检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2007年第6期18卷 1013-1015页

作者：徐述马玉媛吕茂民史利军章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室

反转录病毒载体是目前基因治疗中应用最广泛的基因运载工具之一,具有能稳定整合入宿主细胞、持久表达目的基因、感染细胞范围广、基因容量较大等优点,但其生物安全性还存在争议。在简要介绍反转录基因治疗病毒载体的基础上,对反转录病... 详细信息

反转录病毒载体是目前基因治疗中应用最广泛的基因运载工具之一,具有能稳定整合入宿主细胞、持久表达目的基因、感染细胞范围广、基因容量较大等优点,但其生物安全性还存在争议。在简要介绍反转录基因治疗病毒载体的基础上,对反转录病毒载体中外源目的基因的表达调控及反转录病毒载体的安全性评价进行了综述。

关键词：基因治疗反转录病毒载体基因表达调控安全性评价

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嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第9期30卷 804-808页

作者：颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850 解放军第519医院检验科四川西昌615000 广西壮族自治区兽医研究所中国动物疫病预防控制中心

目的分析嗜人性猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retroviruses,PERV）感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时... 详细信息

目的分析嗜人性猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retroviruses,PERV）感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.

关键词：猪内源性反转录病毒 HEK293细胞 Stathmin 差异表达

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五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 248-250页

作者：张念马玉媛向思龙贾俊婷吴健敏章金刚吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心/病毒安全检测实验室北京100850 广西壮族自治区兽医研究所广西南宁530001

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98... 详细信息

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。

关键词：近交系五指山小型猪猪内源性反转录病毒囊膜基因 G→A突变

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生物技术产品的病毒安全性

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中国医药生物技术 2007年第2期2卷 81-84页

作者：章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850

　　生物医药技术的迅猛发展引起了医药行业的重大革命,生物医药已经成为最为活跃、发展最快的产业之一,上市和正在研发的产品不断增加,"重磅炸弹"级生物产品不断出现.纵观世界各国政府和行业主管部门,大多均将生物技术和生... 详细信息

　　生物医药技术的迅猛发展引起了医药行业的重大革命,生物医药已经成为最为活跃、发展最快的产业之一,上市和正在研发的产品不断增加,"重磅炸弹"级生物产品不断出现.纵观世界各国政府和行业主管部门,大多均将生物技术和生物医药作为经济发展中的重点支持行业和高新技术发展中的支柱产业,其发展空间和发展前景倍受金融巨头的关注[1-3].……

关键词：病毒安全性动物源生化制品生物技术产品

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蓝舌病毒核酸检测技术研究进展

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生物技术通讯 2008年第5期19卷 757-759页

作者：尹惠琼章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850

蓝舌病毒(BTV)血清型较多,其核酸检测主要涉及通用型检测和分型检测,寻求相应的适宜检测靶基因尤为重要。BTV核酸检测技术是蓝舌病诊断的重要手段,其发展过程主要经历了基因杂交探针技术、RT-PCR检测技术、实时荧光定量PCR检测技术及基... 详细信息

蓝舌病毒(BTV)血清型较多,其核酸检测主要涉及通用型检测和分型检测,寻求相应的适宜检测靶基因尤为重要。BTV核酸检测技术是蓝舌病诊断的重要手段,其发展过程主要经历了基因杂交探针技术、RT-PCR检测技术、实时荧光定量PCR检测技术及基因芯片检测技术等;同时,建立和完善高通量BTV筛查技术成为迫切要求。

关键词：蓝舌病毒 RT-PCR 实时荧光定量PCR 基因芯片

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群特异性蓝舌病病毒单克隆抗体的制备和鉴定

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生物技术通讯 2008年第6期19卷 866-869页

作者：杨姝李文超吕茂民尹惠琼马玉媛刘明章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850

目的:制备群特异性抗蓝舌病病毒(BTV)单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立检测BTV抗原及抗体的ELISA方法奠定基础。方法:用纯化的BTV颗粒为免疫抗原免疫BALB/c鼠,以大肠杆菌表达的VP7蛋白作为筛选抗原,用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株... 详细信息

目的:制备群特异性抗蓝舌病病毒(BTV)单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立检测BTV抗原及抗体的ELISA方法奠定基础。方法:用纯化的BTV颗粒为免疫抗原免疫BALB/c鼠,以大肠杆菌表达的VP7蛋白作为筛选抗原,用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株;选取抗体效价最高的一株制备BTV单克隆抗体,以该抗体为捕获抗体与8种不同血清型BTV进行ELISA反应,结果与细胞病变反应进行比对;以该抗体为竞争抗体,与12种不同血清型绵羊BTV抗血清进行竞争ELISA反应,并将结果与参比c-ELISA试剂盒结果进行比对。结果:筛选出5株稳定分泌BTV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并选其中一株(3E2)制备了高纯度的单克隆抗体;该单抗用于检测不同血清型BTV,与细胞病变反应结果完全相符;用于检测不同血清型绵羊BTV抗血清,其结果与参比c-ELISA试剂盒符合率为100%,与鹿流行性出血热病毒抗原和抗体均无交叉反应。结论:制备的BTV单克隆抗体具有良好的群特异性,可用于检测不同血清型BTV抗原及BTV抗体。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体细胞融合

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抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立

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动物医学进展 2011年第8期32卷 12-16页

作者：张启模杨妹马玲马玉媛郭逸章金刚吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室北京100850 广西兽医研究所广西南宁530001

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞... 详细信息

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L^10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。

关键词：氯霉素单克隆抗体化学发光免疫分析

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猪天然抗病毒分子APOBEC3F对猪内源性反转录病毒的抑制作用研究

猪天然抗病毒分子APOBEC3F对猪内源性反转录病毒的抑制作用研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：马玉媛孙宇罗佳张念吕茂民章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室

目的在对HIV-1的研究中发现的一类新型抗病毒分子——载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3(Apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide-like 3,APOBEC3)引起了人们的广泛关注。APOBEC3F(A3F)及APOBEC3G(A3G)已被证实可有效阻止内源性与外源性反转录病毒的复制,对Vif缺陷的HIV-1的抑制尤为明显,在宿主抗病毒天然免疫应答中发挥着重要作用。猪内源性反转录病毒(Porcineendogenous retrovirus,PERV)是人们在猪→人异种移植中最为关注的反转录病毒,具有通过异种移植跨种传播给人的风险。如果能以猪自身的免疫机制清除PERV或将其抑制在极低的滴度范围内,那么PERV在异种器官移植上所能产生的风险就能得到有效的控制。猪体内也存在一种APOBEC分子一pA3F(PorcineAPOBEC3F,pA3F)。本研究旨在确定pA3F是否对PERV具有抑制作用。方法在PK-15细胞中利用pA3F过表达及RNA干扰等手段,通过相对荧光定量PCR及ELISA方法对PERV pol基因mRNA及PERV反转录酶变化进行检测。结果结果显示,在pA3F过表达的PK-15细胞中PERV pol基因mRNA与PERV反转录酶水平与对照相比显著降低(P<0.05),在转染30μg pA3F表达载体的实验组改变最显著,PERV pol基因mRNA变化倍数达到0.252±0.032,反转录酶降低至(6.85±0.69)pg/孔,且变化与pA3F的表达量之间具有剂量依赖关系;在pA3F下调细胞中PERV pol基因mRNA与PERV反转录酶水平与对照组比较显著提高(P<0.05),其中以沉默pA3F的740～764 bp的序列最有效,pol基因mRNA增长(4.172+0.251)倍,反转录酶达到(88.58+1.46)pg/孔。实验结果说明,PK-15细胞中pA3F对PERV的复制具有抑制作用。结论本研究为猪异种移植PERV生物安全性研究提供潜在的新靶标,也为研究APOBEC分子与反转录病毒之间的相互作用及病毒逃逸该作用的机制奠定基础。

关键词： APOBEC3F 猪内源性反转录病毒荧光定量PCR RNA干扰

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中国特有小型猪内源性反转录病毒感染性克隆的构建与鉴定

中国特有小型猪内源性反转录病毒感染性克隆的构建与鉴定

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：马玉媛颜奇坡向思龙吕茂民章金刚军事医学科学院野战输血研究所、国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室

目的猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)是猪-人异种移植及猪源生物制品研发中备受关注的病毒,PERV存在跨种传播感染人源细胞的风险。中国特有小型猪是适合医学实验研究和人类异种移植的优良品种。本研究以中国特... 详细信息

目的猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)是猪-人异种移植及猪源生物制品研发中备受关注的病毒,PERV存在跨种传播感染人源细胞的风险。中国特有小型猪是适合医学实验研究和人类异种移植的优良品种。本研究以中国特有小型猪来源的PERV为研究对象,构建PERV感染性克隆,为下一步研究中国特有小型猪内源性反转录病毒的分子生物学特性奠定基础。方法首先将PERV前病毒全基因分为2个大片段分别进行扩增,将两片段依次插入到pBluescriptⅡSK+载体中,构建得到全基因克隆,经菌落PCR和酶切鉴定正确。根据此方法共构建9个PERV前病毒全基因克隆用于感染性克隆的筛选。将9个全基因克隆分别转染HEK293细胞后,经PCR、RT-PCR鉴定分析,结果发现仅有1个全基因克隆转染后细胞中有PERV 3种结构基因的存在与表达,将该克隆命名为WZS-PERV(2)。收集转染后的细胞培养上清,感染新的HEK293细胞,进行PCR、实时定量RT-PCR、Western Blot、间接免疫荧光检测、序列测定等对其进行鉴定。结果结果表明,WZS-PERV(2)为感染性克隆,能够在体外感染HEK293细胞。此外,WZS-PERV(2)序列中含有PERV-C亚型的LTR及PERV-A亚型的受体结合区(RBD)序列,因此也属于PERV A/C重组毒株。结论本研究在成功构建我国特有小型猪来源的PERV前病毒全基因克隆后,首次构建并筛选获得PERV感染性分子克隆,这对于阐明嗜人性PERV的生物学特性,探索PERV感染人源细胞后可能产生的潜在的生理病理效应,以及分析和评价其在猪-人异种移植中的病原安全性都具有重要意义。

关键词：中国特有小型猪猪内源性反转录病毒感染性克隆异种移植

来源：评论

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中国特有小型猪内源性反转录病毒的细胞嗜性研究

中国特有小型猪内源性反转录病毒的细胞嗜性研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：马玉媛叶小丽张念吕茂民章金刚军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室

目的猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)是猪-人异种移植、猪源制品及生物活性材料中备受关注的病毒,存在跨种传播感染人源细胞的风险。中国特有小型猪是适合医学实验研究和人类异种移植的优良品种。本研究旨在分... 详细信息

目的猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)是猪-人异种移植、猪源制品及生物活性材料中备受关注的病毒,存在跨种传播感染人源细胞的风险。中国特有小型猪是适合医学实验研究和人类异种移植的优良品种。本研究旨在分析中国特有小型猪内源性反转录病毒的细胞嗜性。方法首先,构建五指山猪来源PERV囊膜基因的真核表达质粒pHCMV-env,向鼠干细胞病毒载体(MSCV)内插入GFP报告基因,并经菌落PCR、酶切及测序鉴定;将pHCMV-env、反转录病毒载体MSCVneo-GFP和辅助质粒pGag-Pol三质粒共转染HEK293T细胞,72 h后收集转染细胞上清,超速离心浓缩后直接感染HEK293T细胞,提取转染细胞的基因组和总RNA,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况,根据GFP的表达检测细胞的感染情况,并利用流式细胞分析对病毒滴度进行检测。结果结果显示,PcR、RT一PcR、GFP表达检测均为阳性,说明env基因能够整合并转录,包装得到的假型病毒粒子具有感染性。大量包装病毒,同样的方法感染***等多种动物细胞,进行PERv体外易感性的检测。结果表明,中国特有小型猪来源PERV仅可感染人源细胞、水貂细胞及猫源细胞,对小鼠、大鼠、仓鼠、非洲绿猴和Madin一Darby犬来源细胞均不易感,且对HEK293T细胞的嗜性最强,其次是水貂细胞***,对猫来源的细胞FK一81嗜性最弱。结论研究结果初步说明,难以利用啮齿类等常用的实验动物来建立五指山猪来源PERv的体内安全性评价系统。将得到的PERV-WZSP体外宿主范围与国外文献报道的其它来源PERv的宿主范围进行比较,发现五指山猪来源PERV具有较窄的宿主范围。本研究结果将有助于深入进行异种移植的病毒安全性评价。

关键词：猪内源性反转录病毒 Env囊膜蛋白假病毒细胞嗜性

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