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红细胞生成素基因修饰的间充质干细胞条件培养基促进人胚胎干细胞向造血细胞分化

中国实验血液学杂志 2010年第4期18卷 976-980页

作者：杨超吉蕾岳文王若永李艳华习佳飞谢小燕何丽娟南雪裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 中国科学院动物研究所计划生育与生殖生物学国家重点实验室北京100101

本研究探讨EPO基因修饰的间充质干细胞条件培养液对人胚胎干细胞向造血细胞诱导分化的影响。通过重组慢病毒系统感染人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),建立能够稳定高效表达红细胞生成素(eryth ropoietin,EPO)的细胞株EPO/MS... 详细信息

本研究探讨EPO基因修饰的间充质干细胞条件培养液对人胚胎干细胞向造血细胞诱导分化的影响。通过重组慢病毒系统感染人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),建立能够稳定高效表达红细胞生成素(eryth ropoietin,EPO)的细胞株EPO/MSC。用EB培养液诱导人胚胎干细胞形成拟胚体,然后用EPO/MSC条件培养液处理拟胚体细胞;通过免疫荧光、集落形成实验和RT-PCR检测等方法对诱导的细胞进行了相关鉴定。结果表明:EPO/MSC体外能够稳定表达EPO。条件培养液诱导生成的细胞表达造血干/祖细胞抗原CD34和相关造血基因,可产生不同的造血集落,且明显高于对照组。结论:EPO基因修饰的间充质干细胞条件培养液能显著促进人胚胎干细胞向造血细胞分化。

关键词：胚胎干细胞红细胞生成素间充质干细胞造血细胞诱导分化

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微小RNA miR-125b真核表达载体的构建及其对细胞增殖的影响

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生物技术通讯 2010年第4期21卷 455-460页

作者：曾泉谢小燕赵爱华王静雪陈琳岳文裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

目的:构建微小RNA125b(miR-125b)真核表达载体,研究其过表达后对细胞增殖的影响。方法:以pcDNA3.1(-)-myc-his载体为模板,PCR扩增CMV启动子,克隆入pHRS-1cla-EGFP慢病毒载体,构建pHRS-1cla-CMV-EGFP载体;以从人全血中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-125b序列,将其克隆到pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP慢病毒表达载体;将pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP表达载体瞬时转染入293FT细胞,用实时定量PCR技术对miR-125b在转录水平的表达进行检测,用MTT及Brdu法检测miR-125b过表达后对293FT细胞增殖的影响。结果:构建的pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP真核表达载体经质粒酶切和测序鉴定正确,转染细胞后72h经实时定量PCR检测,成熟miR-125b表达上调约750倍(P<0.01),说明其能有效高表达,MTT及Brdu法检测显示细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。结论:构建了pHRS-1cla-miR-125b-CMV-EGFP慢病毒真核表达载体,转染293FT细胞后能高效表达成熟miR-125b,同时证明过表达miR-125b能使细胞的增殖受到非常明显的抑制。

关键词：微小RNA miR-125b 真核表达载体细胞增殖

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活体成像观察骨髓间充质干细胞向胶质瘤的趋化

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中华神经医学杂志 2010年第6期9卷 544-548页

作者：杨丽平赵敬湘王蕴芳南雪李露斯袁红峰白慈贤裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 第三军医大学西南医院神经内科重庆400038

目的观察大鼠BMSCs在颅内的分布及向肿瘤的趋化能力.方法分离、纯化、培养大鼠BMSCs,检测其表面抗原,并构建稳定表达海肾荧光素酶（RL）的BMSCs（BMSCsRL）;采用立体定向手术,在Fischer大鼠脑实质接种PKH26标记的9L胶质瘤细胞：接种... 详细信息

目的观察大鼠BMSCs在颅内的分布及向肿瘤的趋化能力.方法分离、纯化、培养大鼠BMSCs,检测其表面抗原,并构建稳定表达海肾荧光素酶（RL）的BMSCs（BMSCsRL）;采用立体定向手术,在Fischer大鼠脑实质接种PKH26标记的9L胶质瘤细胞：接种胶质瘤细胞后7d应用立体定向仪于胶质瘤对侧脑实质接种BMSCsRL.通过Xenogen活体动物体内成像系统监测BMSCsRL在颅内的分布情况,同时通过Transwell板观察体外BMSCs向肿瘤迁移的情况.结果从大鼠骨髓分离的BMSCs的CD90和CD44阳性率为99%;BMSCs有向肿瘤组织趋化的能力,体外实验发现迁移的细胞数量随9L细胞的增多而增多,在体实验中通过生物发光成像技术观察到在接种后0,7,14 d BMSCs向肿瘤组织迁移,且在肿瘤与正常脑组织交界处最为明显.结论 BMSCs对胶质瘤有明显趋化性,能从远处向胶质瘤组织迁移并定位于其中,提示BMSCs可作为一种潜在的细胞载体用于神经胶质瘤的靶向治疗.

关键词：神经胶质瘤间充质干细胞趋化作用活体监测

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苯肼致小鼠溶血性贫血模型的建立

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生物技术通讯 2010年第4期21卷 544-546,560页

作者：王若永习佳飞何丽娟谢小燕杨超陈琳李艳华裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

目的:应用苯肼致小鼠发生溶血性贫血,建立急性溶血性贫血模型,筛选苯肼致小鼠贫血最佳浓度和红细胞移植的最佳时机。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为6组,经腹腔注射不同浓度的苯肼溶液,于注射前和注射后第1、3、5、7、9天采集小鼠外周血... 详细信息

目的:应用苯肼致小鼠发生溶血性贫血,建立急性溶血性贫血模型,筛选苯肼致小鼠贫血最佳浓度和红细胞移植的最佳时机。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为6组,经腹腔注射不同浓度的苯肼溶液,于注射前和注射后第1、3、5、7、9天采集小鼠外周血进行检测,记录相关指标的变化,比较各组之间的差异,筛选出最佳溶血效果的给药浓度和红细胞移植治疗介入的时机。结果:注射苯肼溶液可使C57BL/6小鼠短期内产生明显的急性溶血性贫血症状,皮肤黏膜颜色苍白;外周血红细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积降低;随着苯肼溶液浓度的增加,小鼠体重显著减轻,存活率下降。结果表明,苯肼注射小鼠致贫血的最佳作用浓度为1.2mg/10g体重,小鼠贫血状态可维持7d。结论:建立了小鼠溶血性贫血模型,此模型可应用于红细胞输注效果的评价。

关键词：急性溶血性贫血苯肼动物模型红细胞

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经体外预处理人胎儿骨髓间充质干细胞的潜在自身成瘤性

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军事医学科学院院刊 2010年第3期34卷 230-233页

作者：胡洁杨丽娟王韫芳周慧敏魏林王润田裴雪涛河北医科大学基础医学院免疫学教研室/免疫研究室石家庄050017 军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 河北医科大学第一医院内分泌科石家庄050031

目的评价经体外预处理、启动免疫保护功能的人胎儿骨髓间充质干细胞(hfBMSCs)的潜在自身成瘤性。方法采用流式细胞术检测细胞表型及细胞周期,染色体核型分析检测遗传稳定性,裸鼠皮下接种检测体内成瘤性。结果体外预处理的hfBMSCs呈正常... 详细信息

目的评价经体外预处理、启动免疫保护功能的人胎儿骨髓间充质干细胞(hfBMSCs)的潜在自身成瘤性。方法采用流式细胞术检测细胞表型及细胞周期,染色体核型分析检测遗传稳定性,裸鼠皮下接种检测体内成瘤性。结果体外预处理的hfBMSCs呈正常间充质干细胞表型,可通过阻滞细胞周期于G0-G1期抑制hfBMSCs生长增殖(P<0.05),对染色体核型无影响,不具备体内成瘤性。结论经体外预处理的人胎儿骨髓间充质干细胞不具有自身成瘤性。

关键词：间充质干细胞免疫保护成瘤性

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胚胎干细胞向造血干/祖细胞定向诱导分化的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2009年第7期36卷 797-802页

作者：杨超习佳飞岳文裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是指由胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)细胞经体外抑制培养而筛选得到的细胞,具有无限增殖潜能,在体外可以向造血细胞分化,有可能为造血干细胞移植和血细胞输注开辟新的来源.此外,ES细胞向造... 详细信息

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是指由胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)细胞经体外抑制培养而筛选得到的细胞,具有无限增殖潜能,在体外可以向造血细胞分化,有可能为造血干细胞移植和血细胞输注开辟新的来源.此外,ES细胞向造血干/祖细胞的定向诱导分化也为阐明哺乳动物造血发育的细胞和分子机制提供了良好的体外模型.对ES细胞向造血干/祖细胞定向分化的研究进展进行了综述.

关键词：胚胎干细胞造血干/祖细胞诱导体外分化

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Ser84是spindlin1定位与功能发挥的关键位点

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生物化学与生物物理进展 2009年第2期36卷 175-181页

作者：丛斌张鹏王静雪曾泉陈琳岳文裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

spindlin1为作者所在研究组克隆并命名的肿瘤相关新基因,之前研究表明spindlin1蛋白定位于细胞核,并有可能通过对TCF-4通路的调节参与对肿瘤细胞生长和周期的调控.为进一步探索spindlin1的作用机制,明确spindlin1结构与功能的关系,在生... 详细信息

spindlin1为作者所在研究组克隆并命名的肿瘤相关新基因,之前研究表明spindlin1蛋白定位于细胞核,并有可能通过对TCF-4通路的调节参与对肿瘤细胞生长和周期的调控.为进一步探索spindlin1的作用机制,明确spindlin1结构与功能的关系,在生物信息学分析及晶体结构解析的基础上,构建系列突变表达载体,首先以spindlin1蛋白亚细胞定位为指标,观察野生型及系列突变体spindlin1蛋白的亚细胞定位,并进一步检测野生型及突变体spindlin1对TCF-4荧光素酶报告基因转录活性的调控作用,以明确spindlin1定位与功能的关键位点.结果表明:Ser14+Ser84、Ser84+Ser99、Ser14+Ser84+Ser99位点Ser到Ala的联合突变能使野生型融合蛋白在细胞核内集中分布的特性消失,成为全细胞弥散分布,而Ser14、Ser84、Ser99各位点的单独突变或Ser14+Ser99联合突变对spindlin1蛋白的细胞核内分布没有影响.与此同时,对TCF-4荧光素酶报告基因活性的分析表明,Ser14+Ser84、Ser84+Ser99、Ser14+Ser84+Ser99的联合突变使spindlin1对其活性的激活作用消失或降低.上述结果表明,Ser84是spindlin1细胞定位与功能发挥的关键位点,其作用发挥需要Ser14与Ser99的协助.

关键词： spindlin1 突变细胞定位 TCF-4

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单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究

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生物化学与生物物理进展 2009年第7期36卷 830-839页

作者：周军年王韫芳要晖宇贺文艳陈海旭李思霆史岩施双双南雪白慈贤刘兵岳文毛宁裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 军事医学科学院附属307医院肿瘤学研究室北京100071 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室北京100850

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用... 详细信息

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示,诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构,并不同程度地表达白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白(CK8,CK18)等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明:胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45+细胞,CD45-细胞不具有形成造血细胞克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血细胞向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.

关键词：胎肝高增殖潜能集落形成细胞肝上皮细胞造血发育

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小G蛋白RhoA与细胞发育

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第3期25卷 199-205页

作者：贾雅丽姚海雷岳文裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

细胞发育是细胞内各种复杂反应在时间和空间上有序协调的过程,包括细胞增殖、胞质分裂、细胞运动、细胞分化和组织生成等.作为G蛋白家族重要成员的RhoA起了重要的调控作用:在G蛋白调控因子(如GEF XPLN、p115RhoGEF、p190RhoGAP等)的作用... 详细信息

细胞发育是细胞内各种复杂反应在时间和空间上有序协调的过程,包括细胞增殖、胞质分裂、细胞运动、细胞分化和组织生成等.作为G蛋白家族重要成员的RhoA起了重要的调控作用:在G蛋白调控因子(如GEF XPLN、p115RhoGEF、p190RhoGAP等)的作用下,活化的RhoA依次与效应蛋白分子(如ROCK1/2、mDia、PRK1/2、citron激酶等)结合,从而开启了下游的信号通路,最终使细胞能够迅速地对外界刺激做出反应.干细胞是一类既能自我更新又能特异分化形成终末分化细胞的细胞,而RhoA对干细胞的自我更新和定向分化也起着"开关"作用,对RhoA信号通路的调节调控了胚胎发生、神经发生、造血生成及成骨和肌肉生成等干细胞分化发育过程.肿瘤是正常细胞在各种因素长期作用下增殖异常的产物,而RhoA异常表达与肿瘤的发生、侵润与转移密切相关,RhoA信号通路与p53等基因的交互作用在肿瘤的发育过程中也发挥了重要的作用.

关键词： G蛋白 RhoA 细胞迁移干细胞肿瘤

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肝细胞条件培养液对人脂肪间充质干细胞向肝细胞分化和增殖的作用

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中华肝脏病杂志 2009年第7期17卷 544-548页

作者：王敏裴海云管利东南雪白慈贤刘慧李保伟王韫芳裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 解放军总医院

目的探讨人脂肪间充质干细胞在改良的诱导体系下向肝细胞的分化和增殖情况，为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法从人脂肪组织分离出脂肪间充质干细胞，用含有碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子-4的肝细... 详细信息

目的探讨人脂肪间充质干细胞在改良的诱导体系下向肝细胞的分化和增殖情况，为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法从人脂肪组织分离出脂肪间充质干细胞，用含有碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子-4的肝细胞诱导液进行诱导，并于诱导7d后加入抑瘤素M。用细胞计数试剂盒-8法检测整个诱导过程细胞的增殖情况；通过光学显微镜观察诱导细胞的形态变化；用RT—PCR法和免疫荧光法分别检测肝细胞特异性基因和蛋白的表达；并对多种肝细胞特异性功能进行检测。组问比较采用t-test检验。结果用改良肝细胞诱导液培养的人脂肪间充质干细胞在培养第5、7、14、21天时，细胞数均明显多于用对照培养液培养的细胞（f值分别为6．59、8．69、15．94和24．64，P值均〈0．05）。诱导细胞表现出上皮样肝细胞形态；表达肝细胞特异性基因和蛋白；具有多种肝细胞特异性功能，如靛青绿摄取／排泌、糖原合成以及白蛋白分泌功能。结论人脂肪间充质干细胞在含碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子-4和抑瘤素M的诱导体系中能够分化为更加成熟的具有多种肝细胞特异性功能的细胞，且此诱导体系同时具有促进细胞增殖的作用。

关键词：干细胞细胞分化肝细胞增殖

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