检索结果-内蒙古大学图书馆

中华血液学杂志 2018年第1期39卷 28-31页

作者：陈琳岳文谢小燕张秀媛吕洋刘大庆习佳飞曲洺逸范增房芳裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室华南生物医药研究院北京100850

目的观察泊洛沙姆188（P188）对体外三维（3D）培养诱导脐血单个核细胞向巨核细胞分化的影响。方法将分离的脐血单个核细胞分别接种于细胞瓶和细胞培养袋中，后者采用WIGGENS摇床模拟生物反应器进行3D培养。在巨核细胞诱导培养基中加入P... 详细信息

目的观察泊洛沙姆188（P188）对体外三维（3D）培养诱导脐血单个核细胞向巨核细胞分化的影响。方法将分离的脐血单个核细胞分别接种于细胞瓶和细胞培养袋中，后者采用WIGGENS摇床模拟生物反应器进行3D培养。在巨核细胞诱导培养基中加入P188体外培养14d，观察细胞形态、计数细胞数并计算细胞存活率，采用流式细胞术观察巨核细胞表面标志表达情况。结果与采用传统的细胞培养瓶二维（2D）培养诱导巨核细胞相比，2D＋P188培养组巨核系CD41＋、CD41＋／CD61＋、CD61＋细胞数明显增加（P值均〈0．01）；在3D培养中加入P188，细胞体积变大，核形状不规则，胞质含紫红色颗粒，细胞分化更接近成熟。2D培养、3D培养及3D＋P188培养组组间巨核细胞表面标志CD41、CD41／CD61、CD61表达水平差异有统计学意义（P值均〈0．01）。LSD—t检验两两比较显示，与2D培养相比，3D培养诱导巨核细胞存活率及细胞数均降低（P值分别为0．018、0．027），3D＋P188培养组细胞数、细胞存活率与2D和3D培养组比较差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。而3D培养组巨核细胞CD41／CD61表达水平为（36．30±1．27）％，高于2D培养组的（23．95±1．34）％（P=0．002），3D＋P188培养组CD41／CD61表达水平更高[（59．45±1．20）％]。结论3D培养有利于巨核系祖细胞诱导分化，但细胞存活率低，加入P188，细胞生存状态好，且诱导效率更高。

关键词：巨核细胞泊洛沙姆生物反应器诱导分化

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NK细胞对人肝癌细胞的杀伤作用及其可能机制

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军事医学 2017年第9期41卷 775-783页

作者：王文秀习佳飞赵月何丽娟周军年范增张彪王海洋曾泉南雪岳文裴雪涛广西医科大学南宁530021 军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室血液安全保障技术研究北京市重点实验室北京100850 华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(... 详细信息

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(lactate dehydrogenase cytotoxicity assay)等体外实验验证NK-92细胞对多种肝癌细胞的体外杀伤作用。同时建立人肝癌细胞株HepG2的裸鼠皮下荷瘤模型,每只裸鼠分别在荷瘤后第2、9、16、23天共4次通过尾静脉注射1×10~7个NK-92细胞,对照组注射等体积PBS,密切观察实验组和对照组裸鼠移植瘤大小、体积、质量以及裸鼠存活状态。荷瘤30 d后活杀裸鼠,取肿瘤组织进行大体观察,并对肿瘤组织切片进行HE染色和免疫荧光检测,明确瘤内磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)蛋白的表达。结果体外长期培养的NK-92细胞能保持典型的NK细胞表型特征,细胞活性好,利用ELISA和LDH实验对NK-92细胞的体外杀瘤能力进行鉴定。结果表明,其对多种肝癌细胞系均具有很好的杀伤作用。裸鼠抑瘤实验结果显示,体内NK-92细胞对肝癌组织有较好的杀伤作用,实验组肝癌组织体积明显小于对照组,且肝癌组织免疫组化和免疫荧光结果均表明GPC3表达明显降低。初步显示,NK细胞可能通过杀伤GPC3阳性肝癌细胞来发挥其治疗作用。结论NK细胞治疗有望作为有效的肝癌治疗手段。该研究利用NK-92细胞系为研究对象,证明其在体外和体内均对肝癌细胞有很好的杀伤作用,同时初步表明其对肝癌的杀伤作用机制可能是通过杀伤肝癌组织内的GPC3阳性细胞;该研究对进一步提高NK细胞对肝癌的治疗作用及明确其作用机制奠定了基础。NK细胞除抗肿瘤作用外对多种细菌和病毒等病原体有很好的杀伤作用,同时对进一步拓展NK细胞的应用范围提供了参考。

关键词：杀伤细胞,天然癌细胞,肝细胞毒作用磷脂酰肌醇蛋白聚糖类

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内皮微环境NOTCH信号通路促进人多能干细胞造血分化

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军事医学 2017年第9期41卷 767-774,785页

作者：赵月王文秀张博文何丽娟曾泉范增岳文裴雪涛习佳飞广西医科大学南宁530000 军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室血液安全保障技术研究北京市重点实验室北京100850 华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的体外诱导人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)向造血分化,富集生血内皮细胞,将其与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,体外建立内皮微环境促进多能干细胞造血分化的研究模型,进一步研究明... 详细信息

目的体外诱导人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)向造血分化,富集生血内皮细胞,将其与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,体外建立内皮微环境促进多能干细胞造血分化的研究模型,进一步研究明确内皮微环境影响造血干/祖细胞产生的作用及机制。方法将携带runx1c报告基因的hiPSC通过spin EB方法诱导分化形成拟胚体(embryonic body,EB),在诱导分化第10天通过免疫磁珠分选技术(magnetic-activated cell sorting,MACS)分选富集出CD34^+的生血内皮细胞,将生血内皮细胞与高表达DLL4的内皮微环境细胞Vera Vec共培养,进一步诱导其向造血干/祖细胞分化,最终建立体外研究NOTCH信号通路促进多能干细胞向造血干/祖细胞分化的研究模型。结果建立了单细胞培养hiPSC的技术方法,将单细胞培养的携带runx1c报告基因的hiPSC通过spin EB方法诱导其向造血细胞分化,在诱导分化第10天利用MACS技术分离富集了CD34^+的生血内皮细胞。同时获得了转染E4ORF1的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,UVEC)Vera Vec细胞,并对其NOTCH信号通路相关基因的表达进行了鉴定。结果表明,其在m RNA水平和蛋白水平均高表达NOTCH信号通路的配体DLL4。将分离富集的生血内皮细胞与高表达DLL4的内皮细胞共培养。结果显示,其能明显促进携带runx1c报告基因的hiPSC诱导分化时红色荧光td Tomato的表达和造血细胞的形成,以此作为模型可进一步研究内皮微环境促进多能干细胞向造血干/祖细胞分化的模型。结论成功建立了spin EB方法诱导多能干细胞分化的技术方法,能高效在体外富集生血内皮细胞,并将生血内皮细胞与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,在体外构建了内皮微环境促进内皮生血转化的研究模型,供进一步研究内皮微环境促进造血干/祖细胞分化的作用及其机制,为体外利用多能干细胞制备造血干/祖细胞奠定基础,有望最终在体外获得有完整功能的造血干细胞,用于临床造血干细胞移植治疗及战场辐射损伤救治,有一定的社会和军事应用价值。

关键词：人诱导性多能干细胞造血干细胞内皮微环境 NOTCH信号通路

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脐血单个核细胞来源红系祖细胞的诱导扩增及保存的研究

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中华血液学杂志 2016年第1期37卷 45-50页

作者：陈琳谢小燕习佳飞吕洋田宇刘大庆岳文李艳华南雪李思婷范增裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心北京100850

目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长... 详细信息

目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、重组人红细胞生成素的无血清培养基进行体外诱导脐血单个核细胞向红系祖细胞分化，并将诱导的红系祖细胞用不同的冻存液进行冷冻保存，观察红系祖细胞诱导、分化能力和红系祖细胞冷冻保存效果。结果随着诱导时间延长，细胞总数明显增多，培养14d红系祖细胞扩增约110倍，存活率为（88．92±0．95）％，红系祖细胞特异性标志CD71＋细胞占（86．77±9．11）％，CD71／CD235a细胞占（64．47±16．67）％。诱导10d多为中幼红细胞，可见血红蛋白表达的阳性细胞；诱导14d开始出现晚幼红细胞，细胞沉淀呈红色。诱导7d红系集落数为326．00±97．96，高于诱导前（61．60±20．03）。10％二甲基亚砜（DMSO）＋2％人血清白蛋白保存细胞复苏后红系祖细胞存活率、回收率分别为（90．32±1．80）％、（93．66±1．87）％，将50％自体脐血浆与10％DMSO、2％人血清白蛋白联用可获得更好的保护效果。结论该无血清培养基可高效诱导、扩增红系祖细胞，10％DMSO＋2％人血清白蛋白＋50％自体脐血血浆可很好保存红系祖细胞。

关键词：胎血红系祖细胞冷冻保存单个核细胞

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过表达微小RNA miR-125b抑制肝癌细胞上皮-间质转换及促进细胞凋亡

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第6期32卷 656-664页

作者：张彪曾泉王海洋李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EM... 详细信息

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EMT过程和相关的TGF-β信号通路的影响,以及对于肝癌细胞凋亡的影响。以慢病毒载体p HRS-1cla-EGFP构建过表达miR-125b的载体质粒(p HRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP),并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,在293T细胞中进行慢病毒包装,浓缩病毒后,对MHCC97-H进行慢病毒感染并采用流式分选GFP阳性的细胞。实时定量PCR检测表明肝癌细胞稳转株MHCC97-H-PHRSmiR-125b-EGFP的miR-125b表达量是空载体转染组的6倍。Western印迹检测发现,与空载体对照组相比,MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中间质细胞标志α-SMA表达显著下调,上皮细胞标志E-cadherin表达显著上调,同样的,用Western印迹检测也发现MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中TGF-β信号通路关键下游分子Smad2和Smad4的表达显著下调,细胞凋亡检测结果表明,与对照组相比,过表达miR-125b的稳转株凋亡率增加到19.66%,加入TGF-β1后,过表达miR-125b的稳转株凋亡率进一步增加到74.7%。同样的,在体内治疗实验中,我们采用商品化的体内核酸转染试剂,在皮下肿瘤组织中过表达miR-125b mimics,结果表明miR-125b的过表达与肿瘤组织的凋亡成正相关性(r=0.83463,P<0.01),且免疫组化结果也表明,miR-125b过表达后,E-cadherin表达显著上调,α-SMA及Smad2和Smad4的表达显著下调。上述结果表明,我们成功构建了过表达miR-125b的肝癌细胞稳转株,并成功建立了肿瘤组织中过表达miR-125b mimics的动物模型,在体内外均观察到过表达miR-125b后对肝癌细胞EMT过程的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。相关研究结果加深了我们对miR-125b在肝癌中抑制肝癌发展作用机制的理解,及其作为潜在的治疗肝癌的新靶点的重要性。

关键词：肝细胞癌 miR-125b 过表达细胞凋亡

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小分子化合物诱导人胃上皮细胞直接转化为内胚层多潜能祖细胞

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科学新闻 2017年第4期 67-67页

作者：王韫芳 Jinhua Qin Shuyong Wang Wencheng Zhang Jialei Duan Jing Zhang Xin Wang Fang Yan Mingyang Chang Xiaofang Liu Bo Feng Jiang Liu 裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所军事医学科学院野战输血研究所组织工程研究室军事医学科学院全军干细胞与再生医学重点实验室国家863计划“干细胞与组织工程重大项目”总体专家组

文章简介内胚层干/祖细胞是肝脏、胰腺、小肠等内脏器官的共同起源,在再生医学的基础研究和临床应用中具有广阔的应用前景。因此,寻找一种安全高效的获取内胚层干/祖细胞的方式将具有极其重要的意义。本研究建立了单纯使用小分子化合物... 详细信息

文章简介内胚层干/祖细胞是肝脏、胰腺、小肠等内脏器官的共同起源,在再生医学的基础研究和临床应用中具有广阔的应用前景。因此,寻找一种安全高效的获取内胚层干/祖细胞的方式将具有极其重要的意义。本研究建立了单纯使用小分子化合物组合在胃粘膜基质细胞的支持作用下将人胃上皮细胞直接重编程为多潜能内胚层祖细胞(hiEndoPCs)的策略。化合物组合中包括

关键词：内胚层 Cs 重编程下胚层人胃上皮细胞干/祖细胞分子化合物

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间充质干细胞对造血干/祖细胞分化为巨核细胞的影响

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生物技术通讯 2014年第3期25卷 301-309页

作者：曲洺逸王静雪王思涵房芳陈琳张文成贾雅丽岳文谢小燕裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广东广州510005 全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850

目的:探讨间充质干细胞(MSC)共培养对体外诱导脐带血单个核细胞来源的造血干/祖细胞生成巨核细胞的影响。方法:分离得到骨髓和脐带2种来源的MSC,并对它们进行表面标志和多向分化能力的鉴定,同时通过实时定量PCR及对RT-PCR产物的电泳分析... 详细信息

目的:探讨间充质干细胞(MSC)共培养对体外诱导脐带血单个核细胞来源的造血干/祖细胞生成巨核细胞的影响。方法:分离得到骨髓和脐带2种来源的MSC,并对它们进行表面标志和多向分化能力的鉴定,同时通过实时定量PCR及对RT-PCR产物的电泳分析,对比相同培养代数下2种MSC表达造血因子的情况;用梯度离心法分离得到单个核细胞,通过直接接触或Trans-well分隔的方式分别与MSC共培养,观察细胞增殖情况,并检测巨核系特异性的表面标志和相关基因的表达。结果:骨髓和脐带来源的MSC均分泌对巨核细胞增殖分化有促进作用的造血因子,与造血干/祖细胞直接共培养,对于巨核细胞的增殖有明显的促进作用,分化效果不明显;在非接触共培养的条件下,对巨核细胞的增殖及分化都产生促进作用,且骨髓来源的MSC较脐带来源的MSC效果更加明显。结论:MSC与脐带血造血干/祖细胞非接触培养,对其向巨核分化和增殖的促进作用明显,本实验所用的骨髓来源MSC促分化效果更好。本研究为今后进一步优化巨核系诱导分化体系奠定了基础,并对未来体外大规模制备巨核系祖细胞应用于临床治疗有一定的指导作用。

关键词：巨核细胞间充质干细胞分化共培养

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间充质干细胞无异源/无血清培养基研发的现状和前景

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中国医药生物技术 2014年第2期9卷 133-135页

作者：张文成常铭洋王韫芳裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广州510000

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是广泛存在于成体骨髓、脂肪、牙髓及围产期脐血、脐带、胎盘等多种人体组织器官中，具有多向分化潜能、良好的体外扩增能力以及免疫调节功能的成体干细胞[1]，近年来在外科烧伤[2]、软组... 详细信息

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是广泛存在于成体骨髓、脂肪、牙髓及围产期脐血、脐带、胎盘等多种人体组织器官中，具有多向分化潜能、良好的体外扩增能力以及免疫调节功能的成体干细胞[1]，近年来在外科烧伤[2]、软组织填充[3]、终末期肝病[4]、心肌梗死[5]、糖尿病足[6]等疾病的治疗中展现出良好的安全性和有效性。

关键词：间充质干细胞无血清培养基成体干细胞人体组织器官多向分化潜能免疫调节功能 cells 软组织填充

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miR-155对肝癌细胞增殖的影响

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生物技术通讯 2014年第6期25卷 783-786页

作者：南雪曾泉吕洋姚海雷陈琳岳文裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广东广州510005

目的:在肝癌细胞系中过表达miR-155,研究其对肝癌细胞增殖的影响。方法:将pc DNA3.0-miR-155表达载体瞬时转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术对miR-155在转录水平的表达进行检测,采用CCK8法及克隆形成实验检测miR-155... 详细信息

目的:在肝癌细胞系中过表达miR-155,研究其对肝癌细胞增殖的影响。方法:将pc DNA3.0-miR-155表达载体瞬时转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术对miR-155在转录水平的表达进行检测,采用CCK8法及克隆形成实验检测miR-155过表达后对Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系增殖的影响。结果:转染细胞后72 h,经实时定量PCR检测,Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞中成熟miR-155的表达分别上调约431及16倍(P<0.01),说明其能有效高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,miR-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P<0.01)。结论:pc DNA3.0-miR-155转染Huh7.5.1及Hcclm3肝癌细胞系后能高效表达成熟miR-155,同时证明过表达miR-155能使肝癌细胞的增殖受到非常明显的促进。

关键词： miR-155 肝癌细胞增殖 miR-155

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高效诱导人胚胎干细胞成为内皮祖细胞

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生物化学与生物物理进展 2013年第6期40卷 548-555页

作者：房芳张博文何丽娟周军年王静雪岳文谢小燕裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850

血管的发生和发育不仅对胚胎形成中各器官的发育分化十分重要,并且对成体的创伤修复和生殖功能也具有重要意义.血管内皮细胞是形成心血管封闭管道系统的形态基础,体外多种细胞可经诱导分化产生出内皮祖/内皮细胞(endothelialprogenitor/... 详细信息

血管的发生和发育不仅对胚胎形成中各器官的发育分化十分重要,并且对成体的创伤修复和生殖功能也具有重要意义.血管内皮细胞是形成心血管封闭管道系统的形态基础,体外多种细胞可经诱导分化产生出内皮祖/内皮细胞(endothelialprogenitor/endothelial cells,EPCs/ECs),但是存在一些不足.鉴于人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)诱导分化的全能性和长期增殖能力,为EPCs/ECs提供了新的来源.现有文献报道,hESCs诱导分化为EPCs/ECs的比例较低,为了提高该诱导分化效率,我们使用分阶段的二维诱导方法,首先将细胞接种在超纯层纤连蛋白(Matrigel)上,之后通过在不同阶段添加不同的因子,最终获得CD31+KDR+细胞的比例可以达到16%.进一步内皮诱导分化的结果显示,获得的EPCs/ECs的比例可以达到约32%,这些细胞具有在Matrigel上形成血管样结构的能力,可结合植物凝集素.实时定量PCR的结果显示,诱导分化所得的细胞表达众多内皮相关基因,并且免疫荧光的结果也表明部分细胞表达内皮细胞特异性表面标志CD31.

关键词：人胚胎干细胞内皮祖内皮细胞诱导分化

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