检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2005年第1期21卷 86-89页

作者：李子健金宁一江文正张立树军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室

　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法... 详细信息

　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法检测小鼠血清抗HIV -2抗体, 用流式细胞仪测定CD4+、CD8+ T细胞亚群数, 以乳酸脱氢霉释放法检测脾特异性CTL的杀伤活性。结果: 重组质粒pVAX1 -gp105免疫组小鼠的血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及特异性CTL的杀伤活性, 均明显高于对照组, 分别为P<0. 01, P<0. 05和P<0. 01。结论: HIV -2gp105核酸疫苗能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。

关键词： HIV-2 gp105 DNA疫苗免疫应答

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H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1136-1138页

作者：陈义锋金宁一贾雷立鲁会军田明尧南文龙马鸣潇刘成宏沈国顺马海利陈晓月军事医学科学院十一所全军基因工程重点实验室长春130062

目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H... 详细信息

目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。

关键词：表位流感病毒核酸疫苗

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新型抗HIV-1重组导向制剂SL41在毕赤酵母中的表达及活性实验

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高等学校化学学报 2007年第8期28卷 1493-1496页

作者：李昌王宏金宁一金洪涛刘玉生于芳李子健张立树军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室暨南大学生命科学技术学院广州510632

以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxinA,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴... 详细信息

以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxinA,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴斯德菌毕赤酵母GS115中,经His+MutS表型鉴定、PCR分析以及G418筛选获得高拷贝重组转化子.摇瓶培养、甲醇诱导表达、SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达,表达量最高可达到47.9 mg/L.目的蛋白经初步纯化后,用于制备的HIV-1感染靶细胞复制模型进行抗体亲和力测定、细胞结合活性测定和细胞杀伤活性研究,结果显示,目的蛋白能够很好地与靶细胞模型中的HIV-1外膜蛋白gp160发生结合反应,并可介导特异的CTL反应,对靶细胞具有明显的杀伤活性,表明获得了具有生物活性的抗HIV-1重组导向制剂.

关键词： HIV-1 重组导向制剂单链抗体金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 分泌表达毕赤酵母

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抗HIV-1 gp120单链抗体和白喉毒素融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 531-534页

作者：于芳金宁一李昌刘玉生佟敬山胡宁宁金洪涛军事医学科学院十一所全军基因工程重点实验室

目的构建人源抗HIV-1单链抗体和白喉毒素融合基因的原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法通过PCR扩增,获得目前应用较多的DAB389基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAG... 详细信息

目的构建人源抗HIV-1单链抗体和白喉毒素融合基因的原核表达质粒,并诱导其在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法通过PCR扩增,获得目前应用较多的DAB389基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot方法分析鉴定。结果酶切及DNA序列测定鉴定正确。SDS-PAGE和West-ern Blot分析证实,重组质粒可表达出相对分子质量为75200的蛋白,与DT-hs120融合基因分子量一致,其表达量约占菌体总蛋白的21%,表达形式主要为包涵体。结论成功构建了DT-hS120表达载体,并获得了高效表达。

关键词： HIV-1 单链抗体基因克隆原核表达

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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/ORF6基因重组鸡痘病毒的构建与小鼠免疫试验

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 1-5页

作者：韩松金宁一鲁会军金扩世南文龙牟伟峰赵翠青军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室

本试验构建了1株表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)RF5/ORF6基因的重组鸡痘病毒,并进行了小鼠免疫实验,对其诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应的能力进行了评价。结果表... 详细信息

本试验构建了1株表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)RF5/ORF6基因的重组鸡痘病毒,并进行了小鼠免疫实验,对其诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应的能力进行了评价。结果表明,重组鸡痘病毒能够刺激免疫鼠产生特异性PRRSV ELISA抗体,促进特异性T淋巴细胞增殖。对免疫小鼠血清中细胞因子检测结果表明,IFN-γ的分泌显著提高。结果表明,所构建重组鸡痘病毒可以对小鼠起到良好的免疫效果,具有成为抗PRRSV感染新型疫苗的潜力。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5/ORF6基因鸡痘病毒载体免疫试验

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表达PRRS病毒GP5、GP3和猪IL-18的核酸疫苗的构建及实验免疫研究

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免疫学杂志 2006年第6期22卷 629-634页

作者：沈国顺金宁一秦晓光尹荣兰庄天中马鸣潇郑敏解放军军事医学科学院十一所全军基因工程重点实验室

目的获得安全有效的防治PRRSV核酸疫苗。方法采用RT-PCR方法扩增了PRRSV长春分离株ORF5、ORF3基因,并将其插入真核表达载体pVAX1、pVIR-IL-18的CMV启动子下游,构建成真核表达质粒pVAX1-ORF5-ORF3和pVIR-IL18-ORF5-ORF3,通过Westernblot及IFA等检测目的基因表达产物。同时进行了Balb/c小鼠免疫试验,检测免疫后小鼠的ELISA抗体水平和脾T淋巴细胞亚群数量。结果所构建的2个重组DNA疫苗质粒在真核细胞能进行有效的转录,并表达了目的蛋白(GP5、GP3)。pVIR-IL18-ORF5-ORF3免疫组的小鼠的ELISA抗体水平高于pVAX1-ORF5-ORF3和PRRS灭活苗免疫组,但差异不显著。CD8+T淋巴细胞亚群数量显著高于pVAX1-ORF5-ORF3和PRRS灭活苗组。结论IL-18对猪的细胞免疫功能具有明显的促进作用。

关键词： PRRSV病毒 ORF5/ORY3基因核酸疫苗免疫

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表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组禽痘病毒的构建及其抑瘤作用

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科学通报 2006年第19期51卷 2252-2257页

作者：李霄金宁一连海管国芳孙丽丽李雪梅郑洪玲军事医学科学院11所全军基因工程重点实验室吉林大学第二临床医院长春130041

来源于新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuramidinase,HN)蛋白不仅能够介导受体识别,还具有水解这些受体中N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminicacid,NAcneu,唾液酸)成分的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性.研究表明,HN蛋白可针对包括人类在内的哺乳动物产生抗肿瘤作用和免疫刺激作用.为探索HN基因在肿瘤基因治疗中的应用,构建了表达HN的重组禽痘病毒(vFV-HN),并通过体内外实验比较了其与野生型禽痘病毒(FPV)的抗肿瘤作用.实验结果表明,虽然B16肿瘤细胞对FPV感染所致细胞毒作用具有一定耐受性,但vFV-HN具有显著的抑瘤作用.并且,与FPV相比,vFV-HN免疫可显著延长荷瘤动物模型的生存期.另外,vFV-HN免疫可刺激产生B16肿瘤细胞特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应和促进CD4+和CD8+T淋巴细胞的增殖.研究还发现,vFV-HN免疫可刺激小鼠分泌IL-2和IFN-γ等Th1类细胞因子,说明vFV-HN的抑瘤作用与Th1类免疫反应相关.实验结果提示,vFV-HN免疫具有潜在的肿瘤基因治疗研究价值.

关键词：新城疫病毒 HN基因禽痘病毒载体抗肿瘤

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高致病性禽流感的流行及其预防控制

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中国免疫学杂志 2006年第1期22卷 5-12页

作者：金宁一解放军军事医学科学院十一所全军基因工程重点实验室长春130062

禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hema... 详细信息

禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hemagglutinin，H）和神经氨酸酶（Neuraminidase，N）抗原性的不同，目前至少可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1-N9）。由H5和H7亚型毒株（以H5N1和H7N7为代表）所引起的禽类疾病称为高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HeM），其发病率和病死率都很高，危害极大。

关键词：高致病性禽流感预防控制烈性传染病禽流行性感冒 A型流感病毒亚型毒株流感综合征神经氨酸酶生物武器禽类疾病

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共表达H5N1、H7N1亚型AIV HA与鸡IL-18多价重组鸡痘病毒免疫保护性研究

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中国病毒学 2005年第6期20卷 607-612页

作者：王振国金宁一马鸣潇费东亮郑敏尹革芬贾雷立金扩世夏志平金明兰军事医学科学院军事兽医研究所全军重点基因工程实验室

用本实验室构建的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18和rFPV-H5HA,经翼蹼免疫1日龄SPF鸡和7日龄商品Leghorn蛋鸡,同时以H5亚型AIV全病毒灭活疫苗作为对照。免疫后测定HI抗体效价、淋巴细胞转化指标、重组疫苗对增重的... 详细信息

用本实验室构建的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18和rFPV-H5HA,经翼蹼免疫1日龄SPF鸡和7日龄商品Leghorn蛋鸡,同时以H5亚型AIV全病毒灭活疫苗作为对照。免疫后测定HI抗体效价、淋巴细胞转化指标、重组疫苗对增重的影响、免疫后的攻毒保护效力、免疫后的抑制排毒情况。免疫后不同时间分别测定特异性抗体和淋巴细胞刺激指数。试验结果表明,3株重组鸡痘病毒株均能诱导鸡体产生血凝抑制抗体(HI);共表达鸡IL-18的rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18诱导商品蛋鸡的细胞免疫水平明显高于非共表达鸡IL-18的rFPV-H5HA。重组鸡痘疫苗免疫SPF和商品蛋鸡后第21d进行攻毒实验,rFPV- H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫攻毒保护率达10／10,rFPV-H5HA免疫攻毒保护率达9／10,与常规疫苗相当。免疫的商品蛋鸡于攻毒后7d采集泄殖腔棉试子样品,检测排毒情况。结果表明,rFPV-H5HA- IL18、rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫组在攻毒后第7d无排毒,其抑制免疫鸡排毒效果优于常规疫苗和单独表达 HA的rFPV-H5HA重组鸡痘病毒。rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA-H7HA-IL18免疫组鸡,在14日龄时的体重明显高于rFPV-H5HA免疫组和常规疫苗对照免疫组,表明共表达的鸡IL-18能降低鸡痘病毒载体对雏鸡增重的影响。

关键词：禽流感病毒重组鸡痘病毒疫苗实验免疫血凝素白介素 18

来源：评论

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人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究

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高技术通讯 2007年第11期17卷 1198-1203页

作者：张立树金宁一宋英洪宝庆马鹤雯尚玉璞王宏孙岩松金洪涛战大伟李昌军事医学科学院11所全军基因工程重点实验室长春130062 天津大学农业与生物工程学院天津300072 军事医学科学院实验动物中心北京100071 Department of Biochemistry and Molecular Biology Oklahoma State University Stillwater USA 74078 暨南大学生命科学院生物系广州510632

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）,ELISA法检测血清HIV-1抗体... 详细信息

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性。结果表明：HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高。研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答。

关键词：人免疫缺陷病毒I型人工设计重组鸡痘病毒恒河猴免疫应答

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