检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2016年第4期36卷 294-299页

作者：宁秀哲寇志华孙维来朱青杨裔邱洪杰郭晶晶郭彦于虹周育森生命科学学院、温州医科大学检验医学院 325035 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生... 详细信息

目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达重组蛋白TFPR1,采用ELISA法筛选阳性菌株后,SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果重组表达质粒pPICZαA-TFPR1经双酶切和测序鉴定证明构建正确；重组蛋白以分泌形式表达,相对分子质量约16＆#215;103。结论利用巴斯德毕赤酵母表达系统成功表达TFPR1蛋白,为进一步研究其功能和作为佐剂的应用提供参考资料。

关键词：佐剂致病相关蛋白毕赤酵母系统分泌表达 Pathogenesis related protein 1 (PR-1)

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我国斑点热立克次体感染与免疫的实验研究

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中国人兽共患病学报 2016年第10期32卷 917-921页

作者：熊小路焦俊温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071

研究证明黑龙江立克次体能够感染人血管内皮细胞和BALB/c小鼠,引起小鼠菌血症和器官损伤;全基因组序列分析发现黑龙江立克次体毒力相关基因。表面蛋白质组分析鉴定了黑龙江立克次体和立氏立克次体的表面蛋白,用表面蛋白免疫C3H/HeN小鼠... 详细信息

研究证明黑龙江立克次体能够感染人血管内皮细胞和BALB/c小鼠,引起小鼠菌血症和器官损伤;全基因组序列分析发现黑龙江立克次体毒力相关基因。表面蛋白质组分析鉴定了黑龙江立克次体和立氏立克次体的表面蛋白,用表面蛋白免疫C3H/HeN小鼠,发现某些表面蛋白为保护性抗原,并揭示这些保护性抗原均能够诱导抗原特异CD4+和CD8+T细胞增殖并产生和分泌IFN-γ和/或TNF-α,以及诱导高水平特异性IgG2a产生,在这些免疫因素的协同作用下使小鼠有效抵抗立克次体感染。用黑龙江立克次体感染Tim-3高表达或低表达人血管内皮细胞以及Tim-3高表达转基因小鼠,结果有力证明Tim-3高表达能够促进人血管内皮细胞和小鼠抵抗黑龙江立克次体感染。

关键词：斑点热立克次体感染免疫保护性抗原

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阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序分析及耐药机制研究

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军事医学 2016年第12期40卷 964-968,973页

作者：李萍冯娇康琳辛文文高珊杨浩周冬生殷喆王景林安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR方法检测相关菌株耐药基因,改良Carba NP法检测碳青霉烯酶类型及其活性,接合转移实验验证质粒pB557-NDM是否具有可转移性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,质粒... 详细信息

目的对阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR方法检测相关菌株耐药基因,改良Carba NP法检测碳青霉烯酶类型及其活性,接合转移实验验证质粒pB557-NDM是否具有可转移性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,质粒全基因组测序分析其遗传结构、移动元件,对其耐药机制进行研究。结果阴沟肠杆菌B557产B类碳青霉烯酶,编码NDM的基因blaNDM位于质粒pB557-NDM上。pB557-NDM可通过接合转移方式进入受体菌EC600并表达相应的耐药谱。质粒pB557-NDM为大小141.65 kb的Inc A/C2型质粒,Gen Bank登录号为KX786648。该质粒共有2个外源插入区,分别为ISEcp1-blaCMY转座单元形成的blaCMY-6耐药区和ΔTn1696-In46-rmt C-ISKpn14-ΔTn125组成的blaNDM-1耐药区。结论质粒pB557-NDM介导阴沟肠杆菌B557多药耐药,blaNDM位于转座子ΔTn125中。

关键词：阴沟肠杆菌 pB557-NDM 碳青霉烯酶

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流感疫苗株为载体的重组HAdV疫苗候选株构建及免疫效果

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免疫学杂志 2016年第12期32卷 1073-1077页

作者：高雅倩高雅倩段跃强邢丽杨鹏辉王希良安徽医科大学 230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 100071

目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病... 详细信息

目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病毒A/California/07/209疫苗株的血凝素(haemagglutination,HA)及插入HAd V六邻体蛋白抗优势原表位的2个重复序列经改造的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因构建流感病毒八质粒系统,转染COS-1/MDCK细胞筛选疫苗候选株并鉴定;制备的候选疫苗株滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过中和抗体、s Ig A黏膜抗体及细胞因子的测定评价其免疫原性,并用野生HAd V-7病毒株攻击评价免疫保护效果。结果成功拯救获得重组HAd V疫苗候选株,命名为rg Flu/HAd V-Ca,其形态符合流感病毒典型特征,可有效表达HAd V病毒Hexon优势表位,且具有冷适应、减毒表型。小鼠免疫后可产生针对HAd V-7及H1N1流感病毒的特异性中和抗体,肺鼻灌洗液中可检测到针对HAd V-7中和抗体s Ig A抗体,并可检测到脾淋巴细胞分泌HAd V-7特异性细胞因子IFN-γ、IL-4;攻毒实验显示,rg Flu/HAd V-Ca疫苗候选株可有效降低小鼠肺病毒载量。结论重组冷适应、减毒HAd V活疫苗株rg Flu/HAd V-Ca具有良好的免疫效果,为腺病毒候选疫苗的研制提供了新思路。

关键词：腺病毒冷适应、减毒活疫苗六邻体抗原表位免疫效果

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猪链球菌溶血素(SLY)引起血小板聚集活性分析

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军事医学 2016年第1期40卷 40-44页

作者：张省委刘鹏徐茂凯尚学义郑玉玲袁媛姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院附属医院重症医学科北京100071

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用... 详细信息

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用,并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响,通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响,推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU,1μg/ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集,5 mmol/L阿司匹林可显著抑制聚集,SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。

关键词： 2型猪链球菌猪链球菌溶血素血小板聚集阿司匹林血小板减少

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副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

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军事医学 2016年第5期40卷 374-378页

作者：侯书宁孟彦言朱文君张凌宇周冬生张义全黄新祥江苏大学医学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组... 详细信息

目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR)。PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入p BAD33质粒中,构建回补质粒。将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。将vop N的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vop N的调控关系。结果与结论 Lac Z结果表明,CalR负调控vop N的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础。

关键词：副溶血弧菌 calR 突变株回补株

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A型肉毒毒素轻链多步纯化及其金属蛋白酶活性研究

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军事医学 2016年第4期40卷 319-321页

作者：卢晓雪赵缓黄彦杰李涛王慧广西医科大学南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用基因工程方法原核表达N-His标签的A型肉毒毒素轻链(Bo NT-ALC)蛋白,多步纯化获得高纯度蛋白,并对其金属蛋白酶活性进行鉴定。方法以A型肉毒毒素为模板,构建重组表达载体p ET22b-ALC,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯... 详细信息

目的利用基因工程方法原核表达N-His标签的A型肉毒毒素轻链(Bo NT-ALC)蛋白,多步纯化获得高纯度蛋白,并对其金属蛋白酶活性进行鉴定。方法以A型肉毒毒素为模板,构建重组表达载体p ET22b-ALC,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化、阴离子交换以及分子筛纯化获取高纯度目的蛋白;通过体外切割特异性底物SNAP-25实验进行酶活性研究。结果与结论获得高纯度的Bo NT-ALC蛋白,对金属蛋白酶活性进行了验证。该纯化方法获得的蛋白纯度高、均一性好,且具有很好的酶活性,为后续研究奠定了基础。

关键词： A型肉毒毒素蛋白纯化金属蛋白酶类

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含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备

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军事医学 2016年第9期40卷 713-716,737页

作者：曹雪锋康晓平冉鑫霍耐凡吴晓燕李裕昌杨银辉安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒(Marburg virus)、扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus)、苏丹型埃博拉病毒(Sudan Ebola virus)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(Yellow fever virus)5种烈性病毒核酸片段的假病... 详细信息

目的利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒(Marburg virus)、扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus)、苏丹型埃博拉病毒(Sudan Ebola virus)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(Yellow fever virus)5种烈性病毒核酸片段的假病毒,为其核酸检测提供一种通用的阳性参考品。方法体外合成该5种病毒的目的基因片段,通过融合PCR技术将5个片段连接成一条基因,然后克隆到慢病毒表达载体上,并与其辅助载体共转染293T细胞;转染后分别于48、72 h收集培养上清,用DNase和RNase进行消化处理及纯化浓缩,最后提取核酸,利用普通PCR和实时荧光定量PCR鉴定假病毒是否包装成功。结果测序结果表明,体外合成的该5种病毒的目的基因片段已正确连接并插入慢病毒载体中;载体转染293T细胞后收集上清中的假病毒,提取核酸经上述两种PCR鉴定均可特异性检测到靶基因,表明已成功包装出含该5种出血热病毒靶基因的假病毒颗粒。结论该研究获得的假病毒颗粒可作为上述5种出血热相关烈性病毒核酸检测的通用阳性参考品。

关键词：马尔堡病毒扎伊尔型埃博拉病毒苏丹型埃博拉病毒拉沙热病毒黄热病毒假病毒阳性参考品

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我国人群感染指环病毒的高通量测序分析

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中国病原生物学杂志 2016年第10期11卷 865-870页

作者：程实范航孙强裴广倩安小平米志强张湘莉兰黄勇童贻刚安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析我国人群感染指环病毒的多样性,为研究指环病毒科的感染与不同疾病发生以及宿主免疫状态之间的关系提供基础资料。方法从33份血液标本中提取病毒核酸,使用多重置换扩增技术富集指环病毒核酸,然后使用Ion Torrent PGM平台进行高... 详细信息

目的分析我国人群感染指环病毒的多样性,为研究指环病毒科的感染与不同疾病发生以及宿主免疫状态之间的关系提供基础资料。方法从33份血液标本中提取病毒核酸,使用多重置换扩增技术富集指环病毒核酸,然后使用Ion Torrent PGM平台进行高通量测序,并进行生物信息学分析。结果共得到226个新的指环病毒序列,包括130条全序和96个ORF1。受检血液标本均检出包括TTV,TTMDV和TTMV等指环病毒;测序显示指环病毒中81.9%为TTV,48.5%的标本感染两个属以上的指环病毒。指环病毒ORF1至少81.13%发生变异,其中TTV属内也存在75.66%的变异,13.27%的序列在NCBI的核酸数据库中同源比对未成功。进化分析显示TTV基因3型又可分为3.1、3.2、3.3等3个亚型,以往命名的基因2型是基因3.3型的一个子分枝。新型TTV中51.9%属于基因3型。结论我国人群普遍感染指环病毒,以基因3型感染居多且基因组多样性高。

关键词：指环病毒多重置换扩增(MDA) 输血传播病毒(TTV) 进化

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广西1例HIV-1G亚型毒株全长基因序列的测定和分析

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军事医学 2017年第2期41卷 101-105页

作者：张敏梁冰玉李天一沈平苏齐鉴李敬云李林安徽医科大学合肥230000 广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 钦州市钦南区疾病预防控制中心广西钦州535000 广西中医药大学附属瑞康医院南宁530021

目的对广西1例HIV-1 G亚型毒株感染者体内病毒近似全长基因组进行序列测定并进行系统进化分析。方法对前期鉴定的1例HIV-1G亚型毒株感染者进行背景信息收集,并采集其外周血,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术分两段扩增并测定病毒近... 详细信息

目的对广西1例HIV-1 G亚型毒株感染者体内病毒近似全长基因组进行序列测定并进行系统进化分析。方法对前期鉴定的1例HIV-1G亚型毒株感染者进行背景信息收集,并采集其外周血,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术分两段扩增并测定病毒近似全长基因序列。利用MEGA6软件对全长序列进行系统进化分析。结果获得了病毒近似全长基因组序列,长度为8847 bp。在系统进化树中,该毒株与G亚型参考株成簇,Bootstrap值为100%。系统溯源分析显示,该毒株与广西首次报道的G亚型JN106043毒株关系最近(Bootstrap值为100%,基因离散率为5%)。结论该毒株可能是由广西毒株传播所致,提示G亚型毒株在广西地区可能存在一定的局部流行,需进一步监测。该毒株序列的测定和分析对于广西地区HIV流行状况分析具有重要意义。

关键词： HIV-1 G亚型近似全长序列系统进化树分析

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