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ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况

生物技术通讯 2010年第5期21卷 711-714页

作者：郑霖马玉媛颜奇坡叶小丽郭逸田克恭章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850 中国动物疫病预防控制中心北京100094

目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC... 详细信息

目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC分泌IFN-γ的情况。结果:猪感染高致病性PRRSV后,PBMC分泌IFN-γ的能力明显增强,对照组无明显变化。结论:该结果可为研究高致病性PRRSV致病机理提供参考,为评价PRRSV疫苗诱发的细胞免疫效应提供依据。

关键词：酶联免疫斑点法猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 γ-干扰素

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酶联免疫斑点法在新发传染病疫苗研究中的应用

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生物技术通讯 2011年第1期22卷 135-138页

作者：马玉媛郭逸郑霖田克恭章金刚军事医学科学院野战输血研究所/国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850 中国动物疫病预防控制中心北京100094

酶联免疫斑点法(ELISPOT)是一项具有较高敏感性和特异性的细胞免疫学检测技术,目前常用于疫苗开发中评价疫苗诱发的细胞免疫效应。我们就ELISPOT技术的原理、具体实验操作、技术优势,及其在新发传染病疫苗研究中的应用等进行综述。

关键词：酶联免疫斑点法新发传染病疫苗

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重要血液病毒抗原蛋白超灵敏检测技术研究

重要血液病毒抗原蛋白超灵敏检测技术研究

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2014中国输血协会第七届输血大会

作者：尹惠琼姬长甫刘军王蕊朱凤宣章金刚军事医学科学院野战输血研究所血液生物制品研究室国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室 100850

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血液制品的病毒灭活/去除技术平台

血液制品的病毒灭活/去除技术平台

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2014中国输血协会第七届输血大会

作者：尹惠琼王蕊朱凤宣王建国杨姝章金刚军事医学科学院野战输血研究所血液生物制品研究室国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室 100850

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五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基N克隆与序列分析

五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基N克隆与序列分析

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：马玉媛颜奇坡杨勇贤吕茂民吴健敏田克恭章金刚国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室军事医学科学院野战输血研究所北京100850 国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室军事医学科学院野战输血研究所北京100850 广西壮族自治区兽医研究所南宁530001 农业部兽医诊断中心北京100094

目的：建立五指山猪内源性反转录病毒(PERV)前病毒全基因克隆，并进行序列分析。方法：将PERV前病毒全基因分为两个大片段分别进行扩增，将两片段依次插入到低拷贝质粒载体pWSK29中，构建得到全基因克隆并测序，运用生物信息学方法... 详细信息

目的：建立五指山猪内源性反转录病毒(PERV)前病毒全基因克隆，并进行序列分析。方法：将PERV前病毒全基因分为两个大片段分别进行扩增，将两片段依次插入到低拷贝质粒载体pWSK29中，构建得到全基因克隆并测序，运用生物信息学方法对其序列进行分析。结果：构建得到前病毒全基因克隆，测序后与Genbank中PERV全长序列进行比对，进行了序列分析，获得了基于Env氨基酸序列的进化树。结论：首次获得五指山猪来源的PERV前病毒全基因克隆，为进一步研究PERV生物学特性及构建感染性分子克隆奠定了基础。

关键词：五指山猪内源性反转录病毒基因克隆序列分析

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五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基因克隆与序列分析

五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基因克隆与序列分析

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2012第四届中国兽药大会

作者：马玉媛吕茂民徐述吴健敏田克恭章金刚国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室，军事医学科学院野战输血研究所北京 100850 国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室，军事医学科学院野战输血研究所北京 100850 广西壮族自治区兽医研究所南宁 530001 农业部兽医诊断中心北京 100094

中国特有小型猪有望为异种移植提供安全可靠的合适供体。猪内源性反转录病毒是异种移植中最受关注的病毒。然而，目前对中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒的研究尚不深入。本研究中，应用PcR技术将五指山猪内源性反转录病毒前病... 详细信息

中国特有小型猪有望为异种移植提供安全可靠的合适供体。猪内源性反转录病毒是异种移植中最受关注的病毒。然而，目前对中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒的研究尚不深入。本研究中，应用PcR技术将五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基因分为两段进行扩增，然后构建前病毒全基因克隆，运用生物信息学方法对其序列进行分析，并与Genbank中收录的其他PERV全基因序列进行比对，在此基础上还进行了进化分析，构建了基于Env氨基酸序列的进化树。结果表明，五指山猪来源的PERV前病毒全长为8899bp，含有完整的gag、pol、env的0RF，两端为5’LTR与3’LTR两个长末端重复序列。序列比对分析发现PERV—wzsP与其他来源的PERV毒株高度相似但仍具有一定的差异性。进化分析结果表明PERV—wzs与其他A亚型毒株属于同一分支，这与PCR分型鉴定的结果也相一致。此外，我们还发现该株PERV前病毒的5’LTR中有多个u3重复金的存在，这可能会导致PERV—wzs在宿主细胞中复制能力的增强;3’LTR中含有PERV—c亚型中的特异性序列，这将可能导致部分的PERV—c序列与PERV—A序列发生重组。然而，我们还需要进行更深入的研究来对这种推测进行验证。本研究有助于深入了解五指山猪内源性反转录病毒的分子生物学特性，并为下一步构建PERV感染性克隆奠定了良好基础。

关键词：五指山猪反转录病毒基因克隆序列分析

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猪内源性反转录病毒整合拷贝数检测方法的建立

猪内源性反转录病毒整合拷贝数检测方法的建立

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：马玉媛杨勇贤颜奇坡吕茂民吴健敏田克恭章金刚国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室军事医学科学院野战输血研究所北京100850 国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室军事医学科学院野战输血研究所北京100850 广西壮族自治区兽医研究所南宁530001 农业部兽医诊断中心北京100094

目的：建立猪内源性反转录病毒(PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。方法：设计一对特异性引物，采用基于SYBR Green Ⅰ的实时荧光定量PCR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的... 详细信息

目的：建立猪内源性反转录病毒(PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。方法：设计一对特异性引物，采用基于SYBR Green Ⅰ的实时荧光定量PCR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的拷贝数，从而建立起PERV整合拷贝数的检测方法，并对该方法进行特异性、敏感性、重复性分析。结果：该检测方法特异性较高，敏感性较普通PCR方法高100倍。结论：建立了基于SYBR Green Ⅰ的PERV拷贝数的定量PCR检测方法，可用于实验用猪的病原安全性评价，也可用于异种移植后PERV存在与表达状况的监测。

关键词：猪反转录病毒病毒感染免疫学检验荧光PCR检测

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猪内源性反转录病毒整合拷贝数检测方法的建立

猪内源性反转录病毒整合拷贝数检测方法的建立

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2012第四届中国兽药大会

作者：马玉媛杨勇贤吕茂民颜奇坡郑霖丁芳吴健敏田克恭章金刚国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室，军事医学科学院野战输血研究所北京 100850 国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室，军事医学科学院野战输血研究所北京 100850 广西壮族自治区兽医研究所南宁 530001 农业部兽医诊断中心北京 100094

本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus，PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物，采用基于SYBR Green I的实时荧光定量PcR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(p... 详细信息

本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus，PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物，采用基于SYBR Green I的实时荧光定量PcR方法，检测小型猪基因组DNA中多聚酶基因(pol)的拷贝数，估算出单细胞基因组中PERV整合的拷贝数，从而建立起PERV整合拷贝数的检测方法，并对该方法进行特异性、敏感性、重复性分析。结果表明，该检测方法特异性较高，敏感性高于普通PCR方法。五指山猪与巴马小型猪基因组中均可检测到pol基因的存在，五指山猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为1.38±0.33至14.23±3.31之间，巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数为2.96±0.76至58.46±3.50之间。统计学分析表明五指山猪与巴马小型猪单细胞基因组中PERV的拷贝数具有显著性差异，五指山猪基因组中整合的PERV拷贝数较低。五指山猪基因组中PERV的基因序列负荷较低，因此有希望通过选择性育种获得PERV低拷贝猪，在此基础上则易于进一步筛选出无完整PERV前病毒的小型猪个体，也易于通过基因敲除去除PERV，从而为异种移植提供合适供体。此外，基于SYBRGreen Ⅰ的PERV拷贝数的定量PcR检测方法，简便易行，可在短时间内检测大量样品，费用低廉，利于对猪群进行大规模筛选，既可用于实验用猪的病原安全性评价，也可用于异种移植后PERV存在与表达状况的监测。

关键词：小型猪猪内源性反转录病毒拷贝数荧光定量PCR

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ELISPOT检测高致病性PRRSV感染后猪γ-干扰素的分泌情况

ELISPOT检测高致病性PRRSV感染后猪γ-干扰素的分泌情况

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：郑霖马玉媛颜奇坡叶小丽郭逸田克恭章金刚军事医学科学院野战输血研究所/国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室中国动物疫病预防控制中心

为了解猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与宿主免疫系统的相互作用,对于研制PRRSV疫苗及防控PRRSV感染均至关重要。本研究采用基于ELISPOT技术的猪IFN-γ检测方法,对高致病性PR... 详细信息

为了解猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)与宿主免疫系统的相互作用,对于研制PRRSV疫苗及防控PRRSV感染均至关重要。本研究采用基于ELISPOT技术的猪IFN-γ检测方法,对高致病性PRRSV感染后猪IFN-γ分泌水平进行检测,分析病毒感染后猪外周血

关键词：高致病性 PRRSV ELISPOT

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猪细胞因子Taq Man实时定量RT-PCR检测体系的建立

猪细胞因子Taq Man实时定量RT-PCR检测体系的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：马玉媛郭逸颜奇坡叶小丽张启模郑霖田克恭章金刚军事医学科学院野战输血研究所/国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室中国动物疫病预防控制中心

近年来,猪细胞免疫的研究逐渐引起人们的重视。了解病毒与猪免疫系统之间相互作用的机制,尤其是细胞免疫应答机制,既有助于防治猪病毒性疾病,也有助于对新型疫苗诱发的免疫效应进行评价。此外,猪作为实验动物已常被用作多种人类疾病的模... 详细信息

近年来,猪细胞免疫的研究逐渐引起人们的重视。了解病毒与猪免疫系统之间相互作用的机制,尤其是细胞免疫应答机制,既有助于防治猪病毒性疾病,也有助于对新型疫苗诱发的免疫效应进行评价。此外,猪作为实验动物已常被用作多种人类疾病的模型,因此对其免疫系统及免疫应答情况的研究也具有重要意

关键词：实时定量检测体系 RT-PCR Taq Man 细胞因子

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