检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫组化分析鼠疫疫苗免疫和鼠疫菌攻毒后恒河猴脾组织中T和B淋巴细胞增殖(英文)

中国人兽共患病学报 2013年第1期29卷 1-9页

作者：吴小红田光邱业峰祁芝珍张青雯毕玉晶杨永海李豫川杨晓燕辛有全李存香崔白忠王祖郧王虎杨瑞馥王效义病原微生物生物安全国家重点实验室北京微生物流行病研究所北京100071 军事医学科学院实验动物中心北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811602

目的在我们先前的研究中发现,鼠疫疫苗免疫的猕猴脾组织中B细胞和T细胞数量明显增加。然而,是否这些细胞是由鼠疫疫苗引起的增殖性B细胞和T细胞还不得而知。方法为回答这个问题,本研究使用免疫组化双标记方法检测了猕猴脾组织中T细胞和... 详细信息

目的在我们先前的研究中发现,鼠疫疫苗免疫的猕猴脾组织中B细胞和T细胞数量明显增加。然而,是否这些细胞是由鼠疫疫苗引起的增殖性B细胞和T细胞还不得而知。方法为回答这个问题,本研究使用免疫组化双标记方法检测了猕猴脾组织中T细胞和B细胞的增殖。应用Ki67抗体以及T细胞和B细胞特异性单克隆抗体的免疫组化双标法,对脾组织T细胞和B细胞增殖进行检测。脾组织分别来自于亚单位疫苗SV1(20μg F1+10μg rV270)免疫的猕猴以及分别通过SV2(200μg F1+100μg rV270)、减毒活疫苗EV和铝佐剂免疫并分别攻毒的猕猴。结果与正常动物相比,受试动物脾组织生发中心有较多的B细胞增殖,边缘区有较多的静止B细胞,在动脉周围淋巴鞘区有较多的静止T细胞,提示原始T细胞可能在免疫早期发生增殖。经SV1、SV2或EV76免疫并攻毒的动物脾组织生发中心较仅用SV1免疫动物的生发中心扩大。此外,铝佐剂免疫并攻毒的猕猴脾组织生发中心不完整,这可能归因于强毒株鼠疫菌感染引起的病理损伤。B细胞增殖、静止B细胞增加、静止T细胞增多及生发中心扩大是诱导特异性体液免疫和保持免疫记忆反应的标志。结论这些结果与我们先前的发现的SV1、SV2或者EV76免疫动物激发较高的抗体和IL-4分泌相一致。

关键词：鼠疫疫苗恒河猴免疫组化鼠疫耶尔森氏菌淋巴细胞增殖

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广西壮族自治区2008—2009年HIV-1流行毒株基因型及其分布

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中华流行病学杂志 2013年第1期34卷 53-56页

作者：刘伟梁淑家杨进业李剑军王斌陈立力李林刘永健李敬云广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室兰州军区乌鲁木齐总医院

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为158... 详细信息

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为1584bp和3147bp）及enV基因的C2V3片段（558bp），序列编辑后用Genotyping及Mega5．03工具确定病毒的基因型，用Simplot和RecombinantHIV-1DrawingTool软件进行病毒基冈的重组分析。结果获得全长gag基因序列270条、全长poZ基因序列246条、eltv基因C2V3区序列22：3条，确定272例标本的基因型。CRF01AE占的比例最高（77．6％），其次为CRF08BC（10．7％）和CRF07BC（7．4％），有4例B（B’）亚型、1例G亚型，还有7例未知重组型。性别、民族间病毒基因型分布的差异无统计学意义。7株新型重组毒株有6株以CRF01AE为母株，嵌入B和／（或）c的片段，还有1株为CRF07BC和CRF08BC的二代重组。结论广西地区目前流行的HIV-1毒株以CRF01AE为主，并出现以CRF01-AE为母株嵌入其他毒株基因片段的新型重组毒株，呈现基因组结构复杂化趋势。

关键词：艾滋病病毒1型 HIV基因亚型分子流行病学

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携带bla_(NDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中的适应度代价

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微生物学报 2013年第1期53卷 99-104页

作者：徐丽吕瑞辰王海燕胡红焱赵向娜杨瑞馥赵建宏宋亚军河北医科大学第二医院河北省临床检验中心石家庄050000 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 武警总医院检验科北京100039

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒... 详细信息

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒丢失的10621衍生菌株,利用生长曲线、生物被膜、无营养生存时间等体外适应度测量实验,分析10621NDM-1(+)及质粒缺失的10621NDM-1(-)之间的适应度差异。【结果】pNDM-BJ01在10621菌株中不稳定,连续传代11次即在群体中完全丢失。在26℃和37℃下,10621NDM-1(-)与10621NDM-1(+)菌株的生长曲线无显著性差异。在26℃条件下,10621NDM-1(-)菌株形成生物被膜的能力明显强于10621NDM-1(+),而在37℃条件下,10621NDM-1(+)强于10621NDM-1(-)。在无营养的PBS缓冲液中,10621NDM-1(-)菌株生存能力明显高于10621NDM-1(+)。【结论】编码blaNDM-1的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中具有较大的适应度代价,缺失这一质粒的菌株在外界环境中的生存能力强于抗性菌株,pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌存续与扩散的能力有限。

关键词：鲁氏不动杆菌新德里金属-β-内酰胺酶-1 生物被膜适应度代价

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肝素结合蛋白的特性及在临床诊断中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第11期29卷 1226-1228,1231页

作者：吴凯李霖江华郑玉玲陈福生姜永强华中农业大学食品科技学院武汉湖北430070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标... 详细信息

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标都不同程度的存在滞后、敏感度低及特异性不高的缺陷。在感染性疾病的预防和治疗中,如何及早地采取合理的应对措施是成功的关键。因此,目前看来不管是在临床还是实验室研究,都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。近几年来HBP被证实可以作为这样一种早期诊断标志。本文简述了肝素结合蛋白(HBP)作为一种感染早期指标的应用。

关键词：肝素结合蛋白临床诊断应用

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普氏立克次体重组表面蛋白制备和免疫印迹抗原特异性分析

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中国人兽共患病学报 2013年第10期29卷 941-945页

作者：贾引军熊小路王锡乐齐永焦俊段长松龚文平温博海中南大学基础医学院微生物学系长沙410013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆与表达普氏立克次体(Rickettesia prowazekii)主要蛋白抗原基因,分析所表达重组蛋白的抗原特异性。方法采用PCR法从普氏立克次体全基因组中扩增其主要抗原基因,将扩得的基因片段插入原核表达质粒;将基因重组表达质粒转化大肠杆... 详细信息

目的克隆与表达普氏立克次体(Rickettesia prowazekii)主要蛋白抗原基因,分析所表达重组蛋白的抗原特异性。方法采用PCR法从普氏立克次体全基因组中扩增其主要抗原基因,将扩得的基因片段插入原核表达质粒;将基因重组表达质粒转化大肠杆菌,用IPTG诱导转化菌表达重组蛋白。将普氏立克次体、莫氏立克次体、立氏立克次体、恙虫病东方体、黑龙江立克次体、贝氏柯克斯体等实验感染小鼠血清与重组蛋白做免疫印迹。结果经过PCR扩增后获得9个目的基因片段,用其构建出9个原核表达质粒;9个原核表达质粒转化菌均高效表达出相应的重组蛋白;结果显示FtsZ、GroEL、Rp828、EF-Ts等4个蛋白特异性最好,仅与普氏立克次体感染小鼠血清反应;其次是Omp,它除与普氏立克次体感染小鼠血清反应外,仅与莫氏立克次体感染血清反应。结论 FtsZ等4个重组蛋白为普氏立克次体的特异性抗原,可以作为研制流行性斑疹伤寒血清学诊断试剂的候选抗原。

关键词：普氏立克次体主要抗原重组蛋白免疫印迹

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2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 570-573页

作者：付忠琳骈亚亚李雪琴郑玉玲马世良袁媛霍春月沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学燕京医学院北京101300

目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作... 详细信息

目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力。结果透射电子显微镜观察发现突变株ΔsalKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株ΔsalKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬。结论双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬。

关键词： 2型猪链球菌双组分调控系统荚膜抗吞噬

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肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立

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军事医学 2013年第6期37卷 431-434页

作者：高钰双冯甜邱景富杨瑞馥周冬生李迎丽重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下... 详细信息

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株。结果与结论成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留。该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术。

关键词：克雷伯菌,肺炎 cAMP受体蛋白基因敲除自杀载体同源重组

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肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价

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军事医学 2013年第2期37卷 122-125页

作者：刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结... 详细信息

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。

关键词：克雷伯菌肺炎 DNA芯片比较基因组学

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副溶血弧菌VPA1405多克隆抗体制备及应用

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军事医学 2013年第2期37卷 118-121,125页

作者：闫小娟张义全王丽刘梦颖杨世亚杨瑞馥周冬生邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利... 详细信息

目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(ΔopaR)中表达水平的差异。结果成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白;Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符。结论成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究。

关键词：副溶血弧菌生物膜 Western印迹

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鼠疫菌OxyR调控子蛋白对rovA基因的转录调控研究

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动物医学进展 2013年第12期34卷 60-64页

作者：倪斌刘磊黄新祥韩延平江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

应用分子生物学技术,开展鼠疫菌调控子蛋白OxyR对rovAR的转录调控机制研究。提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸试验研究rovAR的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对rovAR的调控关系。构建克隆有rovAR... 详细信息

应用分子生物学技术,开展鼠疫菌调控子蛋白OxyR对rovAR的转录调控机制研究。提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸试验研究rovAR的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对rovAR的调控关系。构建克隆有rovAR上游启动子区的lacZ重组质粒,将重组质粒转入WT和ΔoxyR中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较2株重组菌中的rovAR启动子活性,进一步验证OxyR对rovAR的调控关系。进而利用大肠埃希菌OxyR识别基序,预测OxyR对rovAR启动子区的结合位点。发现rovAR的2个转录起始位点均受OxyR的激活,且rovAR启动子区具有可能的OxyR结合位点。推测OxyR能直接结合到rovAR启动子区而激活其转录表达。

关键词：鼠疫耶尔森菌 OxyR rovAR 转录调控

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