检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学免疫学进展 2023年第1期51卷 26-30页

作者：张园园张平平赵爱华周亚洲杨瑞馥魏东中国食品药品检定研究院、国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室北京102629 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制鼠疫耶尔森菌F1抗原检测试剂国家参考品。方法选取5株表达F1抗原的鼠疫耶尔森菌和10株非鼠疫耶尔森菌的菌种,组建了阳性参考品和阴性参考品。经分装冻干鼠疫耶尔森菌F1抗原,组建了最低检出限参考品和重复性参考品。经4家实验... 详细信息

目的研制鼠疫耶尔森菌F1抗原检测试剂国家参考品。方法选取5株表达F1抗原的鼠疫耶尔森菌和10株非鼠疫耶尔森菌的菌种,组建了阳性参考品和阴性参考品。经分装冻干鼠疫耶尔森菌F1抗原,组建了最低检出限参考品和重复性参考品。经4家实验室共使用5种鼠疫耶尔森菌(F1)抗原检测试剂盒进行协作标定,评价参考品的均匀性和稳定性。结果本套参考品的均匀性和稳定性良好。协作标定结果显示:①阳性参考品及阴性参考品的符合率均为100%;②最低检出限参考品的检出限在10~100 ng/mL之间;③重复性参考品检测反应结果应一致(酶联免疫法、上转发光免疫层析法等CV<15%)。结论本套参考品基本符合国家关于体外诊断试剂的参考品设计要求,可用于评价相关试剂。

关键词：鼠疫耶尔森菌 F1抗原检测试剂国家参考品协作标定最低检出限符合率质量控制

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云南横断山中部山区小型兽类感染巴贝虫的分子流行病学调查

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第2期39卷 278-282页

作者：王帆别双双张云宋静段兴德熊孟韬王剑江佳富高子厚董毅杜春红大理大学公共卫生学院大理671000 云南省地方病防治所大理671000 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了解云南省横断山中部山区小型兽类感染巴贝虫的情况,分别于2013、2016和2020年在云南省横断山中部山区的剑川、云龙和洱源等3个县,采用笼日法和夹线法捕获小型兽类。通过形态学进行种类鉴定,并取脾组织,提取巴贝虫DNA,巢式PCR扩增巴... 详细信息

为了解云南省横断山中部山区小型兽类感染巴贝虫的情况,分别于2013、2016和2020年在云南省横断山中部山区的剑川、云龙和洱源等3个县,采用笼日法和夹线法捕获小型兽类。通过形态学进行种类鉴定,并取脾组织,提取巴贝虫DNA,巢式PCR扩增巴贝虫18S r RNA基因片段,目的条带经双向测序后,进行同源性分析,采用Neighbor-Joining法构建系统进化发育树。共捕获小型兽类498只,通过形态学鉴定,分属于4目8科14属27种,主要优势鼠种有齐氏姬鼠、中华姬鼠和大绒鼠,共有55份样品扩增出巴贝虫18S r RNA基因片段,总阳性率为11%(55/498)。剑川县、云龙县和洱源县的小型兽类巴贝虫阳性率分别为0.5%(1/212)、31.6%(54/171)和0(0/115)。巴贝虫阳性检出率比较高的小兽为:大耳姬鼠11/17,滇绒鼠5/10,印度长尾鼩鼱2/4。BLAST比对结果表明,本次检出的样品序列具有高度同源性,相似性达99.6%,属于田鼠巴贝虫的大津(Otsu)型。云南省横断山中部山区小型兽类存在巴贝虫感染,属于田鼠巴贝虫的Otsu型。

关键词：云南横断山区小型兽类巴贝虫调查

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用于转化生长因子β/Smad信号转导通路抑制剂筛选的慢病毒报告载体的构建

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中国药理学与毒理学杂志 2022年第4期36卷 274-281页

作者：杨翠平何园刘慧莹张硌周晨辰米志强查玉华柏长青解放军医学院北京100039 中国人民解放军总医院第五医学中心南院区呼吸与危重症医学科北京100071 中国人民解放军总医院第五医学中心南院区医学工程科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建由转化生长因子β(TGF-β)诱导的含有Smad响应元件(SmadRE)和红色荧光蛋白mCherry或荧光素酶报告基因序列的慢病毒报告载体,为筛选TGF-β/Smad信号转导通路抑制剂提供有效工具。方法合成UAS-SmadRE-Pmin-Gal4VP64-mCherry和UAS-... 详细信息

目的构建由转化生长因子β(TGF-β)诱导的含有Smad响应元件(SmadRE)和红色荧光蛋白mCherry或荧光素酶报告基因序列的慢病毒报告载体,为筛选TGF-β/Smad信号转导通路抑制剂提供有效工具。方法合成UAS-SmadRE-Pmin-Gal4VP64-mCherry和UAS-SmadRE-Pmin-Gal4VP64-lucifer⁃ase报告基因序列,分别将其插入经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后的pCDH-GFP-Puro-noCMV慢病毒质粒载体,获得响应TGF-β的含有SmadRE和mCherry或荧光素酶报告基因序列的慢病毒报告载体,分别命名为pCDH-USPG-mCherry和pCDH-USPG-luciferase。利用慢病毒三质粒包装系统在293FT细胞中分别包装出慢病毒并感染A549细胞(分别命名为USPG-mCherryA549和USPG-luciferaseA549细胞),在倒置荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,鉴定A549细胞是否被感染成功。用TGF-β(10μg·L^(-1))及其受体拮抗剂LY2109761(5μmol·L^(-1))和SB431542(10μmol·L^(-1))分别处理USPG-mCherry A549和USPG-luciferaseA549细胞24 h,倒置荧光显微镜下观察USPG-mCherryA549细胞mCherry的表达,用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测USPG-luciferaseA549细胞荧光素酶的表达,验证所构建慢病毒报告载体用于筛选TGF-β/Smad信号转导通路抑制剂的可行性。用TGF-β及其受体拮抗剂LY2109761和SB431542处理A549细胞24 h,Western印迹法检测A549细胞磷酸化Smad2/3蛋白表达,验证LY2109761和SB431542对TGF-β/Smad信号转导通路的抑制作用。结果经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析,成功构建pCDH-USPG-mCherry和pCDH-USPG-luciferase慢病毒重组质粒;分别转染293FT细胞包装出慢病毒并感染A549细胞,倒置荧光显微镜下观察到被感染的A549细胞表达GFP,表明USPGmCherryA549和USPG-luciferaseA549细胞构建成功。加入TGF-β处理24 h后,USPG-mCherryA549细胞表达mCherry,USPG-luciferaseA549细胞表达荧光素酶;而加入LY2109761和SB431542后,USPG-mCherryA549细胞几乎检测不到mCherry的表达,USPG-luciferaseA549细胞检测不到荧光素酶的表达。Western印迹法结果表明,TGF-β刺激后A549细胞中有磷酸化Smad2/3蛋白表达,加入LY2109761和SB431542后未检测到磷酸化Smad2/3蛋白表达。结论成功构建由TGF-β诱导的受Smad调控表达mCherry和荧光素酶的2个慢病毒报告载体,可有效感染目的细胞。该慢病毒报告载体可用于筛选TGF-β/Smad信号转导通路抑制剂。

关键词：转化生长因子β Smad 慢病毒报告基因受体拮抗剂

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MALDI-TOF MS技术直接鉴定无菌体液病原菌的效果评价

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国际检验医学杂志 2022年第24期43卷 3016-3021页

作者：张鞠玲康琳鲍春梅王欢贾天野陈素明庞君丽李伯安解放军总医院第五医学中心检验科北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定无菌体液病原菌快速、准确的方法。方法2020年6-10月,连续收集解放军总医院第五医学中心检验科培养阳性的血液和腹水标本418份,其中血液标本220份、腹水标本198份。应用... 详细信息

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定无菌体液病原菌快速、准确的方法。方法2020年6-10月,连续收集解放军总医院第五医学中心检验科培养阳性的血液和腹水标本418份,其中血液标本220份、腹水标本198份。应用MALDI-TOF MS对阳性培养瓶进行前处理后直接快速鉴定,并与VITEK-2全自动微生物鉴定及药敏分析仪(简称VITEK-2)鉴定结果进行比对,两种方法鉴定结果不同的用分子生物学方法确认。结果410份单菌株感染所致的阳性标本中,MALDI-TOF MS直接鉴定准确率为98.54%(404/410),VITEK-2鉴定的准确率为98.54%(404/410),两者比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.085,P>0.05)。两种方法鉴定结果不同的单菌株共12株,经分子生物学方法确认,MALDI-TOF MS直接鉴定符合6株,准确率为50.00%(6/12)。经MALDI-TOF MS直接鉴定:410株单菌株属、种水平鉴定率分别为93.17%(382/410)、82.68%(339/410);244株革兰阴性菌鉴定准确率为99.59%(243/244),属、种水平鉴定率分别为97.54%(238/244)、89.34%(218/244);149株革兰阳性菌鉴定准确率为97.32%(145/149),属、种水平鉴定率分别为87.92%(131/149)、74.50%(111/149);17株真菌鉴定准确率为94.12%(16/17),属、种水平鉴定率分别为76.47%(13/17)、58.82%(10/17);8株复合菌属、种水平鉴定率分别为75.00%(6/8)、25.00%(2/8)。结论应用MALDI-TOF MS技术对阳性培养瓶进行直接鉴定,可有效缩短检测时间,且结果准确率高,可作为脓毒症病原菌鉴定的重要手段,为临床快速、合理选用抗菌药物提供依据。

关键词：脓毒症基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱无菌体液病原菌鉴定

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数字PCR技术的文献计量及可视化分析

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军事医学 2022年第3期46卷 225-230,F0003页

作者：杜奕溥赵勇杨瑞馥宋亚军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北部战区总医院第一派驻门诊部沈阳110000

目的利用文献计量学研究方法,解析数字PCR技术相关文献的分布模式和知识结构。方法应用网络数据库检索2000年1月1日至2019年12月31日已发表的有关数字PCR的学术论文。利用书目条目共现矩阵生成器(BICOMB),对提取的主题词进行定量分析。... 详细信息

目的利用文献计量学研究方法,解析数字PCR技术相关文献的分布模式和知识结构。方法应用网络数据库检索2000年1月1日至2019年12月31日已发表的有关数字PCR的学术论文。利用书目条目共现矩阵生成器(BICOMB),对提取的主题词进行定量分析。根据生成的高频主要主题词/副主题词词篇矩阵,利用gCluto软件进行聚类分析。构建主要主题词/副主题词的共现矩阵,进行战略坐标及社会网络关系分析。结果根据检索策略,共纳入2733篇论文,年度论文发表呈现显著上升趋势。在所提取的主题词中,识别出25个高频主题词/副主题词,并将热点聚类为5类。在战略坐标图中,数字PCR技术在肺癌突变基因快速检测及原癌基因突变检测方法的建立与临床应用方面的研究处于成熟且核心位置,而在妇科肿瘤检测应用、无创产前检查以及液体活检等方面处于相对不成熟阶段,为日后的研究提供了潜在的研究空间。结论通过对近20年的数字PCR技术的文献计量学研究,可以对这一技术的发展趋势和相关应用进行总体把握,为研究人员的项目实现和运行提供借鉴。

关键词：数字PCR 文献计量学共词分析战略坐标社会关系网络分析

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副流感病毒IgM抗体AlphaLISA快速检测方法建立

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病毒学报 2021年第3期37卷 548-553页

作者：陈萱荆红波郑玉玲张力文律清宇姜永强军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京市顺义区疾病预防控制中心北京101300 安徽医科大学合肥230032

副流感病毒(Parainfluenza virus,PIV)是较为常见且广泛的社区性获得性抗原,其感染率仅次于呼吸道合胞病毒。由于PIV感染的临床表现与其他呼吸道病毒感染无特异性差别,所以早期、快速、准确诊断尤为重要。本文建立PIV IgM抗体的AlphaLIS... 详细信息

副流感病毒(Parainfluenza virus,PIV)是较为常见且广泛的社区性获得性抗原,其感染率仅次于呼吸道合胞病毒。由于PIV感染的临床表现与其他呼吸道病毒感染无特异性差别,所以早期、快速、准确诊断尤为重要。本文建立PIV IgM抗体的AlphaLISA快速检测方法,PIV特异性抗原与待测样品中PIV IgM抗体结合使供体微珠和受体微珠相互接近时,激光激发级联反应,从而产生放大的信号。通过对PIV特异性抗原生物素标记量和稀释比例的摸索,确定最佳反应体系。该方法批内和批间变异系数均小于10%,与间接免疫荧光方法比对,总符合率高于95%,且不与其他7种常见呼吸道病原体的IgM抗体发生交叉反应。AlphaLISA方法操作简便,整个反应过程只需要25 min,可快速检测PIV的IgM抗体,为早期确诊PIV感染提供有效办法。

关键词： AlphaLISA 副流感病毒(PIV) IgM抗体

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抗肉毒毒素纳米抗体的研究进展

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军事医学 2022年第11期46卷 872-876,F0003页

作者：吕若梅王菁辛文文康琳宋玉竹昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

肉毒中毒是由于人体摄入肉毒毒素引起的,发病迅速且死亡率很高。目前肉毒中毒的治疗以马血清抗毒素为主,也有多种新型基因工程抗体药物在研,纳米抗体便是其中之一。纳米抗体是近年来的研究热点,具有相对分子质量小、稳定性好、亲和力高... 详细信息

肉毒中毒是由于人体摄入肉毒毒素引起的,发病迅速且死亡率很高。目前肉毒中毒的治疗以马血清抗毒素为主,也有多种新型基因工程抗体药物在研,纳米抗体便是其中之一。纳米抗体是近年来的研究热点,具有相对分子质量小、稳定性好、亲和力高及易生产改造等特点,多项研究报道抗肉毒毒素纳米抗体具有良好的中和效果。纳米抗体用于临床治疗的主要问题是半衰期太短,目前延长纳米抗体半衰期的方法包括偶联聚乙二醇(PEG)、利用红细胞载体、融合免疫球蛋白G的Fc段及人血清白蛋白(HSA)等。该文对肉毒毒素纳米抗体的筛选、表达及改造方法进行了综述,为后续肉毒毒素纳米抗体的研究提供参考。

关键词：纳米抗体单域抗体肉毒毒素半衰期异二聚体

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多形核中性粒细胞在铜绿假单胞菌气溶胶肺递送感染小鼠急性肺损伤中的作用研究

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军事医学 2022年第10期46卷 749-757页

作者：肖楠张志鹏李莎邓梦芸王一风宗福良苏铎周冬生杨慧盈北京化工大学生命科学与技术学院北京100020 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探究多形核中性粒细胞(PMN)在铜绿假单胞菌(PA)气溶胶肺递送感染小鼠急性肺损伤(ALI)过程中的作用。方法腹腔注射Gr-1抗体构建PMN耗竭小鼠模型,采用流式细胞术和免疫荧光检测PMN的耗竭效果。感染后观察小鼠存活状况,评价肺病理程... 详细信息

目的探究多形核中性粒细胞(PMN)在铜绿假单胞菌(PA)气溶胶肺递送感染小鼠急性肺损伤(ALI)过程中的作用。方法腹腔注射Gr-1抗体构建PMN耗竭小鼠模型,采用流式细胞术和免疫荧光检测PMN的耗竭效果。感染后观察小鼠存活状况,评价肺病理程度,检测肺细菌载量和肺泡灌洗液中细胞因子浓度变化,探究PMN在ALI过程中的作用。结果流式及免疫荧光结果显示,PMN耗竭小鼠模型构建成功。与对照组小鼠相比,PMN耗竭组小鼠感染后死亡率显著增加,肺部细菌载量增多;肺中仅有少量炎性细胞浸润,肺泡腔中可见大量细菌;肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等促炎因子表达上调,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等趋化因子表达上调,IL-4、IL-10、IL-13等抑炎因子表达上调。结论在感染过程中,PMN的募集有效抑制了细菌繁殖,PMN耗竭后小鼠多种细胞因子代偿性升高,PMN在ALI过程中可能抑制炎症过度发展,是炎症和免疫反应的重要调节剂。

关键词：铜绿假单胞菌多形核中性粒细胞气溶胶肺递送急性肺损伤

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病毒现场快速检测研究进展

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军事医学 2022年第2期46卷 150-154,F0003页

作者：唐盈康晓平军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

新发突发性传染病防控中病毒快速检测至关重要。传统的病毒检测方法存在实验操作复杂、实验环境要求高和检测周期长等不足,目前的发展趋势为即时检测,操作简单、检测周期短、无需复杂的仪器设备,有利于基层和偏远、资源匮乏地区开展。... 详细信息

新发突发性传染病防控中病毒快速检测至关重要。传统的病毒检测方法存在实验操作复杂、实验环境要求高和检测周期长等不足,目前的发展趋势为即时检测,操作简单、检测周期短、无需复杂的仪器设备,有利于基层和偏远、资源匮乏地区开展。该文主要综述了病毒现场快速检测技术及其应用研究进展。

关键词：病毒现场快速检测免疫学技术分子诊断技术

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次氯酸钠消毒剂灭活新冠病毒的实验研究

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军事医学 2022年第3期46卷 192-196页

作者：刘永健李天一邓永强李韩平帖金凤王晓林贾磊韩婧婉李林李敬云军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军疾病预防控制中心北京100071

目的评估新冠病毒(SARS-CoV-2)对次氯酸钠消毒剂的敏感性,为新冠病毒疫情防控中合理使用次氯酸钠消毒剂提供依据。方法购买3个品牌84消毒液,用碘量法测定有效氯含量,稀释成不同的浓度,分别取200μl与等量滴度为(5.82±0.14)lgTCID_(... 详细信息

目的评估新冠病毒(SARS-CoV-2)对次氯酸钠消毒剂的敏感性,为新冠病毒疫情防控中合理使用次氯酸钠消毒剂提供依据。方法购买3个品牌84消毒液,用碘量法测定有效氯含量,稀释成不同的浓度,分别取200μl与等量滴度为(5.82±0.14)lgTCID_(50)/ml的新冠病毒(BetaCoV/Beijing/AMMS01/2020株)上清液混匀,作用特定时间后,取样100μl,加900μl中和剂终止消毒剂作用。用Vero细胞滴定病毒,每个稀释度做4复孔,用ReedMuench法计算病毒的感染性滴度(TCID_(50)),重复3次。结果由于中和产物的细胞毒作用,病毒滴度的检测限为2.8 lgTCID_(50)/ml。有效氯浓度为50、100、200 mg/L的消毒剂作用10 min均不能灭活新冠病毒;有效氯浓度为300 mg/L的3种消毒剂作用30 min均可检出感染性病毒;有效氯浓度为400和500 mg/L的3种消毒剂完全灭活病毒的时间有较大差异,最长灭活时间分别为30 min以上和15 min;有效氯浓度为600 mg/L的3种消毒剂作用5 min以上均可完全灭活新冠病毒。结论新冠病毒对次氯酸钠具有一定的抵抗力,为确保消毒效果,有效氯浓度为500 mg/L需作用15 min以上、有效氯浓度为600 mg/L需作用5 min以上。建议按照世界卫生组织的指南,使用有效氯浓度为1000mg/L的次氯酸钠消毒剂。

关键词：新冠病毒次氯酸钠消毒

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