-L/、BLS-L/、OMP-L/和BCSP-L/纯化重组蛋白抗原;加入佐剂制备了布鲁氏菌病新型疫苗（重组蛋白疫苗和基因疫苗）;布氏菌病新型疫苗分别免疫Balb/c鼠,均产生了有效的特异性的免疫应答效果,其中双价疫苗效果好于单价、基因疫苗效果好于重组蛋白疫苗、BLS-L/疫苗效果好于OMP-L/、BCSP-L/、BCSP-L/疫苗;用2×10～8CFU布鲁氏菌野生株攻毒,不同类型的布鲁氏菌病新型疫苗都有一定的保护效果,其中,BLS-L/基因疫苗免疫保护效果好于OMP-L/、BCSP-L/、BC-SP-L/基因疫苗,而蛋白疫苗的保护效果不完全,基因疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫有增强布鲁氏菌病新型疫苗的免疫保护效果。结论研制筛选获得的布氏菌病新型疫苗初步证实具有良好细胞免疫和体液免疫的免疫应答及免疫保护效果的效果,深入研究正在进行之中,有望为布氏菌病的有效防治提供保证。

关键词：布鲁氏菌布鲁氏菌病布氏菌病新型疫苗

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吉林省林区莱姆病螺旋体感染的调查研究

吉林省林区莱姆病螺旋体感染的调查研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：黄海楠丁壮曹务春何静吴晓明蒋宝贵高燕赵秋敏王玉福吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室吉林大学畜牧兽医学院动物重要病原与疫病研究室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室吉林省畜牧兽医总站

目的了解吉林珲春林区的蜱、野鼠及家畜感染莱姆病的情况．方法对蜱和野鼠进行莱姆病螺旋体的PCR扩增,阳性蜱标本RFLP分型,应用间接免疫荧光法检测家畜血清中的IgG抗体．结果PCR检测全沟硬蜱和森林革埤的带菌率为36．0％和30．9%;在五... 详细信息

目的了解吉林珲春林区的蜱、野鼠及家畜感染莱姆病的情况．方法对蜱和野鼠进行莱姆病螺旋体的PCR扩增,阳性蜱标本RFLP分型,应用间接免疫荧光法检测家畜血清中的IgG抗体．结果PCR检测全沟硬蜱和森林革埤的带菌率为36．0％和30．9%;在五种鼠中检测到莱姆病螺旋体的特异性片段,带菌率分别为14．0%、8．3％、13．0%、25．0％和33．3％．阳性蜱标本RFLP分型结果属于***和***型:牛、羊血清学检测阳性率为27．5％和31．5％．结论宿主动物、媒介和家畜中都检测到伯氏疏螺旋体的感染,三个环节证明吉林珲春林区存在莱姆病的自然疫源地．

关键词：伯氏疏螺旋体蜱野鼠家畜

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基于空间信息技术的北京市肾综合征出血热宿主动物感染与环境因素关系研究

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中国病原生物学杂志 2006年第1期1卷 3-7,F0003页

作者：赵文娟方立群冯丹江佳富闫磊韩晓娜杨红左曙青吴晓明曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院遥感应用研究所

目的探讨北京市肾综合征出血热(HFRS)宿主动物的感染情况与环境因素之间的关系。方法选择北京市9个区(县)作为研究试验区,设立14个调查点,对HFRS动物宿主感染情况进行调查,应用全球定位系统对调查点进行定位,在ArcGIS软件支持下,建立调... 详细信息

目的探讨北京市肾综合征出血热(HFRS)宿主动物的感染情况与环境因素之间的关系。方法选择北京市9个区(县)作为研究试验区,设立14个调查点,对HFRS动物宿主感染情况进行调查,应用全球定位系统对调查点进行定位,在ArcGIS软件支持下,建立调查点矢量图层,并与北京市1∶100 000地形图、北京市Landsat-7 TM卫星遥感影像图及北京市高程图进行叠加,分别提取调查点周围2 km缓冲区内的平均海拔,校正植被指数及土地利用信息,导出后在SPSS 13.0中分析宿主感染情况与环境因素的联系。结果不同地区间HFRS动物宿主密度和带毒率的差异具有统计学意义;宿主带毒率和带毒指数与园地、水浇地面积成正相关关系;宿主带毒情况和校正植被指数之间无相关性;褐家鼠带毒率与海拔、水浇地面积之间呈正相关关系。结论北京地区肾综合征出血热动物感染情况与土地利用等地理环境因素有关,提示应根据不同地理环境特点采取有针对性的防控措施。

关键词：肾综合征出血热地理信息系统遥感全球定位系统宿主动物汉坦病毒

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