检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2008年第6期19卷 870-873页

作者：罗海英翟树森张玉君白慈贤尉承泽孔维王韫芳裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 吉林大学生命科学学院吉林长春130062 解放军307医院普外科北京100071 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆40038

目的:建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型,并对所建模型进行评价。方法:采用改良Kamada"二袖套"法,以近交系大鼠Dark Agouti(DA)为供体、Lewis(LEW)为受体(A组)建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,通过观察手术情况、生存情... 详细信息

目的:建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型,并对所建模型进行评价。方法:采用改良Kamada"二袖套"法,以近交系大鼠Dark Agouti(DA)为供体、Lewis(LEW)为受体(A组)建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,通过观察手术情况、生存情况及肝功能和病理学检查对此模型进行评价,同时以LEW→LEW作为对照组(B组)。结果:手术成功率为91.3%;手术时间为(90.70±5.68)min;无肝期时间(9.96±1.19)min;平均存活时间A组为(12.44±3.43)d,B组超过100d;A组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血清总胆红素术后不断升高,在第10～14d最为明显,血清白蛋白在术后第3d开始逐渐降低,在相同时相点,与B组相比差异显著;A组移植肝脏病理检查有明显的排斥反应,而B组没有。结论:DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型。

关键词：肝移植排斥反应大鼠近交系

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慢病毒介导的稳定表达bFGF的胎儿肝脏基质细胞株的建立

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生物化学与生物物理进展 2007年第2期34卷 207-214页

作者：习佳飞王韫芳张鹏袁红丰施双双闫舫陈琳白慈贤南雪裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetalliverstromalcell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长... 详细信息

通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetalliverstromalcell,FLSC),建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的细胞株bFGF/FLSC.从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞,对其进行了生长特性和表面标志的鉴定,其在体外维持传代35代,依然保持正常的染色体核型.从胎儿骨髓间充质干细胞中克隆得到bFGF基因,构建重组慢病毒载体,感染FLSC,根据荧光表达强弱进行流式分选,获得能够继续稳定传代的低表达和高表达bFGF的两株细胞,RT-PCR和蛋白质印迹证实,细胞株中bFGF基因的稳定表达.RT-PCR结果显示,弱荧光和强荧光表达细胞的bFGF,在mRNA水平的表达分别是转染空载体细胞的2.33倍和6.19倍;蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达分别是1.76倍和5.05倍.用建立的bFGF/FLSC作饲养层细胞体外培养人胚胎干细胞(humanembryonicstemcells,hES),结果证明,其能在无或少量添加外源bFGF的条件下,维持人ES细胞增殖及其干性达20代.bFGF/FLSC细胞株的建立,将为构建低成本、安全高效的人胚胎干细胞的培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境.

关键词：胎儿肝脏基质细胞慢病毒碱性成纤维细胞生长因子转基因人胚胎干细胞

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神经元限制性沉默因子对人胰岛素基因转录调控作用的研究

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生物化学与生物物理进展 2007年第9期34卷 952-959页

作者：刘庆斌李艳华杨印祥袁红丰张锐秦立蓬吕洋张赛男孙迪金陈琳白慈贤南雪王韫芳裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相... 详细信息

为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相似的序列,提示,它可能受NRSF调控.构建了含NRSF基因的慢病毒载体,将其稳定转染于INS-1细胞.构建了3种荧光素酶报告载体:含有人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体,pGL3-Basic载体和含有2拷贝NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体.利用稳定转染及瞬时转染实验观察NRSF对报告载体中荧光素酶活性的影响.利用电泳迁移率变动分析实验观察NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况,并通过竞争结合实验、引入特异性抗体实验证实探针与蛋白质结合的特异性.RT-PCR检测证实,感染空病毒的INS-1细胞不表达NRSF,感染含目的基因慢病毒的INS-1细胞能表达NRSF.将含有hInsP-LUC的慢病毒载体稳定转染于上述2种细胞,荧光素酶活性分析结果显示,NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性.瞬时转染hInsP-LUC报告系统于上述2种细胞,结果也显示NRSF能明显抑制胰岛素启动子-荧光素酶的活性.将含有NRSE-LUC的报告载体瞬时转染于上述2种细胞,结果表明过表达NRSF的INS-1细胞组的荧光素酶相对值比对照组有明显下降.电泳迁移率变动分析实验进一步证实,此NRSE样序列可以与NRSF蛋白特异结合,这种特异结合可以被标准的NRSE序列所竞争.结果表明,人胰岛素启动子中含有NRSE样序列,该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性.这一研究工作有助于进一步了解NRSF在胰岛细胞中的调控作用.

关键词：神经元限制性沉默因子(NRSF) 神经元限制性沉默元件(NRSE) 胰岛素启动子

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不止是沉默——神经元限制性沉默因子及其作用元件的研究进展

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生理科学进展 2007年第3期38卷 239-241页

作者：刘庆斌李艳华裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称repressor element silencing transcription factor,REST)是一种锌指(zincfinger)蛋白,它能与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer element,NRSE;又称repressor element-1,RE-1)相结合,使序列中的组蛋白发生去乙酰化,从而对某些神经性基因的表达发挥阻遏作用。随着研究的深入,人们发现NRSF-NRSE在神经发育过程中有着复杂的调控功能,这主要是由于NRSF/NRST蛋白及REST辅助蛋白(CoREST)介导的甲基化作用,NRSF蛋白转录后形成的一系列剪切体也可能参与其中。另外,NRSF及其不同的剪切体还与一些神经系统疾病和肿瘤的发生密切相关。深入研究NRSF的调控机制对于进一步了解一些神经系统疾病的发生有着重要意义。

关键词：神经元限制性沉默因子神经元限制性沉默元件去乙酰化甲基化神经特异性基因

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自体骨髓间充质干细胞为种子细胞构建组织工程化全层皮肤

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中国科学（C辑） 2007年第3期37卷 262-270页

作者：何丽娟南雪王韫芳管利东白慈贤施双双袁红丰陈琳刘大庆裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

利用自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)为种子细胞分别在体外一定条件下向表皮细胞和真皮成纤维细胞诱导分化,并且和Ⅰ型胶原膜复合后移植修复裸鼠皮肤创面,观察以自体BMSCs为种子细胞构建组织工程化全层... 详细信息

利用自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)为种子细胞分别在体外一定条件下向表皮细胞和真皮成纤维细胞诱导分化,并且和Ⅰ型胶原膜复合后移植修复裸鼠皮肤创面,观察以自体BMSCs为种子细胞构建组织工程化全层皮肤的可行性.研究发现,将分离纯化的BMSCs接种于表皮细胞诱导体系中,3天后细胞即发生形态改变,汇合成表皮细胞特有的“铺路石”状;透射电子显微镜观察到张力原纤维、黑色素小体和透明角质颗粒;诱导分化细胞表达表皮细胞表面标志CK19和CK10,且CK19的诱导分化效率达到60%,表明诱导分化的细胞大部分为表皮干细胞;通过检测细胞诱导前后紫外线照射诱发的凋亡状况,证实诱导后的细胞具有抵抗紫外线照射的功能;另一方面,BMSCs在真皮成纤维细胞诱导体系作用下,超微结构观察到细胞外胶原微纤维的沉积,RT-PCR证实诱导分化细胞具有分泌Ⅰ型胶原的功能;放射免疫法检测到诱导后的细胞还具有分泌细胞因子IL-6与IL-8的功能,其最高分泌量分别为115.06pg/mL和0.84ng/mL.体内移植实验也证实,BMSCs与生物支架材料复合后具有明显促进皮肤缺损创面愈合的作用.研究结果表明,BMSCs具有向表皮细胞和成纤维细胞分化的潜能,以及作为种子细胞构建具有生物学功能的组织工程化全层皮肤的可行性,并且自体来源的BMSCs构建的皮肤组织无免疫排斥风险,具有广阔的临床应用前景.

关键词：骨髓间充质干细胞分化表皮真皮组织工程

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胚胎干细胞向肝系细胞定向分化及其在肝再生中的应用

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科学通报 2007年第20期52卷 2341-2347页

作者：裴海云王韫芳裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

细胞移植和生物人工肝(bioartificial liver,BAL)作为终末期肝病的辅助治疗方法,在越来越受到广泛关注的同时,也面临着细胞来源、数量限制、存活期短、功能迅速降低等问题,因此迫切需要寻找新的、合适的细胞来源.胚胎干细胞(embryonic s... 详细信息

细胞移植和生物人工肝(bioartificial liver,BAL)作为终末期肝病的辅助治疗方法,在越来越受到广泛关注的同时,也面临着细胞来源、数量限制、存活期短、功能迅速降低等问题,因此迫切需要寻找新的、合适的细胞来源.胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)是从囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM)中分离获得的、具有无限增殖能力和分化全能性的原始细胞,能在特定的诱导条件下分化成各种组织特异性细胞,在临床上具有极其广阔的应用前景,其向肝系细胞的定向分化使其可能成为肝脏细胞移植和BAL的一个重要细胞来源.目前,研究重点在于控制分化过程以获得足够数量的所需类型细胞.本文概括了肝脏的发育与分化,综述了ESC向肝系细胞定向诱导分化的最新研究进展,并对其在肝再生中的应用和存在问题也进行了探讨,希冀对该领域的研究提供一些新的思路.

关键词：胚胎干细胞肝细胞分化肝再生

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胚胎干细胞自我复制及亚全能分化特性维持的分子机制

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中国科学（C辑） 2007年第3期37卷 257-261页

作者：刘雨潇吉蕾王韫芳裴雪涛军事医学科学院野战输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

微环境中的各种细胞因子与细胞内的多种转录因子通过一定的信号系统相互作用构成网络,共同调控胚胎干细胞的自我复制.本文对维持胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)亚全能分化特性的相关分子、信号通路以及它们的作用方式进行了综述... 详细信息

微环境中的各种细胞因子与细胞内的多种转录因子通过一定的信号系统相互作用构成网络,共同调控胚胎干细胞的自我复制.本文对维持胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)亚全能分化特性的相关分子、信号通路以及它们的作用方式进行了综述,探讨了胚胎干细胞自我复制及亚全能分化特性维持的分子机制.

关键词：胚胎千细胞自我复制信号网络分子机制

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胚胎干细胞：从基础到临床有多远

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中华实验外科杂志 2007年第5期24卷 517-518页

作者：裴海云王韫芳裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

尽管随着医学技术的快速发展，越来越多的疾病被彻底征服，然而，组织、器官的不可逆损伤或功能衰竭仍是困扰人类健康的世界性医学难题。全世界每年有数以百万计的患者因为遭受各种形式的疾病及创伤，导致组织器官和功能丧失，需要进行... 详细信息

尽管随着医学技术的快速发展，越来越多的疾病被彻底征服，然而，组织、器官的不可逆损伤或功能衰竭仍是困扰人类健康的世界性医学难题。全世界每年有数以百万计的患者因为遭受各种形式的疾病及创伤，导致组织器官和功能丧失，需要进行移植重建。但令人遗憾的是，组织、器官移植作为一种替代治疗方法，尽管有其巨大的治疗作用，但仍然是一种“拆东墙补西墙”的有损伤和有代价的治疗方法，很难满足临床救治工作的需要。

关键词：胚胎干细胞临床组织器官医学技术治疗方法器官移植人类健康功能衰竭

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siRNA沉默HIF-1α对胎肝基质细胞SDF-1α表达的影响

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生物化学与生物物理进展 2007年第10期34卷 1040-1048页

作者：吉蕾习佳飞袁红丰张鹏刘雨潇王韫芳施双双陈琳南雪白慈贤裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染... 详细信息

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式细胞分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测了转染细胞中HIF-1α基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,常氧下培养的细胞HIF-1α基因表达量仅为其相对表达量的18.8%和25.5%,干涉效率分别为81.2%和74.5%,低氧处理后的细胞HIF-1α相对表达量分别为对照组的21.2%和29.3%,干涉效率分别为78.8%和70.7%,均具有显著差异.蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达也明显受抑制,且重组干涉质粒pSicoR-HIF-1α1的干涉效应较强.RT-PCR、免疫荧光和ELISA法检测了沉默HIF-1α后胎肝基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)在RNA和蛋白质水平的表达变化,干涉后细胞SDF-1α的表达明显减低.低氧条件下SDF-1α基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在干细胞增殖分化的分子调控机制中具重要作用.

关键词： siRNA 基因沉默低氧诱导因子1α 慢病毒基质细胞基质细胞衍生因子1α

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表皮形态发生素(Epimorphin)与表皮形态发生

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第6期23卷 436-441页

作者：周军年王韫芳裴雪涛军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室北京100850

表皮形态发生素(epimorphin又称为syntaxin2)是哺乳动物中高度保守的一个间质细胞表面膜蛋白,胞外区包含有1个19个氨基酸残基的部位(NL肽序列),是其与细胞的结合位点,但发挥效应必须有其它的胞外区存在.目前,已经发现它调控下游的2个分... 详细信息

表皮形态发生素(epimorphin又称为syntaxin2)是哺乳动物中高度保守的一个间质细胞表面膜蛋白,胞外区包含有1个19个氨基酸残基的部位(NL肽序列),是其与细胞的结合位点,但发挥效应必须有其它的胞外区存在.目前,已经发现它调控下游的2个分子MMP3和C/EBPβ,但对于其信号通路还知之甚少,推测其可能通过直接或者间接磷酸化表皮生长因子受体(EGFR)而激发MAPK/ERK信号通路.它在多种表皮组织(包括肺、肠、肝、乳腺、胰腺、毛囊、胆囊、血管内皮等)的表皮形态发生,尤其是腺管状结构的形态发生过程中发挥重要作用.依靠极性和非极性2种不同的表达方式,epimorphin可以选择性介导腺管形态发生的2个关键过程:分支形态发生和腔形态发生,分支状形态发生涉及到腺管的发生和延展,腔形态发生涉及到腺管直径的增大.

关键词：表皮形态发生素表皮-间质相互作用表皮形态发生极性/非极性表达

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