检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2013年第9期48卷 1079-1082页

作者：任倩张红星周钢桥安徽医科大学研究生院合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组学研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 蛋白质药物国家工程研究中心北京102206 国家蛋白质科学中心(北京) 北京102206

目的探讨中国广西汉族人群中DNMT1多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化易感性的相关性。方法在广西分别收集1 010例HBV感染慢性化患者(病例组)和1 032例自限恢复者(对照组),应用Sequenom MassArray质谱阵列技术对DNMT1基因的单核苷酸... 详细信息

目的探讨中国广西汉族人群中DNMT1多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化易感性的相关性。方法在广西分别收集1 010例HBV感染慢性化患者(病例组)和1 032例自限恢复者(对照组),应用Sequenom MassArray质谱阵列技术对DNMT1基因的单核苷酸多态性位点rs4804490进行基因分型,用Logistic回归分析计算OR和95%CI,并校正性别和年龄。结果 rs4804490与HBV感染慢性化易感性无显著相关性(OR=1.13,95%CI=0.95～1.36,P=0.16)。对人群进行性别、年龄分层分析仍未发现显著相关性。结论 DNMT1基因单核苷酸多态性位点rs4804490可能与中国广西汉族人群HBV感染慢性化的易感性无关。

关键词： DNMT1基因 HBV感染慢性化单核苷酸多态性遗传易感性

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AKTl磷酸化转录因子HTF4Ser559位点并调控其活性

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中国生物化学与分子生物学报 2013年第5期29卷 437-447页

作者：王磊于淼詹轶群李长燕葛常辉杨晓明李围军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组学研究中心蛋白质组学国家重点实验室

AKT（即也称蛋白激酶B，PKB）通过磷酸化其下游底物发挥多种生理功能．我们利用串联亲和纯化联合质谱技术发现一个新的由HEB基因编码的AKT候选相互作用蛋白HTF4（helix-loop—helixtranscriptionfactors4，也称transcriptionfactor12，T... 详细信息

AKT（即也称蛋白激酶B，PKB）通过磷酸化其下游底物发挥多种生理功能．我们利用串联亲和纯化联合质谱技术发现一个新的由HEB基因编码的AKT候选相互作用蛋白HTF4（helix-loop—helixtranscriptionfactors4，也称transcriptionfactor12，TCFl2）．通过免疫共沉淀、GST-pulldown、共定位实验验证了HTF4与AKT之间的相互作用；采用体内体外实验表明，AKTl磷酸化HTF4的Ser559位点依赖于P13K途径．突变Ser559位点不改变HTF4的细胞核定位，但降低了HTF4转录活性．这些结果证明HTF4是AKT新的磷酸化底物．进一步研究发现，HTF4表达增强明显抑制了HepG2细胞的迁移，Ser559位点突变进一步增强了HTF4对HepG2细胞迁移的抑制能力．AKT磷酸化HTF4的具体功能有待更加深入的研究．

关键词： AKTl HTF4 肝癌细胞磷酸化迁移

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鉴定血管加压素受体(V1aR)在小鼠肝脏枯否细胞和巨噬细胞中的表达

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基因组学与应用生物学 2013年第6期32卷 719-724页

作者：陈华海孙龙钦林巍然贺福初张明姜颖亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室动物繁殖研究所广西大学南宁530004 蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京102206

为了研究V1aR在肝脏枯否细胞和巨噬细胞RAW264.7中的表达,为今后研究V1aR表达与巨噬细胞功能间的关系奠定基础,本研究首先使用胶原酶灌注法和磁珠分选法(MACS)分离纯化小鼠肝脏枯否细胞;然后分别使用普通显微镜、透射电镜和流式细胞仪... 详细信息

为了研究V1aR在肝脏枯否细胞和巨噬细胞RAW264.7中的表达,为今后研究V1aR表达与巨噬细胞功能间的关系奠定基础,本研究首先使用胶原酶灌注法和磁珠分选法(MACS)分离纯化小鼠肝脏枯否细胞;然后分别使用普通显微镜、透射电镜和流式细胞仪对分离纯化后枯否细胞的纯度与功能进行评估;最后使用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光检测V1aR在肝脏枯否细胞和巨噬细胞RAW264.7中的表达。普通显微镜和透射电镜结果表明本研究分离纯化后的桮否细胞具有巨噬样细胞的形态特征和吞噬活性;且流式细胞仪结果表明本研究分离纯化的枯否细胞的纯度可以达到98%以上。RT-PCR和Western blot结果表明在mRNA和蛋白质水平均能检测到V1aR在枯否细胞和巨噬细胞RAW264.7中的表达。同时免疫荧光实验进一步验证了V1aR在巨噬细胞RAW264.7中的表达。总之,本研究首次鉴定到了血管加压素受体V1aR在巨噬样细胞中的表达。

关键词：血管加压素 V1aR 肝脏枯否细胞巨噬细胞

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联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原

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分析测试学报 2013年第7期32卷 783-788页

作者：侯利平傅海媛陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华中南大学药学院湖南长沙410013 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 北京蛋白质组研究中心、蛋白质组学国家重点实验室、国家蛋白质科学中心(北京) 北京102206 中山大学肿瘤防治中心广东广州510060 北京正旦国际科技有限责任公司北京102206 湖南金健药业有限责任公司湖南常德415001

建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对... 详细信息

建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。

关键词：多肽偶联碳二亚胺偶联法监测抗体

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大规模蛋白质相互作用组实验技术及其应用

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生命的化学 2013年第5期33卷 497-502页

作者：商立民贺福初王建军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室蛋白质药物国家工程研究中心北京102206

大规模蛋白质相互作用研究的主要实验技术包括酵母双杂交技术、串联亲和纯化技术和蛋白质芯片技术,随着这些技术的不断发展和完善,科学家们在模式生物、哺乳动物、病原微生物中展开了大规模的蛋白质相互作用组研究,并进行了药物研发方... 详细信息

大规模蛋白质相互作用研究的主要实验技术包括酵母双杂交技术、串联亲和纯化技术和蛋白质芯片技术,随着这些技术的不断发展和完善,科学家们在模式生物、哺乳动物、病原微生物中展开了大规模的蛋白质相互作用组研究,并进行了药物研发方面的研究,绘制了多种生物的蛋白质相互作用连锁图,揭示了多种蛋白质的新功能,为全面研究蛋白质(群)的分子作用机制、药物研发和疾病的临床预防与治疗等提供了崭新的线索。

关键词：大规模蛋白质相互作用实验技术连锁图

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秀丽隐杆线虫在植物提取物抗氧化活性研究中的应用

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军事医学 2013年第4期37卷 315-317,F0003页

作者：高大文李伟光高艳张成岗军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室全军军事认知与心理卫生研究中心北京100850 安徽医科大学研究生学院合肥230032

氧化应激损伤普遍存在,人类的大部分疾病伴随着氧化应激损伤过程,因此研究氧化应激损伤及其防护策略已成为生命科学领域的热点,防治各种氧化应激相关疾病的药物研发也迫在眉睫。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为一种简单的模... 详细信息

氧化应激损伤普遍存在,人类的大部分疾病伴随着氧化应激损伤过程,因此研究氧化应激损伤及其防护策略已成为生命科学领域的热点,防治各种氧化应激相关疾病的药物研发也迫在眉睫。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为一种简单的模式生物,具有生长周期短、遗传背景清晰、表型容易观察等优点,在生命科学研究领域中发挥了重要作用,并在用于植物提取物的抗氧化损伤方面的研究中具有重要的应用价值。本文将从氧化应激和植物提取物的抗氧化角度来阐述线虫在该领域中的研究进展及应用前景。

关键词：氧化应激秀丽线虫抗氧化植物提取物

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以不同方式灭活的大肠杆菌OP50饲喂对秀丽隐杆线虫生长发育的影响

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军事医学 2013年第3期37卷 215-218页

作者：高大文高艳张艳春张成岗安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室全军军事认知与心理卫生研究中心北京100850

目的比较两种不同方式灭活的大肠杆菌(OP50)对秀丽隐杆线虫生长发育的影响,以选择合适的灭活食物菌的方法。方法分别采用热处理(65℃水浴)和钴60照射(2000 Gy)的方法灭活OP50,从秀丽隐杆线虫生长发育的影响、OP50的蛋白组成改变以及琥... 详细信息

目的比较两种不同方式灭活的大肠杆菌(OP50)对秀丽隐杆线虫生长发育的影响,以选择合适的灭活食物菌的方法。方法分别采用热处理(65℃水浴)和钴60照射(2000 Gy)的方法灭活OP50,从秀丽隐杆线虫生长发育的影响、OP50的蛋白组成改变以及琥珀酸脱氢酶活性改变等角度评价热处理组、钴60照射组和对照组间的差异,从而确定最有利于秀丽隐杆线虫生长发育的OP50灭活处理方式。结果钴60照射OP50组饲喂后,秀丽隐杆线虫的生长发育与对照组无差异,而热处理OP50组线虫的发育显著迟缓于对照组。同时噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiazol(-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测结果显示,热处理OP50的琥珀酸脱氢酶活性明显低于对照组和钴60照射组。结论钴60照射是秀丽隐杆线虫实验研究中比较合适的OP50灭活方法。钴60照射和热处理OP50对秀丽隐杆线虫生长的差异可能由于OP50细菌中蛋白活性差异所致。本文为排除药物和毒物可能会间接通过影响OP50从而影响秀丽隐杆线虫的发育过程的干扰因素、提高基于秀丽隐杆线虫研究数据的可靠性提供了重要参考。

关键词：大肠杆菌 OP50 热处理钴60照射秀丽隐杆线虫

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利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法

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军事医学 2013年第7期37卷 543-546页

作者：高玉晓吴永红叶巧李志慧张成岗安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室全军军事认知与心理卫生研究中心北京100850

目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物... 详细信息

目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26。结论建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑。

关键词：单线虫两重PCR 线粒体DNA DNA拷贝数

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去泛素化酶CYLD

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生命科学 2013年第4期25卷 352-357页

作者：魏俊成贺福初王建中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室蛋白质药物国家工程研究中心

肿瘤抑制因子CYLD(Cylindromatosis,头帕肿瘤综合征蛋白)是一种去泛素化酶,cyld基因突变或者缺失导致圆柱瘤,并与多种肿瘤的发生、发展密切关联。CYLD通过自身去泛素化酶活性移除特定底物的K63连接的泛素链,并负调控包括NF-κB在内的多... 详细信息

肿瘤抑制因子CYLD(Cylindromatosis,头帕肿瘤综合征蛋白)是一种去泛素化酶,cyld基因突变或者缺失导致圆柱瘤,并与多种肿瘤的发生、发展密切关联。CYLD通过自身去泛素化酶活性移除特定底物的K63连接的泛素链,并负调控包括NF-κB在内的多条信号通路。在生理条件下,通过磷酸化修饰和泛素化修饰,CYLD的蛋白表达量和活性受到严格的调控。CYLD与多种细胞学功能相关,如细胞运动和迁移、免疫和炎症反应、破骨细胞的形成等。

关键词：泛素化去泛素化酶 CYLD 炎症

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O-GlcNAc糖蛋白/糖肽的分离富集方法

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生命的化学 2013年第2期33卷 59-66页

作者：覃培斌董润安彭博应万涛钱小红北京理工大学生命学院北京100081 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心北京102206

O-GlcNAc糖基化是一种发生在蛋白质丝氨酸或苏氨酸上的翻译后修饰,广泛分布在细胞核与细胞质中,是一种重要的胞内修饰调控方式。O-GlcNAc修饰具有表达丰度低、高度动态化、容易分解等特点,往往需要先对糖蛋白/糖肽进行分离富集,方能有... 详细信息

O-GlcNAc糖基化是一种发生在蛋白质丝氨酸或苏氨酸上的翻译后修饰,广泛分布在细胞核与细胞质中,是一种重要的胞内修饰调控方式。O-GlcNAc修饰具有表达丰度低、高度动态化、容易分解等特点,往往需要先对糖蛋白/糖肽进行分离富集,方能有效鉴定。近期针对O-GlcNAc发展了多种衍生及富集方法,结合新型质谱技术,已经在O-GlcNAc糖蛋白的鉴定上取得较大进展。

关键词： O-GlcNAc糖基化糖蛋白糖肽富集

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