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α1A-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建

中国药理学与毒理学杂志 2024年

作者：王晓璇李玉蕾周培岚苏瑞斌军事科学院军事医学研究院国家安全特需药品全国重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室

目的建立α1A-肾上腺素能受体(α1A-AR)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)(EGFP-NFAT2)共表达稳转细胞株。方法 (1) pcDNA3.1-α1A-AR-FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞，经潮霉素(Hygro)200 mg·L-... 详细信息

目的建立α1A-肾上腺素能受体(α1A-AR)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)(EGFP-NFAT2)共表达稳转细胞株。方法 (1) pcDNA3.1-α1A-AR-FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞，经潮霉素(Hygro)200 mg·L-1压力筛选后加入α1A-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L-1)孵育30 min，通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度，验证EGFP-NFAT2核转位，筛选得到稳定表达α1A-AR的细胞株U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR。(2)采用实时定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞株和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α1A-AR mRNA和蛋白的表达水平。(3)将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞接种于96孔板，分别加入NE或DMED(10-8～10-5mol·L-1)孵育30 min，通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。(4)将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR稳转细胞株分为溶媒对照组、α1-AR受体拮抗剂萘派地尔(1μmol·L-1)组、NE(1μmol·L-1)组和萘派地尔+NE(两药各1μmol·L-1共孵育)组、α2-AR受体拮抗剂阿替美唑(ATI,0.1μmol·L-1)组、α2-AR受体激动剂右美托咪定(DMED,0.1μmol·L-1)组、阿替美唑+DMED(两药各0.1μmol·L-1共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L-1与DMED 0.1μmol·L-1共孵育)组。药物孵育时间均为30 min。通过高内涵筛选系统观测EGFP-NFAT2核转位，验证该稳转细胞株α1A-AR功能的特异性。结果 (1) Hygro压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞，NE 10μmol·L-1孵育后，其中50号细胞株细胞核内绿色荧光强度最强，故选定其为U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR稳转细胞株。(2) Western印迹法结果显示，U2OS-EGFPNFAT2-α1A-AR稳转细胞株中可明显表达α1A-AR蛋白，而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α1A-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示，该稳转细胞株在传代5～20代内α1A-AR mRNA均稳定表达，其α1A-AR mRNA表达水平约为对照细胞的约500～800倍。(3) NE或DMED在10-8～10-5mol·L-1浓度范围内使U2OSEGFP-NFAT2-α1A-AR稳转细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加，半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10-7和6.15×10-8mol·L-1。(4)与溶媒对照组和萘派地尔组比较，NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR稳转细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01)，而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01)。与溶媒对照组和阿替美唑组比较，DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01)，阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别，而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建了共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的稳转细胞U2OSEGFP-NFAT2-α1A-AR，可用于靶向α1A-AR化合物筛选和受体分子机制研究。

关键词： α -肾上腺素能受体活化T细胞核因子2 核转位去甲肾上腺素高内涵筛选系统

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影响麦司卡林诱导小鼠甩头反应的神经元类型筛选鉴定

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第5期38卷 353-359页

作者：王媛媛周培岚闫海涛苏瑞斌南京中医药大学江苏南京210023 军事科学院军事医学研究院国家安全特需药品全国重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室北京100850

目的探究影响5-羟色胺(5-HT)能致幻剂麦司卡林诱导小鼠甩头反应(HTR)的神经元类型。方法 (1)成年雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组和麦司卡林(1.56,3.125,6.25,12.5,25和50 mg·kg^(-1))组,每组15只,ip给予相应药物后观察30 mi... 详细信息

目的探究影响5-羟色胺(5-HT)能致幻剂麦司卡林诱导小鼠甩头反应(HTR)的神经元类型。方法 (1)成年雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组和麦司卡林(1.56,3.125,6.25,12.5,25和50 mg·kg^(-1))组,每组15只,ip给予相应药物后观察30 min内小鼠HTR次数。(2)将5-HT 2A受体(5-HT_(2A)R)基因双侧LoxP纯合子(5-HT_(2A)^(flox/flox))小鼠分别与钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα环化重组酶阳性(CaMKⅡα^(cre/+))、小清蛋白(PV)^(cre/+)、生长抑素(SOM)^(cre/+)或血管活性肠肽(VIP)^(cre/+)小鼠杂交得到不同类型神经元的5-HT_(2A)受体条件性敲除(cKO)小鼠(5-HT_(2A)^(ΔCaMKⅡα),5-HT_(2A)^(ΔPV),5-HT_(2A)^(ΔSOM)和5-HT_(2A)^(ΔVIP)),将每类cKO小鼠随机分为正常对照组和麦司卡林12.5 mg·kg^(-1)组,每组15只,ip给予相应药物后记录30 min内小鼠HTR次数。(3)将每类5-HT_(2A)R cKO小鼠随机分为正常对照组和麦司卡林12.5 mg·kg^(-1)组,每组12只,ip给予相应药物后记录30 min内小鼠自发活动。结果 (1)与正常对照组相比,麦司卡林3.125,6.25,12.5和25 mg·kg^(-1)组小鼠HTR显著增加(P<0.05,P<0.01)。(2)不同类型神经元的5-HT_(2A)R cKO小鼠中,只有5-HT_(2A)^(ΔCaMKⅡα)小鼠正常对照组与麦司卡林12.5 mg·kg^(-1)组间HTR次数无差异,而在5-HT_(2A)^(ΔPV),5-HT_(2A)^(ΔSOM)和5-HT_(2A)^(ΔVIP)小鼠中,与正常对照组相比,麦司卡林12.5 mg·kg^(-1)组小鼠HTR均显著增加(P<0.01)。(3)所有cKO小鼠正常对照组与麦司卡林12.5 mg·kg^(-1)组间自发活动均无显著差异。结论锥体神经元参与介导了麦司卡林对小鼠HTR的诱导作用。

关键词：麦司卡林甩头反应锥体神经元 5-HT_(2A)受体

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2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺对自由活动小鼠次级视觉皮质V2区γ振荡的作用

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第4期38卷 249-255页

作者：王福旗田京伟张树卓苏瑞斌烟台大学药学院山东烟台264005 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所国家安全特需药品全国重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室北京100850

目的研究5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺(DOI)对自由活动小鼠次级视觉皮质V2区场电位的影响。方法将C57BL/6J小鼠手术埋置皮质脑电(ECOG)电极,恢复7 d后ip给予1%DMSO(溶剂),记录次级视觉皮质V2区局部场电位(LFP)... 详细信息

目的研究5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺(DOI)对自由活动小鼠次级视觉皮质V2区场电位的影响。方法将C57BL/6J小鼠手术埋置皮质脑电(ECOG)电极,恢复7 d后ip给予1%DMSO(溶剂),记录次级视觉皮质V2区局部场电位(LFP)30 min;而后ip给予DOI 2.0 mg·kg^(-1),记录该区LFP 30 min;最后ip给予5-HT2AR拮抗剂氟利色林0.3 mg·kg^(-1),记录该区LFP 30 min。将数据导入Neuro Explorer软件进行频谱分析,用GraphPad Prism 8.0.2软件分析给药前后γ振荡和θ振荡功率谱密度变化,用Matlab软件分析θ振荡和γ振荡相位振幅耦合。结果与给予溶剂相比,给予DOI 2.0 mg·kg^(-1)可显著增高次级视觉皮质V2区γ振荡(30~80 Hz)功率(P<0.05)和θ振荡(4~7 Hz)功率(P<0.05),显著降低θ振荡和γ振荡相位振幅耦合调制指数(P<0.01);氟利色林可逆转DOI引起的次级视觉皮质V2区γ振荡和θ振荡功率的增高(P<0.05)。结论DOI的致幻作用可能与其增高小鼠次级视觉皮质V2区γ振荡和θ振荡功率及降低θ振荡和γ振荡相位振幅耦合有关。

关键词：次级视觉皮质 γ振荡皮质脑电 2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺局部场电位

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5-HT_(2A)受体拮抗剂治疗神经精神疾病幻觉症状研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第5期38卷 384-391页

作者：赵玉陈爱兵俞纲苏瑞斌河北科技大学化学与制药工程学院河北石家庄050018 军事科学院军事医学研究院国家安全特需药品全国重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室北京100850

帕金森病、阿尔茨海默病和精神分裂症等神经精神疾病在发展过程中会出现幻觉、妄想等精神病症状,这些症状发病率高、治愈难,严重影响患者生活质量。尽管经典抗精神病药物氯丙嗪、舒必利和奋乃静等通过拮抗多巴胺2型(D_(2))受体可治疗相... 详细信息

帕金森病、阿尔茨海默病和精神分裂症等神经精神疾病在发展过程中会出现幻觉、妄想等精神病症状,这些症状发病率高、治愈难,严重影响患者生活质量。尽管经典抗精神病药物氯丙嗪、舒必利和奋乃静等通过拮抗多巴胺2型(D_(2))受体可治疗相关症状,但也会引发不可控的锥体外系反应和高泌乳素症等不良反应。近年来研究发现,奥氮平、氯氮平、利培酮和匹莫范色林等非经典抗精神病药物通过拮抗5-羟色胺2A(5-HT_(2A))受体或同时拮抗5-HT_(2A)受体(强)和D_(2)受体(弱)治疗神经精神疾病的幻觉症状。非临床研究结果表明,在多种因素诱导的幻觉模型上,非经典抗精神病药物均表现出良好的治疗作用;临床研究进一步证实,该类药物显著改善精神病症状(以幻觉和妄想为主),尤其是匹莫范色林,其对氯氮平、利培酮不敏感或耐受的患者仍能表现出良好的治疗效果。同时,非经典抗精神病药物不良反应的发生率和严重程度较低,总体耐受性较好。本文综述了5-HT_(2A)受体拮抗剂改善神经精神疾病伴随的幻觉症状的研究进展,为设计开发新型神经精神疾病治疗药物提供参考。

关键词： 5-HT_(2A)受体拟精神病药物拮抗剂幻觉

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新型5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂ZBH2012001通过增强单胺系统功能和抑制神经免疫炎症发挥抗抑郁作用

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第5期38卷 321-334页

作者：张静雯范琼尹张苏素张杨罗亚沈鑫明罗陆遥董蓓蕾李劲草李硕董华进李行舟何宇鹏薛瑞张有志青岛大学药学院山东青岛266073 军事科学院军事医学研究院国家安全特需药品全国重点实验室神经精神药理学北京市重点实验室北京100850 大连理工大学宁波研究院浙江宁波315016

目的基于调节单胺系统功能和神经免疫炎症研究新型5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂(SNRI)ZBH2012001的抗抑郁作用机制。方法 (1)雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水)、度洛西汀组(10或20 mg·kg^(-1))、ZBH2012001组(5,10和20 mg... 详细信息

目的基于调节单胺系统功能和神经免疫炎症研究新型5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂(SNRI)ZBH2012001的抗抑郁作用机制。方法 (1)雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水)、度洛西汀组(10或20 mg·kg^(-1))、ZBH2012001组(5,10和20 mg·kg^(-1)),ig给药1 h后采用小鼠悬尾实验(TST)和强迫游泳实验(FST)2个行为绝望模型评价ZBH2012001的抗抑郁作用。(2)采用放射性配体结合实验评价ZBH2012001与人源5-HT转运蛋白(hSERT)和NE转运蛋白(hNET)的靶标亲和力。(3)雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水),度洛西汀组(10或20 mg·kg^(-1))和ZBH2012001组(5,10和20 mg·kg^(-1));ig给药1 h后采用小鼠5-羟色氨酸(5-HTP)诱导甩头实验、育亨宾毒性增强实验初步评价ZBH2012001对5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)系统功能的影响。(4)雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水+0.1%冰醋酸),利血平模型组(蒸馏水+利血平5 mg·kg^(-1)),度洛西汀(度洛西汀20 mg·kg^(-1)+利血平5 mg·kg^(-1))组及ZBH2012001(ZBH2012001 5,10和20 mg·kg^(-1)+利血平5 mg·kg^(-1))组,ig给予ZBH2012001 1 h后ip注射利血平:通过观察眼睑下垂、体温下降和运动不能行为评价ZBH2012001对利血平诱导的单胺系统功能下调的影响;采用TST评价ZBH2012001对利血平诱导的抑郁样行为的影响;采用高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)检测利血平单胺耗竭模型小鼠海马组织中单胺递质及其代谢产物的含量;采用ELISA检测利血平诱导单胺耗竭模型小鼠海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;采用Western印迹法检测利血平诱导单胺耗竭模型小鼠海马组织中离子化钙结合适配分子1(Iba-1)和核因子κB(NF-κB)的表达。结果 (1)与溶剂组相比,ZBH2012001(5,10和20 mg·kg^(-1))显著减少小鼠在TST中的不动时间(P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg^(-1))显著减少FST中的不动时间(P<0.05)。(2) ZBH2012001可竞争抑制[^(3)H]-丙咪嗪与hSERT和[^(3)H]-尼索西汀与hNET的结合,半抑制浓度(IC_(50))值分别为84.95和712.90 nmol·L^(-1)。(3)与溶剂组相比,ZBH2012001(10和20 mg·kg^(-1))可显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数(P<0.01),提高育亨宾诱导的小鼠死亡率(P<0.05,P<0.01)。(4)在利血平诱导的小鼠抑郁模型上,与溶剂组相比,利血平模型组小鼠出现眼睑下垂,体温下降和运动不能(P<0.01),悬尾不动时间显著延长(P<0.01),海马NE,5-HT和DA水平显著下降(P<0.05,P<0.01),海马5-HT代谢转换率和DA代谢转换率显著升高(P<0.01),海马TNF-α和IL-6水平显著升高(P<0.05),海马Iba-1和NF-κB表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,ZBH2012001(5,10和20 mg·kg^(-1))可显著拮抗利血平诱导的小鼠眼睑下垂和体温下降(P<0.01),ZBH2012001(10和20 mg·kg^(-1))可显著缩短利血平小鼠的悬尾不动时间(P<0.05,P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg^(-1))可显著增加利血平小鼠海马NE和5-HT的水平(P<0.05),降低5-HT代谢转换率(P<0.05),显著降低利血平小鼠海马TNF-α和IL-6的水平(P<0.05),ZBH2012001(5,10和20 mg·kg^(-1))可显著降低利血平小鼠海马Iba-1表达(P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg^(-1))可显著降低利血平小鼠海马NF-κB表达(P<0.05)。结论 ZBH2012001通过增强单胺系统功能以及抑制神经免疫炎症发挥抗抑郁作用。

关键词：重度抑郁障碍 ZBH2012001 5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂单胺神经炎症

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